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槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达
目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制.方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组.槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液.RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量.结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P＜0.01),IκBα mRNA低于同时间点对照组(P＜0.01或P＜0.05)；槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P＜0.01或P＜0.05),而IκBα mRNA则显著升高(P＜0.01或P ＜0.05).结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一.
关键词： 槐定碱 LPS RAW264. 7细胞 NF-κB -
热休克蛋白70激动剂SW02对脂多糖诱导的巨噬细胞iNOS表达的调控及机制
目的：观察热休克蛋白70( Hsp70)激动剂SW02对脂多糖(LPS)诱导的 RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶( iNOS)表达及一氧化氮( NO)生成的作用,并探讨其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,将细胞随机分为DMSO组、DMSO+LPS(1 mg·L-1)组、SW02组和SW02+LPS(1 mg·L-1)组。 Western blot法测定蛋白表达；Griess试剂法测定NO含量；实时定量PCR法测定iNOS mRNA表达；染色质免疫共沉淀法( ChIP)检测核因子κB( NF-κB)与iNOS启动子结合能力变化。结果 SW02明显抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS蛋白、mRNA表达和NO释放( SW02+LPS组iNOS表达量和NO生成量明显低于DMSO+LPS组,P<0．01或P<0．05)；SW02不影响由LPS诱导的RAW264.7细胞κB-α抑制子( IκB-α)降解( SW02+LPS组IκB-α表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0．05)和NF-κB入核( SW02+LPS组细胞质、细胞核NF-κB表达量与 DMSO +LPS 组比差异无显著性, P >0．05)；SW02明显抑制由LPS诱导的NF-κB与iNOS启动子结合( SW02+LPS组NF-κB与iNOS启动子结合量明显低于DMSO+LPS组,P<0．05)。结论 SW02抑制巨噬细胞iN-OS表达和NO生成,其机制可能与抑制NF-κB与iNOS启动子结合有关。
