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禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布
本研究旨在掌握禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)感染SPF鸡后在体内的动态分布.针对IBV流行毒Jin-13株N基因设计并合成一对引物,建立了检测IBV Sybr green Ⅰ荧光定量PCR方法.人工感染90日龄SPF鸡1、4、7、10、14、21、28和35d后检测心脏、肝脏、脾脏、肺脏、气管、肾脏和十二指肠等内脏器官病毒载量,以研究体内病毒复制动态及分布情况.该方法在7.77×108～100拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中7.7拷贝/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR方法敏感100倍.结果表明鸡群从感染后第4日开始发病,各组织器官内IBV病毒含量逐渐升高,至第7日肾脏病毒含量高达到7.13×104拷贝/μL,其余依次为气管、肺脏、脾脏、心脏、肝脏和十二指肠.攻毒10日后各组织内含量均逐渐降低.肝脏于攻毒后21日时已检测不到IBV.于攻毒后第28日肾脏、气管和肺脏仍能检测到IBV.心脏可持续带毒35d.本研究从组织嗜性和动态分布方面为解释了IBV Jin-13株感染后的持续排毒及其严重的致肾损伤现象.
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鸡脾转移因子对鸡肠道细胞因子的影响
肠道既是消化吸收器官,也是体内大且功能复杂的免疫器官,肠道免疫系统能够抵抗病原体入侵有机体,并且能够限制肠道微生物菌群的水平,与家禽的生长发育密切相关。鸡脾转移因子( Transfer Factor,TF)是具有免疫活性的T淋巴细胞在抗原或丝裂原的刺激下释放的一类可透析的小分子多肽,有研究表明鸡脾转移因子( TF)能显著提高雏鸡体液免疫和细胞免疫,改善胃肠菌群平衡,调节肠道黏膜屏障,有效阻挡病原微生物的入侵,提高生产性能,但其作用机制方面依然存在很多盲点。肠道通过分泌IL-10、TNF-α、IL-2等多种细胞因子维持黏膜屏障完整性,发挥重要免疫功能。本试验采用鸡脾转移因子(1mg/mL)灌服SPF鸡,自5日龄开始从饮水中加入鸡脾转移因子,分为正常对照组,4个剂量组(分别为0.05 mL/只、0.10 ml/只、0.25ml/只、1.00ml/只),饲喂1周,12日龄时取材,取十二指肠、空肠、回肠、直肠,ELISA方法检测肠组织中抗炎因子IL-10,促炎因子TNF-α的含量,以探究鸡脾转移因子对SPF鸡肠道细胞因子的影响。结果：在连续使用鸡脾转移因子一周后,各肠段的抗炎因子IL-10的浓度较对照组有所升高,十二指肠中剂量组0.10 mL/只的IL-10的浓度高,比对照组升高了14.72%( P=0.011)差异显著。空肠中的IL-10含量0.25 mL/只、1.00 mL/只剂量组的IL-10浓度高于对照组,分别升高了8.08%( P=0.082),12.74%( P=0.000)。回肠中1.00mL/只剂量组,IL-10含量高,比对照组显著升高了18.72%(P=0.000)。直肠中可见IL-10的含量随着鸡脾转移因子使用剂量的升高而升高,1.00 mL/只剂量组IL-10浓度高。各肠段的促炎因子TNF-α的浓度较对照组降低,十二指肠中0.25 mL/只剂量组TNF-α较对照组显著降低了18.96%( P=0.033),其他剂量组均比对照组低。空肠中0.05mL/只、0.10mL/只剂量组显著低于对照组,且差异显著。回肠中的TNF-α浓度在使用鸡脾转移因子后显著降低,但是4个剂量组间差异不显著。直肠中1.00 mL/只剂量组较对照组降低了11.73%( P=0.006)。结论：5日龄SPF雏鸡连续灌服鸡脾转移因子一周后可有效升高肠道内抗炎因子IL-10的含量,降低促炎因子TNF-α含量。
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不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病的抗性研究
目的 探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据.方法 选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A) RAV-1毒株实验,G8系雏鸡(6羽)作为对照.攻毒后对各鸡系的死亡率、病变率、血液中抗体水平以及外周血淋巴细胞的病毒载量等与抗性相关指标进行动态评估与统计学分析,终确定抗性较强和较弱的鸡系.结果 G5系病变率和死亡率均明显高于其它攻毒鸡系,G1系低,G6和G8系居中;G1系在攻毒后第5周开始,抗体效价一直高于其它鸡系,而G5系则低,并且在攻毒后第8周至11周和第15周至18周,G1系的抗体效价显著高于G5系(P ＜0.05);G1系的病毒载量在攻毒后第7周至15周,低于其它鸡系,而G5系自攻毒后第9周至13周,极显著高于G1系(P＜0.01).结论 G1系在感染ALV后,死亡率较低,病变轻微,抗体保护力较强,且病毒的增殖较慢,因而其对AL具有较强的抗性,而G5系则相反较为易感.本研究不仅为建立AL抗性较强和较易感的鸡系提供了实验依据,而且对进一步阐明鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)多态性与AL抗病性的关系有重要作用.
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不同蛋种鸡饲料对SPF鸡群产蛋性能的影响
为了提高SPF鸡的生产能力和质量,在相同的SPF鸡饲养条件下,选择分别来源于北京正大和北京科澳协力生产的全价营养蛋种鸡饲料,经高压消毒后,饲喂品种相同的SPF种鸡,结果显示两个鸡群在生产性能方面存在明显差异(p＜0.01).其中饲喂北京科澳协力饲料的SPF鸡群的产蛋率和利用率都明显高于另一个鸡群,主要表现在SPF鸡群开产早期的蛋重上和产蛋高峰期后产蛋率的维持上.
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SPF鸡生物洁净室大修经验浅谈
对SPF鸡舍运行的环境技术参数进行监测,确认是否合乎洁净室净化标准.大修内容主要包括清理鸡舍,消毒,更换过滤器和维修中央空调等.
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用普通电热灭菌柜替代脉动真空灭菌柜灭菌饲料
用普通蒸汽灭菌柜代替投资成本和使用成本都非常高的脉动真空灭菌柜,对SPF鸡用饲料进行灭菌,效果毫不亚于后者,但需事先将饲料加水拌匀.该方案是我所在保持或提高鸡群净化质量的前提下,降低SPF鸡生物洁净室运行成本而进行探索的途径之一.
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夏季SPF产蛋鸡的限饲
为了减少无特定病原(SPF)蛋鸡的猝死率,提高产蛋率,对SPF蛋鸡产蛋中后期进行了限饲试验,每只鸡日食量由125g减少到107g.结果表明试验组再未出现猝死现象,且其产蛋率平均比对照组高约5%.
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SPF鸡舍屏障设施优化运行的自动化改装及研究
SPF鸡舍的净化质量和节能问题一直是困扰SPF鸡生产领域的难题,通过对鸡舍屏障设施自动化改装和研究,使达到净化指标的屏障设施更优化、更节能.
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SPF鸡在禽病防控中的应用
SPF鸡即无特定病原鸡,其来源清晰并对其携带微生物进行严格控制.我国SPF鸡通过品种选育、净化设施饲养、微生物监测,经过近50年的发展,SPF鸡不仅在生命科学研究等众多领域,而且在禽类等动物疫病预防与控制中发挥了无可替代的作用,尤其是禽类疫病研究、疫苗生产和评价、疫病监测和诊断试剂制备,以及禽病治疗用制品的生产等方面.
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SPF鸡微生物质量控制标准与监测技术
SPF鸡及鸡胚被大量用于人和兽用生物制品的生产基质和质量检定材料,在农业科学、医学科学和生物制品等领域的研究、生产、检定工作中有非常重要的作用.本文总结了SPF鸡及鸡胚的微生物质量控制标准、质量监测技术,以及我国SPF鸡培育和产业发展概况.
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SPF鸡的饲养与鸡场的管理
SPF鸡是指生长在屏障系统或隔离器中,无国际、国内(尤其是国内)流行的鸡主要传染性病原,具有良好生长和繁殖性能的鸡群,其所产种蛋称为SPF蛋.
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实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用
目的 探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用.方法 采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数.结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3％,其余病毒检测均为阴性；普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9％,ALV 10份阳性,检出率14.3％.结论 荧光定量PCR检测方法低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测.
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从兽用生物制品企业角度看我国SPF鸡质量控制现状
SPF鸡和鸡胚是兽用生物制品生产和检验环节的主要原材料,直接影响到产品质量和检验结果,2010年版《中国兽药典》(三部)附录《生产、检验用动物标准》明确要求,用于禽类制品毒种制备与鉴定、病毒活疫苗生产与检验、灭活疫苗检验的鸡和鸡胚应符合国家无特定病原体(SPF级)动物标准.SPF鸡的质量控制包括遗传、微生物、环境和营养四个方面,本文主要从兽用生物制品生产企业的角度,分析国内SPF鸡质控指标,结合禽用活疫苗生产和检验实践,提出对SPF鸡质量控制的思考和建议.
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成年SPF鸡胃肠道中芽胞杆菌的分离与部分生物学特性鉴定
目的鉴定从SPF鸡分离出的芽胞杆菌的生物学特性.方法从成年SPF鸡胃肠道的不同部位选择性分离13株芽胞杆菌,并进行生物学特性检测.结果 (1)所有菌株均能在含5%、10%和15%NaCl的LB平板上生长,其中11株能在含6%NaCl的LB平板上生长,7株能在含7%NaCl的LB平板上生长.(2)2株能在pH 4.0的LB平板上生长,8株菌能在pH 5.0生长;所有菌株均能在pH 6.0～10生长,其中12株能在pH 11生长,11株能在pH 12生长,而不能在pH 13～14生长.(3)所有菌株在75℃水浴中均能活存2～5 h;11株能活存10 h,9株能活存27 h.所有菌株在100℃水浴中加温,均能活存0.5～2 h,其中11株能活存长达3 h.(4)所有菌株在pH 4.0和pH 11.0的LB培养基中均能存活半年以上,在pH 2.0和13.0环境中能存活1周和3周以上.(5)菌体以沸石粉做载体常温保存,1年之内含量基本不变.(6)所有菌株均具有蜡样芽胞杆菌的特性.(7)所有菌株对链霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素均敏感,对青霉素、土霉素和黄胺药均有抗性.结论所有菌株均有望成为制备微生态制剂的候选菌株.
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一株鸭源新城疫病毒分子特性及对SPF鸡、鸭致病性的比较研究
目的 研究一株鸭源新城疫病毒分子的特性,并比较其对SPF鸡和SPF鸭致病性的不同.方法 将分离到的病毒克隆、测序并用SPF鸡和SPF鸭分别评价该毒株的致病性.结果 Du/CH/LGD/358/2011的基因组由15 198个核苷酸序列组成,编码6种结构蛋白.F基因裂解位点的氨基酸序列为112 ERQER/L 117.通过全基因组核苷酸序列和F基因高变区核苷酸序列构建遗传进化树,证明该毒株属于class Ⅰ基因3b型,与香港活禽市场分离到的毒株类似,但略有不同.该毒株对SPF鸡和SPF鸭的致病性基本一致.结论 该毒株为弱毒株,使用SPF鸡和SPF鸭均可以对鸭源弱毒株进行致病性评价,为SPF鸭的检测提供理论依据.
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SPF鸡舍建设工程设计与工艺
合理、规范的SPF鸡屏障设施设计与建设是保障维持高质量SPF鸡的前提条件.本文对SPF鸡舍的建设过程中的设计、施工和验收诸方面作了简要论述,为该领域管理技术人员提供一定的参考.
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SPF鸡在隔离器内中早期生长模型的拟合探讨
目的 了解隔离器饲育条件下SPF公鸡、母鸡早期体重增长、拐点体重、拐点周龄等指标,探讨隔离器方式饲育SPF鸡的生长发育规律.方法 采用目前较为公认的家禽早期生长模型即Gompertz模型,对生长进行曲线拟合.结果 公鸡和母鸡拟合度均为0.9996,公鸡的拐点周龄在8.77周龄,拐点体重为779.39 g,母鸡的拐点周龄在7.51周龄,拐点体重为539.94 g.结论 Gompertz生长模型很好地拟合了隔离器饲育SPF鸡的生长过程,对了解其生长发育的规律提供了参考.
关键词： SPF鸡 隔离器 Gompertz生长模型 生长发育 -
SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究
目的 提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据.方法 采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用Illumina HiSeq 2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进-测序分析,并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析.结果 四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度,物种多样性无显著差异(P＞0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacte ria)和拟杆菌门(Bacte roidetes丰度占95％以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属,不同时期丰度差异达显著水平(P＜0.05).结论 四个生长阶段菌群组成多样,且优势菌群主要为有益菌.该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据.
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不同接种途径对H9亚型禽流感病毒在SPF鸡的致病性
目的 探讨H9亚型AIV不同接种途径对SPF鸡致病性的影响.方法 以气管接种和静脉接种途径对SPF鸡进行人工感染.结果 气管接种组死亡率为16.7%,而静脉接种组未见死亡;称重发现气管接种组平均体重显著低于静脉接种组;跟踪泄殖腔排毒发现气管接种组试验鸡排毒率高于静脉接种组,排毒时间也长于后者;病理切片观察可见气管接种组病变严重,恢复期长;在免疫组化试验中,气管接种组可在肺中检测到病毒存在,而静脉接种组各组织中均未检测到病毒的存在.结论 气管接种H9亚型AIV组比静脉接种组致病性更强,是评价H9亚型AIV致病性更为有效的接种途径.
