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吉非替尼耐药人结肠癌细胞系HT-29/ZD的建立及其耐药机制探讨
目的:建立吉非替尼耐药的人结肠癌细胞系HT-29/ZD,并初步探讨其耐药机制.方法:采用逐步增加剂量法诱导人结肠癌细胞HT-29形成耐药细胞HT-29/ZD;MTT法检测吉非替尼对细胞的半数抑制浓度IC50,计算耐药指数(RI);计数法描绘生长曲线,计算倍增时间TD;FCM检测细胞周期;MTT法检测HT-29/ZD对氟尿嘧啶(fluorouracil,5-Fu)、顺铂(cisplatin,DDP)、奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)、伊立替康(irinotecan,CPT-11)的交叉耐药谱;免疫细胞化学方法检测细胞P-gp、IGF-1Ra、P-IGF-1R的表达.结果:建立了吉非替尼耐药的人结肠癌细胞系HT-29/ZD,其耐药指数RI为26.67,HT-29/ZD和HT-29的TD分别为33.25 h和37.7 h.FCM显示HT-29/ZD的S期、G2/M期比例增加,G0/G1期减少.交叉耐药实验显示,HT-29/ZD对5-Fu、DDP、L-OHP敏感性增加,以L-OHP敏感性增加显著;对CPT-11呈现一定程度的耐药.HT-29和HT-29/ZD均有P-gp表达,但无差异,(P＞0.05);HT-29/ZD IGF-1Ra表达明显低于HT-29(P＜0.01),而P-IGF-1R表达则明显增强(P＜0.01).结论:吉非替尼耐药细胞HT-29/ZD不存在与传统化疗药物相似的多药耐药性;磷酸化IGF-1R(P-IGF-1R)活性增强可能是HT-29/ZD的耐药机制之一,P-gp与其耐药性无关.
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电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导及胚胎着床的影响
目的 观察电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制.方法 将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组,每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠.采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,电针组、电针+ BMS-536924组、电针+LY-294002组于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,检测子宫内膜IGF-1 mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达.结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1 mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达均低于自然周期组,经电针治疗后,电针组、电针+ LY-294002组各项指标均显著性增高.电针+BMS-536924组p-IGF-1R和p-ERK1/2蛋白表达虽较COH组增加,但仍显著性低于其他电针治疗组,且妊娠率、平均着床位点数未见改善.结论 电针调控IGF-1改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R蛋白表达,激活MAPK/ERK1/2信号转导通路有关.
