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Sox5与肿瘤的相关性研究进展
Sox5定位于12p12.1,共包含29个外显子,可转录出5个异构体,其中L-SOX5A相对研究较多,其功能众多,如调节胚胎发育,决定细胞分化,还参与多种肿瘤的发生,如淋巴瘤、乳腺癌、胶质瘤和前列腺癌等.
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敲低SOX5对骨关节炎软骨细胞生物学功能的影响
目的 探讨转录因子SOX5在骨关节炎软骨细胞中的生物学功能.方法 分离培养人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞;运用脂质体2000转染法将siSOX5转染OA软骨细胞(OA-siSOX5),以转染NCsiRNA为阴性对照(OA-NCsiRNA);运用Real time PCR检测转染的OA软骨细胞中SOX5、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)、II型胶原(COL2A1)及蛋白多糖(ACAN)mRNA的表达水平;酶联免疫法(ELISA)检测OA软骨细胞培养上清中IL-6和IL-1β 浓度;Western blot检测SOX5、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-13蛋白表达水平;运用AnnexinV-FITC及流式细胞术检测细胞凋亡.结果 OA-siSOX5细胞中IL-6(0.72±0.05)和IL-1βmRNA(0.64±0.07)表达显著低于OA-NCsiRNA细胞(1.32±0.08、1.64±0.09)(P<0.05);COL2A1(1.27±0.08)和ACAN mRNA(2.38±0.17)显著高于OA-NCsiRNA细胞(0.58±0.04,1.25±0.10),(P<0.05);OA-siSOX5细胞中IL-6(175.2±14.5)pg/ml和IL-1β(102.6±20.3)pg/ml浓度显著低于OA-NCsiRNA细胞[(584.6±74.5)pg/ml和(268.4±25.3)pg/ml)](P<0.05);细胞凋亡率OA-siSOX5[(3.04±0.86)%]显著低于OA-NCsiRNA细胞[(18.35±2.74)%](P<0.05);OA-siSOX5细胞中MMP-1(0.53±0.05)和MMP-13蛋白水平(0.46±0.08)明显低于OA-NCsiRNA细胞(1.95±0.11、2.48±0.24)(P<0.05).结论 下调SOX5表达可能通过抑制基质金属蛋白酶的表达、促进细胞外基质的合成与分泌、抑制细胞凋亡和炎症反应进而缓减OA的发展.
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SOX5在系统性红斑狼疮患者的表达及与IL-17的相关性
目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)人群和正常对照人群SOX5基因表达的差异,探讨其在SLE发病中的意义.方法 收集20例系统性红斑狼疮患者和15例健康体检者(对照组)的外周血和临床资料.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR)检测各个样本外周血单个核细胞中SOX5mRNA和IL-17mRNA的表达水平,计算SLE组和正常对照组的SOX5mRNA表达水平的差异(以-△△ CT值表示).结果 SOX5mRNA在SLE组的表达较健康对照组的表达显著增高(P<0.05),且SOX5mRNA和IL-17mRNA有一定的相关性(Spearman r=0.45,P<0.05).结论 SOX5可能作为炎性反应的正向调控基因参与了系统性红斑狼疮的免疫反应过程.
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Sox5促进胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化
目的:探讨Sox5对胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化的影响.方法:人正常胰腺细胞HPDE6-C7(HPDE6-C7组)、胰腺癌细胞PANC-1 (PANC-1组)和AsPC-1(AsPC-1组)正常培养至对数生长期,采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中Sox5 mRNA和蛋白水平.将shSox5、shControl、pcDNA 3.1-Sox5和载体pcDNA 3.1以脂质体法转染胰腺癌细胞PANC-1,分别标记为shSox5组、shControl组、pcDNA 3.1-Sox5组和Scrambled组,采用qRT-PCR法检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-eadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA 表达;Western blot检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的蛋白表达;Transwell 法检测各组细胞的迁移和侵袭.结果:与HPDE6-C7组相比,PANC-1组和AsPC-1组中Sox5 mRNA和蛋白水平均升高(P＜0.01);与shControl组比较,shSox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著降低(P＜0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著升高(P＜0.01);与Scrambled组比较,pcDNA-3.1-Sox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著升高(P＜0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著降低(P＜0.01).结论:Sox5可促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,将为胰腺癌的靶点治疗提供新靶标.
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SOX5对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 观察Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(sex determining region Y-box protein 5,SOX5)对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭能力的影响,探讨其在骨肉瘤发病和转移中的作用.方法 本研究为前瞻性研究,通过脂质体介导的基因转染技术将SOX5的三个不同的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2和siSOX5-3)瞬时转染骨肉瘤细胞MG63,转染后48 h检测SOX5的mRNA和蛋白表达,从中挑选出干扰效果明显的siRNA.进而采用博伊登室实验方法分别对干扰前后的骨肉瘤细胞MG63进行体外细胞迁移和侵袭测定,采用免疫印迹(Western blot)检测迁移和侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶(matrix metallproteinase,MMP)-2、MMP-9、Twist1和Snail1)]的表达水平.结果 3条针对人的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2、siSOX5-3)均能够降低SOX5 mRNA及蛋白水平表达,其中siSOX5-3干扰效果明显.siSOX5-3干扰组的迁移细胞数为(52±5)较对照组的(107±9)显著减少(P<0.05),siSOX5-3干扰组的侵袭细胞数为(27±4)较对照组的(71±2)显著减少(P<0.05).Western blot结果显示siSOX5-3干扰组的侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9、Twist1和Snail1)的表达均较对照组显著降低(P<0.05).结论SOX5 RNA干扰能显著降低骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力,SOX5能促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭.
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SOX5、SOX6基因在豚鼠耳蜗中的表达及意义
目的探讨SOX5、SOX6基因在豚鼠耳蜗中的表达及该基因对耳蜗发育的影响与作用.方法活体解剖取出豚鼠耳蜗、肝脏、脑、肾脏和心脏等组织,应用Primer 5.0软件设计SOX5、SOX6引物.使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测SOX5、SOX6基因的表达情况.结果 SOX5基因在不同组织中均有表达,耳蜗中的表达相对较弱.SOX5和SOX6基因均在耳蜗组织表达.结论 SOX5、SOX6基因的表达具有一定的组织特异性,两者均在耳蜗中的表达提示SOX5、SOX6基因对耳蜗的骨性组织发育可能存在一定作用.
关键词： 基因表达 逆转录-聚合酶链反应 Sox5 SOX6 耳蜗 -
重组Sox5蛋白cDNA克隆与真核表达载体的构建
目的克隆人类睾丸组织特异的Sox5基因全长cDNA,构建重组Sox5真核表达载体pcDNA3-Sox5.方法从成人睾丸组织提取总mRNA,采用RT-PCR技术扩增SoxScDNA片段,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3真核表达质粒,双酶切及测序鉴定重组质粒.结果经RT-PCR获得1.1kb的产物,连接重组后经双酶切筛选阳性克隆,DNA测序验证,确定成功筛选出真核表达栽体pcDNA3Sox5.结论成功构建人Sox5基因全长cDNA真核表达载体,为进一步探索精细胞特异表达的Soy5转录因子是否参与ZNF230的转录调控打下了基础.
