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马传染性贫血病毒白细胞弱毒疫苗株及其亲本毒驴强毒株前病毒基因组比较分析
为阐明马传染性贫血白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)的致弱和免疫保护机理,对EIAVDLV121及其亲本驴强毒株(E1AVDV117)前病毒全基因组序列进行了测定,并结合准种理论,分析了EIAV疫苗致弱过程中基因组进化特点.利用LA-PCR技术对EIAVDV117和EIAVDLV121的前病毒基因组分两段进行扩增,分别获得4个和10个前病毒全基因组序列.EIAVDV117前病毒基因组平均为8 236bp,G+C含量38.0%.EIAVDLV121前病毒基因组平均8 249bp,G+C含量37.3%.两者的前病毒基因组平均差异率为2.8%.其中S2、LTR和env基因差异较大,分别为4.1%、3.9%和3.1%.此外,S2、S3和env推导的氨基酸的差异明显,分别为10.4%、5.6%和4.8%(gp90为6.8%).EIAVDLV121各基因的异质性均显著高于EIAVDV117.研究发现体外培养的EIAVDLV121至少有5种类型的LTR混合存在.在gp90推导的氨基酸序列上,EIAVDV117比EIAVDLV121平均多2个N-糖基化位点,总数为19,其中3个为EIAVDV117特有.EIAVDLV121有1个疫苗株特有N-糖基化位点.研究结果为进一步探讨马传染性贫血弱毒疫苗生物学特性提供信息.
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HIV-1型前病毒基因检测芯片的研制及应用
目的研制艾滋病病毒1型(HIV-1)前病毒基因检测芯片,并将其应用到临床样本的检测中.方法合成多对引物,经筛选实验后选出6对适宜的引物用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增HIV基因组gag区(保守区)6个HIV目的基因片段,扩增小鼠GAPDH基因片段作为阳性内参片段,PCR扩增辣椒红素基因片段作为阴性对照片段.将上述片段克隆到pMD 18-T载体上,从中选取3个HIV-1目的片段、阳性对照片段和阴性对照片段进行PCR扩增,扩增产物经纯化后点在尼龙膜上,制备成核酸检测芯片.地高辛PCR标记样本核酸与芯片杂交后,用酶联显色,分析结果.结果共检测了98份阳性样本和30个阴性样本,敏感性达93.9%,特异性为100.0%.结论该HIV-1前病毒基因检测芯片成本较低,具有较高的特异性和灵敏度,可以用于HIV-1感染和母婴传播的早期诊断.
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嗜人T细胞白血病病毒Ⅰ型的PCR检测方法研究
目的 建立嗜人T细胞白血病病毒I型(HTLV-I) PCR检测方法.方法采集成人T淋巴细胞白血病(ALT)病人全血,分离外周血单核细胞(PBMCs),并与健康人PBMCs共培养分离HTLV-I;针对HTLV-I的gag和tax基因设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测HTLV-I.结果 凝胶电泳检测到HTLV-I前病毒DNA的gag和tax片断.结论 PCR法可快速、准确检测嗜人T细胞白血病病毒.
关键词： 嗜人T细胞白血病病毒(HTLV-I) 前病毒 PCR -
HIV-1前病毒清除方法研究进展
HIV在世界范围流行已有20多年了.其间,世界上先后有多种抗病毒药物问世,高效抗反转录病毒疗法(HAART)拯救了数千万生命.虽然HAART能有效抑制病毒复制,但其对病毒感染后在人体内建立的前病毒结构则无能为力.因此,HIV感染者虽能以药物控制病情进展,延缓免疫功能受损进展,但难以彻底治愈.目前HIV治疗所面临的大问题就是抗病毒治疗后的残留病毒,而前病毒是主要残留病毒之一.临床上主要通过诱导其表达的途径,将之活化,然后通过免疫系统识别并进而加以清除.
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应用TaqMan荧光定量PCR技术建立HIV前病毒检测方法
目的 建立HIV前病毒荧光定量PCR检测方法.方法 常规培养8E5/LAV细胞,收集后计数,提取HIV前病毒核酸.运用实时荧光定量PCR法扩增晚期逆转录基因片段(HIV FL).结果 建立的实时荧光定量PCR技术检测灵敏度可达1拷贝.扩增结果稳定可靠.结论 成功建立了HIV前病毒检测方法,为今后筛选和鉴定潜伏感染细胞以及评价抗-HIV药物的治疗效果奠定基础.
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2株分离的嗜人T细胞白血病病毒I型的PCR检测
[目的] 用PCR法检测嗜人T细胞白血病病毒I型(HTLV-I)的分离情况.[方法] 采集2例日本鹿儿岛县成人T淋巴细胞白血病(ALT)病人的肝素抗凝血,分离外周血单核细胞(PBMCs),加入植物血凝素和白介素-2,与健康人PBMCs共培养进行HTLV-I的分离,然后抽提DNA,用HTLV-I的gag1和tax1两引物进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳确定病原分离结果.[结果] 2株都扩增出了HTLV-I前病毒DNA的gag1和tax1片断,证明了嗜人T细胞白血病病毒I型的分离成功.[结论] PCR法是快速、准确检测嗜人T细胞白血病病毒感染的有效方法之一.
关键词： 嗜人T细胞白血病病毒(HTLV-I) 前病毒 PCR -
人类嗜T淋巴细胞病毒I型的PCR检测方法研究
[目的]建立人类嗜T淋巴细胞病毒I型(HTLV-I) PCR检测方法.[方法]采集成人T淋巴细胞白血病(ALT)病人全血,分离外周血单核细胞(PBMCs),并与健康人PBMCs共培养分离HTLV-I;针对HTLV-I的gag和tax基因设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测HTLV-I.[结果]凝胶电泳检测到HTLV-I前病毒DNA的gag和tax片断.[结论]PCR法可快速、准确检测嗜人T细胞白血病病毒.
关键词： 人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-I) 前病毒 PCR
