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热休克蛋白70激动剂SW02对脂多糖诱导的巨噬细胞iNOS表达的调控及机制
目的:观察热休克蛋白70( Hsp70)激动剂SW02对脂多糖(LPS)诱导的 RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶( iNOS)表达及一氧化氮( NO)生成的作用,并探讨其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,将细胞随机分为DMSO组、DMSO+LPS(1 mg·L-1)组、SW02组和SW02+LPS(1 mg·L-1)组。 Western blot法测定蛋白表达;Griess试剂法测定NO含量;实时定量PCR法测定iNOS mRNA表达;染色质免疫共沉淀法( ChIP)检测核因子κB( NF-κB)与iNOS启动子结合能力变化。结果 SW02明显抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS蛋白、mRNA表达和NO释放( SW02+LPS组iNOS表达量和NO生成量明显低于DMSO+LPS组,P<0.01或P<0.05);SW02不影响由LPS诱导的RAW264.7细胞κB-α抑制子( IκB-α)降解( SW02+LPS组IκB-α表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0.05)和NF-κB入核( SW02+LPS组细胞质、细胞核NF-κB表达量与 DMSO +LPS 组比差异无显著性, P >0.05);SW02明显抑制由LPS诱导的NF-κB与iNOS启动子结合( SW02+LPS组NF-κB与iNOS启动子结合量明显低于DMSO+LPS组,P<0.05)。结论 SW02抑制巨噬细胞iN-OS表达和NO生成,其机制可能与抑制NF-κB与iNOS启动子结合有关。