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弱精症患者低活力精子中HES1的表达及调控
目的 分析HES1在弱精症患者低活力精子中的表达及调控.方法 收集30份弱精症患者精液标本和20份成年健康有生育能力男性的精液标本,提取精子RNA,制备生物素标记的cDNA探针,与含有30 968个探针的Phalanx OneArray~(TM)芯片杂交,分析男性精子中HES1基因的表达情况;再用RT-PCR,分析hsa-miR-487a和hsa-miR-193b在精子中的表达,从精子mRNA表达谱中搜索hsa-miR-487a和hsa-miR-193b靶基因的表达.结果 HES1在低活力精子中的表达上调,高于在高活力精子中的表达.hsa-miR-487a和hsa-miR-193b在低活力精子中的表达量分别是高活力精子的0.43倍和2.19倍.结论 HES1在低活力精子中的表达上调,可能通过hsa-miR-487a和hsa-miR193b的调节来影响精子的活力.
关键词： 弱精症 精子 HES1 hsa-miR-487a hsa-miR-193b -
喉鳞状细胞癌SMAD3和hsa-miR-193b表达与靶向关系验证
目的 Hsa-miR-193b与LSCC的发生发展密切相关.本研究探讨LSCC中miR-193b与SMAD3的表达及二者的靶向调控关系.方法 qRT-PCR检测山西医科大学第一医院2013-01-03-2014-06-30来源的20例喉鳞状细胞癌(laryngal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及癌旁正常黏膜组织中miR-193b的表达,qRT-PCR、蛋白质印迹法检测SMAD3的表达.构建野生型和突变型SMAD3 3'UTR载体,与miR-193bmimics或NC共转染HEK-293T细胞,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果 qRT-PCR检测结果,癌组织miR-193b总表达为11.50±6.289,癌旁正常组织为1.00±0.000,与癌旁正常组织相比,miR-193b在LSCC组织中的表达上调且差异有统计学意义,t=7.466,P＜0.001;癌组织SMAD3表达为0.402±0.201,癌旁正常组织表达为1.00±0.000,SMAD3在LSCC组织中的表达降低且差异有统计学意义,t=13.31,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果,癌组织SMAD3表达为1.57±0.127,癌旁正常组织表达为3.68±0.198,SMAD3在癌组织的表达降低且差异有统计学意义,t=48.40,P＜0.001.经测序,成功构建野生型与突变型SMAD3 3'UTR载体,共转染后各组样品经检测显示,miR-193b+ mutSMAD3组荧光素酶活性变化倍数为1.042士0.100 8,NC+ mutSMAD3组为1.102±0.070 6,差异无统计学意义(t=0.854,P=0.442),miR-193b+SMAD3组荧光素酶活性变化倍数为0.449±0.047 2,NC+ SMAD3组为1.124±0.014 1,miR-193b+SMAD3组比NC+SMAD3组荧光素酶活性明显降低(t=31.89,P=0.001),说明miR-193b可以与SMAD3 3'UTR结合.结论 LSCC组织中miR-193b表达上调,SMAD3表达明显降低.SMAD3是miR-193b的直接调控靶基因.
关键词： 喉癌 鳞状细胞癌 smad3 hsa-miR-193b -
Hsa-miR-193b对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生物学功能的影响
目的:研究hsa-miR-193b对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡等生物学功能的作用.方法:实验分组为Hep-2组、NC组(Hep-2细胞+miR-193b inhibitor NC)、miR-193b抑制组(Hep-2细胞+miR-193b inhibitor).采用qRT-PCR检测miR-193b的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期以及凋亡,Transwell检测细胞迁移能力.采用生物信息学技术进行靶基因预测,Western blot检测转染miR-193b后Hep-2细胞SMAD3的表达情况.结果:转染miR-193b inhibitor后,miR-193b抑制组细胞miR-193b的表达显著降低,与Hep-2组和NC组比较差异有统计学意义(P＜0.01),后2组miR-193b表达量差异无统计学意义(P＞0.05).和NC组比较,miR-193b抑制组的Hep-2细胞增殖能力在24、48和72 h显著降低(P＜0.05或P＜0.01),G1/S期的细胞比例增多(P＜0.01),细胞凋亡明显增多(P＜0.01),细胞迁移能力显著降低(P＜0.01).生物学信息分析预测miR-193b靶基因为SMAD3,Hep-2细胞转染miR-193b后与NC组相比,SMAD3蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论:miR-193b抑制剂能够抑制Hep-2细胞的增殖、迁移,促进细胞凋亡,提示miR-193b对喉鳞状细胞癌起到“癌基因”的作用,有望成为临床治疗的新靶点.
关键词： 喉肿瘤 鳞状细胞癌 hsa-miR-193b 增殖 凋亡 -
Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力
目的 探讨Has-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制.方法将HsamiR-193b模拟物(mimics)、Has-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功；Transwell小室法检测转染Has-miR-193b mimics后HEC-IB细胞的侵袭能力；通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Has-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因；Real-time PCR检测转染Has-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平；Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平.结果 ①Has-miR-193b mimics、Has-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Has-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).②转染Has-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P＜0.05).③转染后,靶基因GRB7蛋白Has-miR-193b mimics组表达下降(P＜0.05)、Has-miR-193b inhibitor组表达增加(P＜0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化.结论在HEC-1H中转染Has-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭.
关键词： 子宫内膜癌 hsa-miR-193b Grb7 侵袭
