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HPLC法同时测定没食子提取物中没食子酸、没食子酸甲酯和没食子酸乙酯的含量
目的：建立高效液相色谱法测定没食子提取物中三种成分的含量方法。方法色谱柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）；流动相：甲醇-水（25：75）（冰乙酸调pH至4.5）；流速为1.0 mL·min-1，柱温：30℃，检测波长：273 nm。结果没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯的回收率分别为99.79%、99.60%、99.45%；线性范围分别为0.2~3.2 μg、0.002~0.16μg、0.0108~0.54μg。结论结果准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。
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Fas途径参与没食子酸乙酯诱导结肠癌Lovo细胞凋亡
目的 研究死亡受体通路在没食子酸乙酯诱导结肠癌细胞Lovo凋亡过程中的作用.方法 以结肠癌细胞Lovo为研究对象,采用AO/EB荧光染色法观察药物作用后凋亡细胞形态学变化;免疫细胞化学法检测用药前后凋亡相关基因Caspase-8,Fas,Survivin蛋白的表达.结果 没食子酸乙酯作用后,AO/EB双染后荧光显微镜下观察Lovo细胞呈典型的凋亡形态学改变.免疫细胞化学结果表明,实验组活性Caspase-8蛋白和Fas蛋白阳性表达率增强,而Survivin阳性表达率减弱,与对照组相比具有显著差异.结论 没食子酸乙酯可通过上调Fas和活性Caspase-8蛋白的表达,下调Sur-vivin蛋白的表达.死亡受体通路参与没食子酸乙酯诱导Lovo细胞凋亡的过程,这可能是EG发挥抗肿瘤作用机制之一.
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海南血桐叶子中抑菌活性物质的提取分离与含量测定
目的:研究海南血桐叶子中具有抑茵活性的化学成分,并利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对其进行含量测定.方法:采用硅胶柱色谱技术对海南血桐叶子中具有明显抑茵活性的乙酸乙酯提取浸膏进行分离纯化,得到抑茵活性化合物,利用现代波谱法结合理化性质对其进行结构鉴定,同时利用RP-HPLC法测定其在叶子中的含量.结果:分离得到的抑茵活性化合物经鉴定为没食子酸乙酯,其在海南血桐叶子中的含量为9.099 5mg·g~(-1).结论:本方法简便、准确,可用于海南血桐叶子的质量控制.
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五倍子抗口腔致病菌活性物质筛选及其体外抑菌效果评价
目的:研究3种五倍子提取物对6种常见口腔致病菌生长、代谢的影响.方法:通过一系列提取分离纯化,从五倍子中筛选出3种活性单体,即没食子酸、没食子酸甲酯、没食子乙酯.采用液体稀释法研究这3种五倍子活性单体对变形链球菌、粘性放线菌、牙龈卟啉单胞菌、粪肠球菌、具核梭杆菌及白色念珠菌生长、代谢的影响.结果:没食子酸对6种细菌的MIC值(mg/ml)为2.5～5、没食子酸甲酯为2.0～4.0,没食子酸乙酯为1.25～2.5,浓度为1 mg/ml时,3种提取物均能抑制这6种口腔致病菌生长、产酸及产胞外多糖.且没食子酸乙酯作用强.结论:没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯在较低浓度下对口腔主要致病菌的生长、酸代谢和糖代谢都有一定的抑制作用.
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软琼脂克隆形成实验评价药物体外抑瘤性与成瘤性
目的:分别采用肿瘤细胞系和转化细胞系摸索软琼脂克隆形成实验的适宜条件,并对冬凌草甲素(oridonin,ORI)的抑瘤性和没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)促瘤性进行评价.方法:1)摸索实验条件:采用6孔板固态培养法,按不同密度(每孔500～20000个)将肿瘤细胞系(Hela,K562和HepG2)和转化细胞系(Bhas 42)与软琼脂混合铺板,计数克隆形成率.2)HepG2细胞分别与质量浓度为0.016、0.08、0.4、2、10、50μg· mL-1的ORI溶液混合后铺板;Bhas 42细胞预先经质量浓度为0.3、1、3μg·mL-1的EG溶液处理后,镜下观察细胞达到转化状态后,与软琼脂混合铺板培养.经培养后观察给药处理对克隆形成率的影响.3)利用流式细胞仪分析ORI和EG对细胞周期的影响.结果:细胞接种密度为每孔1 000个左右时,利用肿瘤细胞和转化细胞开展软琼脂克隆形成实验效果较好.ORI作为抑瘤药物在低浓度条件可显著降低HepG2细胞的克隆形成率(P＜0.01),且对细胞增殖有抑制作用.EG随给药浓度增加可显著升高Bhas42的克隆形成率(P＜0.01),但对细胞增殖影响不显著.结论:软琼脂克隆形成实验以克隆形成率为检测指标,可较为简便而灵敏地检测药物引起的抑瘤性和促瘤性.该实验结果与细胞周期分析结果相互印证.两者的有机结合,可用于药物对细胞增殖及成瘤性的影响的初步分析.
