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肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性
目的:检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性,探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性.方法:将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白(EGFP)基因及带有硫氧还原蛋白(Trx)基因的原核表达载体pET-28a(+)/EGFP及pTIG-Trx中,在大肠杆菌中进行表达,并经镍柱(Ni-NTA)纯化.建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白,通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号,考察该单链抗体的靶向性;同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白,观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性.结果:在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段,并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达,经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带.靶向性实验结果显示,单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集,而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少,并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号.抑瘤性实验发现,单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似.结论:从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性,而对肿瘤生长的抑制作用不明显,为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础.
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软琼脂克隆形成实验评价药物体外抑瘤性与成瘤性
目的:分别采用肿瘤细胞系和转化细胞系摸索软琼脂克隆形成实验的适宜条件,并对冬凌草甲素(oridonin,ORI)的抑瘤性和没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)促瘤性进行评价.方法:1)摸索实验条件:采用6孔板固态培养法,按不同密度(每孔500～20000个)将肿瘤细胞系(Hela,K562和HepG2)和转化细胞系(Bhas 42)与软琼脂混合铺板,计数克隆形成率.2)HepG2细胞分别与质量浓度为0.016、0.08、0.4、2、10、50μg· mL-1的ORI溶液混合后铺板;Bhas 42细胞预先经质量浓度为0.3、1、3μg·mL-1的EG溶液处理后,镜下观察细胞达到转化状态后,与软琼脂混合铺板培养.经培养后观察给药处理对克隆形成率的影响.3)利用流式细胞仪分析ORI和EG对细胞周期的影响.结果:细胞接种密度为每孔1 000个左右时,利用肿瘤细胞和转化细胞开展软琼脂克隆形成实验效果较好.ORI作为抑瘤药物在低浓度条件可显著降低HepG2细胞的克隆形成率(P＜0.01),且对细胞增殖有抑制作用.EG随给药浓度增加可显著升高Bhas42的克隆形成率(P＜0.01),但对细胞增殖影响不显著.结论:软琼脂克隆形成实验以克隆形成率为检测指标,可较为简便而灵敏地检测药物引起的抑瘤性和促瘤性.该实验结果与细胞周期分析结果相互印证.两者的有机结合,可用于药物对细胞增殖及成瘤性的影响的初步分析.
