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利用焦磷酸测序技术检测H7N9禽流感病毒NA基因分子标签
本研究旨在建立H7N9亚型禽流感病毒NA基因分子标签的焦磷酸测序检测方法,用于H7N9型禽流感病毒的快速检测和鉴定.通过对公开发表的H7N9亚型禽流感病毒NA基因序列进行比对,发现分离株在NA基因特定区域缺失的15个核苷酸可作为H7N9亚型禽流感病毒NA基因特异性的分子标签.通过设计覆盖此区域的特异性扩增引物和测序引物,建立了H7N9型禽流感病毒NA基因焦磷酸测序检测方法.基于NA基因特定缺失区域建立的焦磷酸测序技术能用于H7N9亚型禽流感病毒国内分离株NA基因的快速检测和鉴定,且具有较好的特异性和重复性.通过对3株H7N9亚型禽流感病毒分离株的检测,表明3株H7N9亚型禽流感病毒的NA基因均存在15个核苷酸缺失的分子标签.本研究建立的H7N9亚型禽流感病毒NA焦磷酸测序检测方法,可用于H7N9禽流感病毒的检测和鉴定.
关键词： 焦磷酸测序 H7N9亚型禽流感病毒 NA基因 分子标签 -
绿色荧光蛋白干扰素-α2b融合基因的构建与表达
干扰素-α2b(IFN-α2b)作为治疗慢性乙肝、丙肝的首选药物,已成为医药生物技术产业的重要产品.目前研究IFN与其受体的作用关系多采用酶联免疫吸附法,间接的分析IFN或测定其受体被封闭的情况,但在细胞水平直观实时的检测IFN与其受体相互作用关系的研究报道甚少.本研究利用来源于维多利亚水母的绿色荧光蛋白(GFP)作为分子标签,构建含有GFP与IFN-α2b融合基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.
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癌基因组学研究新进展
第六届人类基因组太平洋会议与第七届亚太人类遗传学大会联合会议于2006年3月6-1O日在我国台湾省台北市召开,来自亚太地区15个国家和地区的数百名科学家会聚一堂,讨论相关领域共同感兴趣的学术问题,交流各自的研究成果,总结现阶段的新进展,提出今后发展的走向,商讨合作事宜.我国约20位有关领域的科学家参加了此次会议.现以个人之管见,简要介绍此次大会的基本情况,重点介绍与癌基因组学与癌遗传学相关的内容,以供参考.
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大肠癌转移相关分子标签的筛选
目的:筛选与转移相关的大肠癌分子标签.方法:本文通过对大肠癌表达谱数据进行分析,按照表达谱中大肠癌转移情况,组织学分化程度以及患者生存时间进行显著性分析,将与大肠癌转移相关的具有显著性意义的基因群进行聚类,通过主成分分析以及自组织映射的方法计算出差异表达基因中,起着主体分类作用的基因群.结果:筛选出与肿瘤组织分化程度以及患者生存时间相关的差异表达基因,进行功能富集,并筛选出了一批与大肠癌转移密切相关的重要基因,这些基因对大肠癌早期诊断,及时治疗,预后评估有着重要意义.结论:细胞代谢,趋化因子信号通路和细胞因子受体等分子事件与大肠癌分化程度密切相关,是否发生转移与大肠癌的预后生存期密切相关.
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特异性标记EIAV感染性克隆的构建及鉴定
用FLAGTM或6 His对EIAV疫苗株全基因感染性克隆pFD3的S2分子进行分子标记,以建立EIAV疫苗株与野毒株感染鉴别诊断的方法.标记产物pFD3-FLAG和pFD3-HISADD转染驴胎皮细胞 (FDD)后收获衍生病毒并用逆转录酶活性检测和PCR方法确定其感染性. 在FDD细胞上盲传至第五代后收获细胞培养上清再感染驴单核巨噬细胞 (DL),盲传三代后pFD3-FLAG RT酶活性显示弱阳性,未见明显的细胞病变;pFD3-HISADD为强阳性,且细胞病变效应明显,在电镜下可见明显的病毒颗粒.与父本克隆pFD3相比,在细胞水平上二者复制特性有明显的不同.证明在DL细胞上S2基因的完整性是病毒复制很重要的因素.
