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桦褐孔菌乙醇提取物在小鼠哮喘模型中对p38MAPK信号通路的影响
目的:探讨桦褐孔菌乙醇提取物对哮喘小鼠气道炎症和Thl/Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制.方法:雄性BALB/c小鼠32只随机分成4组,即正常对照组、哮喘模型组和桦褐孔菌乙醇提取物低、高剂量干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4,IL-5,IL-13,IFN-γ含量以及肺组织中磷酸化p38MAPK的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变.结果:哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数,IL-4,IL5,IL-13水平和IFN-γ水平降低;肺组织中磷酸化p38 MAPK表达水平升高,与正常组比较差异显著(P＜0.05).桦褐孔菌乙醇提取物低、高剂量干预组小鼠BALf中炎症细胞计数,Il-4,Il-5,IL-13水平和肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均明显降低,IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较均具有显著差异(P＜0.05).桦褐孔菌乙醇提取物处理能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,桦褐孔菌低、高剂量干预组之间比较无显著差异.结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.桦褐孔菌对哮喘小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化、调节IL-4/IFN-γ平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关.
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增生性瘢痕内p38丝裂素活化蛋白激酶及其MAPKKs基因的表达
为探讨增生性瘢痕和正常皮肤中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其上游信号分子mkk3和mkk6基因表达的变化,提取8例增生性瘢痕和8例正常皮肤组织的总RNA后,分离纯化mRNA,用RT-PCR方法检测这3种基因在不同组织中的表达变化规律.结果显示,在正常皮肤组织中,mkk6和p38MAPK基因表达较弱,而在增生性瘢痕内,这2种基因PCR产物的灰度比分别为正常皮肤的1.2倍和1.9倍,基因表达量明显升高(P＜0.05和P＜0.01),而mkk3在这两种不同类型组织中的表达量没有显著性差异(P＞0.05).提示增生性瘢痕的发生可能与mkk6和p38MAPK基因表达升高有关,而mkk3在其中的作用需进一步研究.
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知母皂苷对淀粉样β蛋白片段25～35引起的神经细胞凋亡的保护作用
目的 研究知母皂苷(SAaB)对淀粉样β蛋白片段25～35(Aβ25～35)激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡的保护作用及有关的机制.方法 体外培养小鼠腹腔巨噬细胞24 h,加入 Aβ25～35(20 μmol·L-1),分别在加入 Aβ25～35 0.5, 1, 2和6 h取巨噬细胞,应用Western印迹方法检测不同时间点的胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶p38(P38mapk)的蛋白表达改变,确定ERK1/2和p38 MAPK蛋白表达达峰时间.然后,在加入 Aβ25～35前10 min,加入SAaB (10, 30和100 μmol·L-1)或在加入Aβ25～35前30 min,分别加入p38 MAPK的特异性阻断剂SB203580和ERK上游激酶MEK的特异性阻断剂PD98059,分别在Aβ25～35作用0.5 和2 h后,取细胞进行Western印迹实验.Aβ25～35作用48 h后,取培养的巨噬细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一氧化氮(NO)生成量的改变,应用免疫细胞化学染色观察巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(Inos)的表达.为了观察SAaB对Aβ25～35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡的保护作用,在巨噬细胞培养液内加入SAaB(10, 30和100 μmol·L-1) 作用10 min,然后加入Aβ25～35(20 μmol·L-1)作用48 h 后,将培养的上清液转移到体外培养8 d的小脑颗粒细胞内作用72 h,对照组将未被Aβ25～35刺激的巨噬细胞上清液加入到神经细胞内.应用Hoechst 33258染色观察小脑颗粒细胞凋亡改变.结果 Aβ25～35(20 μmol·L-1)可使巨噬细胞磷酸化ERK1/2和磷酸化p38 MAPK表达明显增加,分别在加入Aβ25～35后0.5 h和2 h作用达高峰.另外,Aβ25～35也可使巨噬细胞的TNF-α和NO产生增加以及Inos表达增加,Aβ25～35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加是通过ERK1/2信号通路激活介导的,因为MEK的特异性阻断剂PD98059可明显抑制Aβ25～35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加.将Aβ25～35刺激48 h的巨噬细胞上清液加入到培养的小脑颗粒细胞内,可使神经细胞凋亡百分比较对照组明显增加.SAaB(30和 100 μmol·L-1)能明显抑制Aβ25～35引起的巨噬细胞磷酸化ERK1/2、磷酸化p38 MAPK和Inos表达增加,SAaB (10, 30和100 μmol·L-1)也能对抗Aβ25～35引起的TNF-α和NO的生成增加及明显降低由Aβ25～35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡.结论 SAaB对Aβ25～35激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡具有对抗作用,该作用与其抑制巨噬细胞的ERK1/2信号转导通路,进而抑制巨噬细胞TNF-α和NO的产生有关.
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阿魏酸钠对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与IL-1β和p38MAPK表达的相关性探讨
目的研究阿魏酸钠(sodium ferulate)对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与白介素-1β(IL-1β)和丝裂原激活的蛋白激酶p38(Mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)表达的相关性.方法大鼠脑室内一次性注射Aβ25-35制备AD动物模型,通过大鼠行为学和海马CA1区的病理学改变观察阿魏酸钠的作用.Western blot和ELISA方法检测磷酸化p38MAPK和IL-1β蛋白表达量的变化.RT-PCR分析FasL mRNA 表达水平.结果脑室内注射Aβ25-35可使大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低.这些行为学的改变伴随有海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和FasL mRNA 表达水平明显增加,海马CA1区锥体神经元损伤.另外,Aβ25-35也能引起磷酸化的p38MAPK蛋白表达明显增加.阿魏酸钠(50,100,250 mg·kg-1,连续应用4 wk)与阳性对照药布洛芬(15 mg·kg-1)均能明显对抗Aβ25-35所致大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ25-35引起的IL-1β、磷酸化p38MAPK和FasL mRNA表达增加,海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻.结论阿魏酸钠通过抑制Aβ25-35引起的海马炎症反应和p38MAPK活性,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤,改善大鼠的学习记忆功能.
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uPA、uPAR与p38在子宫内膜癌组织的表达及意义
目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)与其受体uPAR及丝裂原活化蛋白激酶p38在子宫内膜癌组织的表达及相关性,并结合临床病理特征分析其在子宫内膜癌浸润、侵袭转移过程中的作用.方法:采用免疫组织化学方法(PV-6000二步法)检测12例正常子宫内膜(对照组)、20例子宫内膜增生组织(内膜增生组)及50例子宫内膜癌组织(内膜癌组)中uPA、uPAR及p38的表达,并研究其相关性,分析探讨各因子与子宫内膜癌临床病理分期、组织学分级、组织学类型等的关系.结果:(1)内膜癌组患者uPA、uPAR、p38阳性表达率均显著高于内膜增生组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);内膜增生组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);(2)内膜癌组患者uPA和uPAR、p38的表达与临床病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P＜0.05);而与患者病理类型不相关(P＞0.05);(3)子宫内膜癌组织uPA与uPAR的表达呈正相关(r=0.389,P＜0.05);uPA与p38的表达也呈明显正相关(r=0.353,P＜0.05).结论:uPA与uPAR在子宫内膜癌发生发展侵袭转移过程中起着协同作用,p38MAPK信号通路在此过程中可能参与调节uPA,促进癌细胞浸润转移,因此uPA、uPAR、p38可能成为推测子宫内膜癌预后的重要参考指标.
关键词： 子宫内膜肿瘤 尿激酶型纤溶酶原激活剂 uPAR p38MAP激酶 免疫组织化学 -
肾小球足细胞骨架结构的适应性应变
肾小球足细胞肌动蛋白骨架是一个复杂的网络结构,其形态结构的稳定性与裂孔隔膜、足突顶端、足突基底等区域的相关蛋白分子密切相关,面对外力作用,在RhoA/Rho激酶信号通路、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)等参与下,足细胞骨架能在一定范围内进行适应性应变,以维护肾小球的正常滤过功能.
关键词： 足细胞骨架 裂孔隔膜 RhoA/Rho激酶信号通路 p38MAP激酶 -
氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质p38MAPK和TGF-β1表达的影响
目的:研究血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质p38激活丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和转化生长因子-a1(TGF-a1)表达的影响.方法:建立STZ诱导的糖尿病(DM)大鼠模型,设正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和氯沙坦治疗组(DT).用免疫组化和RT-PCR方法观察肾小管间质p38MAPK和TGF-a1蛋白及其mRNA表达.结果:p38MAPK和TCF-a1在DM大鼠肾小管间质的表达较正常对照组显著升高(P＜0.05),氯沙坦治疗组与同期糖尿病组相比明显降低(P＜0.05).结论:氯沙坦降低糖尿病大鼠肾小管间质p38MAPK和TGF-a1的表达,缓解肾小管间质病理改变.
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p38 MAPK及基质金属蛋白酶在心力衰竭病人心肌重构中的意义
目的:探讨不同程度心力衰竭病人心肌组织丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)、基质金属蛋白酶家族(MMP-2、3、9)、细胞外基质(ECM)纤连蛋白(FN)表达与心肌重构的关系.方法:选择因二尖瓣关闭不全心脏病接受二尖瓣置换术的心力衰竭病人39例,正常对照8例来自意外伤亡的器官捐献者.光镜检查心肌组织病理变化;免疫沉淀法检测心肌组织p38 MAPK磷酸化,及p38 MAPK、MMP-2、3、9蛋白表达;免疫荧光法检查心肌组织FN的分布.结果:瓣膜病所致心力衰竭病人心肌组织呈典型的心肌重构病理改变.心力衰竭组心肌p38 MAPK磷酸化明显强于对照组(P＜0.05),随心功能恶化,其表达逐渐增加(P＜0.05或P＜0.01).心力衰竭组心肌组织MMP-2、3、9蛋白表达明显强于正常对照组,各心力衰竭组与正常对照组相比差异显著(P＜0.05或P＜0.01);相反,心力衰竭组心肌组织FN蛋白表达明显弱于正常组,各心力衰竭组与正常对照组相比差异显著(P＜0.05或P＜0.01).结论:心力衰竭病人通过激活p38 MAPK诱导心肌细胞肥大、坏死,通过MMP-2、3、9表达量的增高降解心肌细胞外基质FN,共同参与心肌重构的病理过程而恶化心功能.
