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肝微粒体和肝S9转化藜芦酸葡萄糖酯比较研究
目的 比较2种体外肝代谢模型转化藜芦酸葡萄糖酯的转化样式和转化率差异.方法 通过大鼠肝微粒体和肝S9体外转化模型对藜芦酸葡萄糖酯进行生物转化,采用HPLC检测转化底物及产物的含量,检测波长254 nm,流动相为乙腈(A)-1％乙酸溶液(B),梯度洗脱(0～6 min,5％～40％A;6～9 min,40％～50％A;9～11 min,50％～5％A),流速1.0 mL/min.结果 2种模型均可将藜芦酸葡萄糖酯转化为藜芦酸,但应用肝S9模型得到的代谢产物多于肝微粒体模型,且肝S9模型对酯类的转化率高于肝微粒体模型.结论 肝S9模型对酯类的转化能力高于肝微粒体模型.
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HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物
目的：应用HPLC-MS技术，建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm ×50 mm，1.8μm）分离，以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，以玉米赤霉酮为内标，在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3'-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol ·L-1，定量限分别为5、25 nmol ·L-1，回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高，已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。
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不同方法诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝模型的CYP酶活性比较研究
目的 研究四氯化碳(CCl4)诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)模型在不同时间段对主要细胞色素P450(cytochrome P450 proteins,CYP)酶活性的影响,并与高脂饲料诱导大鼠NAFL模型相比较.方法 将实验动物分为模型组和溶媒/空白对照组,模型组采用每周2次皮下注射40％CCl4,连续9周(CCl4模型)或连续给予高脂饲料9周(高脂模型).通过组织病理学观察,测定肝脏脂质含量及肝脏系数(肝脑比)等确认大鼠NAFL造模成功,并测定血生化谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),测定主要CYP酶活性变化.结果 两种模型的组织病理学所见符合NAFL特点,肝内脂质含量及肝脑比均有显著性增加.在不同周龄,CCl4模型组的主要CYP酶活性(第4周CYP2 B6除外)与溶媒组相比,有显著性下降(P<0.001),且随时间延长有加重趋势;高脂模型的主要CYP酶活性与空白对照组比较无明显变化.ALT和AST在CCl4模型组显著升高,而在高脂模型组无明显变化.结论 肝脏组织中主要CYP酶活性可用于鉴别两种不同途径(CCl4或高脂饲料)诱导的大鼠NAFL模型.
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双酚A和邻苯二甲酸二丁酯对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响
目的研究环境内分泌干扰物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯在经大鼠肝微粒体酶混合物(S9)作用后对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7增殖作用的影响.方法分别将不同浓度的阳性对照物(17β-雌二醇)以及受试物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯经大鼠肝S9酶系作用后,用其代谢产物刺激体外培养的MCF-7细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的量.结果17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后,其促进MCF-7细胞增殖的活性降低,而经S9代谢后的双酚A则表现为较强的促进MCF-7细胞增殖的活性.结论17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后雌激素活性减弱,而双酚A经S9代谢后雌激素活性增强.
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两种诱导方法制备大鼠肝S9在两种遗传毒性试验中活性比较
目的:通过比较联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的S9的活化作用,探讨两种S9活化作用的差异对两种试验阳性结果的影响.方法:采用Ames试验方法和染色体畸变试验方法对两种S9活化的阳性结果进行比较.Lowry法测定两种S9的蛋白含量,Omura法测定P450含量.结果:Ames试验和染色体畸变试验中两种S9在阳性组中都显示出明显活化作用,同一条件下,Ames试验中使用两种S9所得阳性结果并无较大差异,染色体畸变试验中两种S9活化的阳性组畸变率间差异无统计学意义(P＞0.05).多氯联苯诱导法S9的蛋白含量13.25 g·L-1,P450含量为3.92 nmol·mg-1蛋白,联合诱导法S9蛋白含量为15.25 g·L-1,蛋白含量P450含量为2.94 nmol·mg-1蛋白.结论:两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对相应阳性诱变剂都有明显的活化作用.可以认为两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对于相应的阳性化学物活化作用无较大差异,联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9.
