首页 > 文献资料
-
禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定
本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白.首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC.通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC.通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性.
-
禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备
禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍,它除了可引起鸡传染性关节炎外,还可能引起矮小综合症和免疫抑制等.从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大,抗原性也不尽相同[1].ARV是一种双股RNA病毒,病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成[2].其中对S1节段研究的比较详细,而对其它节段的研究尚不深入.现已知,ARV的S1节段有3个ORF,分别编码P10、P17和δ3三种蛋白质[3,4 ].其中δ3是一种结构蛋白,并可能与病毒吸附宿主细胞及病毒中和反应相关[5].而P10和P17为非结构蛋白,但其中P10与感染细胞后细胞膜融合相关[6].为此,Bodelon等[4]在大肠杆菌中分别表达S1节段的P10、P17和δ3三个基因,同时比较了这三个基因产物对细菌膜通透性的影响.
关键词： 禽呼肠孤病毒 P10、P17、δ3蛋白 表达 免疫荧光试验 抗血清 -
实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用
目的 探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用.方法 采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数.结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3％,其余病毒检测均为阴性；普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9％,ALV 10份阳性,检出率14.3％.结论 荧光定量PCR检测方法低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测.
