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识别真伪水蛭
水蛭又名蛭蝚、马鳖，为水蛭科动物日本医蛭、宽体金线蛭、茶色蛭等的全体。其中，日本医蛭的干燥品称“水蛭”；宽体金线蛭的干燥品称为“宽水蛭”；茶色蛭的干燥品称为“长条水蛭”。
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宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研究
目的:研究宽体金线蛭的耗氧率和窒息点.方法:应用呼吸室法进行研究.结果:平均体重为10 g的宽体金线蛭,15～35℃变温下耗氧率为0.049～0.094mg·g-1· h-1,耗氧量为0.44～0.67mg·p-1·h-1,窒息点为0.9～1.51 mg·L-1;20℃条件下耗氧率为0.044～0.058 mg·g-1·h-1,耗氧量为0.19～0.77 mg·p-1·h-1,窒息点为1.4～1.57mg·L-1.结论:宽体金线蛭的耗氧率随水温的升高而上升;窒息点与温度和体重呈负相关;体重与耗氧率呈负相关,与耗氧量呈正相关;耗氧率白天和夜晚的差异不大.
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蚂蟥性腺发育周期内性类固醇激素变化初步研究
为了解蚂蟥性腺发育周期内性类固醇激素变化规律,采用酶解、萃取以及UPLC-MS/MS技术测不同月龄蚂蟥体内性类固醇激素含量变化趋势.结果表明:蚂蟥体内雌酮、雌三醇、睾酮和孕酮含量均呈M型变化趋势,均在6月龄达大值,9月龄低,10～11月龄开始轻微上升,其中睾酮和孕酮另一个小峰值均出现在2月龄,而雌酮和雌三醇均出现在8月龄.1～4月龄睾酮和孕酮含量稍高于雌三醇,5月龄开始雌酮和雌三醇激素含量稍高于睾酮和孕酮.综上,蚂蟥体内性类固醇激素含量随性腺成熟呈逐渐上升、排放期后迅速下降趋势,提示蚂蟥雌激素、雄激素和孕激素之间的比例可能与其性腺发育的特殊性存在极大相关性.
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生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究
目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法.方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算.结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的.结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义.生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充.
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宽体金线蛭不同工艺提取物抗凝血活性的比较
目的 分析比较宽体金线蛭不同工艺提取物的抗凝血活性,筛选宽体金线蛭的提取工艺.方法 测定宽体金线蛭不同工艺提取物的血浆复钙时间和抗凝血酶效价.结果 水提醇沉法和醇提水沉法所得的提取物抗凝血活性较强,而丙酮醇沉法所得提取物的抗凝血活性弱.结论 水提醇沉法是宽体金线蛭较理想的提取方法,该法操作简便,节约资源.
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宽体金线蛭抗凝血有效成分分离研究
目的 从宽体金线蛭中分离纯化抗凝血活性成分.方法 以抗凝血活性为筛选指标,以Sephadex G50、DEAE Cellulose-52、Sephadex LH-20等凝胶进行分离,利用HPLC进行纯化.结果 从宽体金线蛭加热提取液中分离纯化得到一个肽类物质.结论 宽体金线蛭中存在热稳定的抗凝血肽类物质.
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水蛭基原探索
水蛭基原根据《中国药典》1995年版1部为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman，水蛭Hirude nipponica Whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥体共3种。但目前市售药用商品主要是Whitmanin属的蚂蟥及柳叶蚂蟥，而Hirude属的水蛭较为少见，可能因其形体小、采集难、产量低的缘故。上述3种药材的疗效孰优孰次，笔者试从其药理及历代文献诸方面对基原进行讨论。1 基原品种1.1 水蛭科动物蚂蟥又名宽体金线蛭，体长大，略呈纺锤形，扁平，长6～13 cm，宽0.8～2.0 cm，背部通常暗绿色，腹部淡黄色，杂有许多不规则的茶绿色斑点，眼与日本医蛭同，前吸盘小，颚齿不发达。生活在水田、河流、湖沼中。不吸血，吸食水中浮游生物、小形昆虫、软体动物的幼虫及泥面腐殖质等。全国大部分地区分布。1.2 柳叶蚂蟥又名牛鳖，形体比宽体金线蛭略小，呈柳叶形，扁平。背部棕绿色，有5条细密的绿黑色斑点组成的纵线；腹部浅黄色，甚平坦，散布不规则的暗绿色斑点。生活和食性皆与宽体金线蛭相似。全国大部分地区有分布。1.3 水蛭又名医蛭，日本医蛭，丽江医蛭。体狭长而稍扁，略呈圆柱形，体长3～5 cm，宽4～5 mm，背部绿中带黑，有黄色纵线5条，腹面平坦，灰绿色，无杂色斑纹，体前端腹面有一前吸盘，颚齿发达。后端腹面有一后吸盘，碗状，朝向腹面，肛门在其背侧。生活在水田及沼泽中，吸人畜血液。
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基于斑马鱼模型比较宽体金线蛭和菲牛蛭对血管新生的影响
目的:探讨及比较宽体金线蛭和菲牛蛭对Tg(kdrl:mCherry)斑马鱼的血管新生影响.方法:将受精后6~8 h(6~8hpf)的胚胎暴露在含不同浓度宽体金线蛭和菲牛蛭水提取物的胚胎培养液中,每24 h更换一次含药培养液.72 hpf时,在显微镜下观察发育形态和节间血管,测定48,72 hpf孵化率,72 hpf节间血管数目、心率.结果:在抑制血管新生方面,宽体金线蛭组浓度≥30μg·ml-1时,菲牛蛭组浓度≥20μg·ml-1时,斑马鱼节间血管数目均较空白组明显减少(P<0.01).毒性方面,在48 hpf,给药组浓度≥40μg·ml-1时,宽体金线蛭和菲牛蛭组斑马鱼的孵化率均较空白组明显降低(P<0.01);在72 hpf,宽体金线蛭组斑马鱼的孵化率在100μg·ml-1时较空白组明显降低(P<0.01),而菲牛蛭组斑马鱼的孵化率在80μg·ml-1就明显降低(P<0.01).宽体金线蛭和菲牛蛭组斑马鱼的卵黄囊、心囊无明显水肿,脊柱未弯曲;两组心率显著降低(P<0.01),但在正常心率范围内.结论:宽体金线蛭和菲牛蛭都具有抗血管生成活性,且菲牛蛭的抗血管生成活性强于宽体金线蛭.两者对斑马鱼发育有一定程度的影响,但毒性不大.
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宽体金线蛭与菲牛蛭抗凝血酶活性及抗凝机制比较研究
目的：：比较宽体金线蛭和菲牛蛭抗凝血酶活性及对凝血途径的影响,为进一步揭示水蛭抗凝作用机制提供参考。方法：采用凝血酶滴定法、发色底物法-萃取-HPLC联合法测定水蛭对凝血酶的作用；同时采用凝固法测定其活化部分凝血活酶时间( APTT)、凝血酶原时间( PT)和凝血酶时间( TT),比较宽体金线蛭与菲牛蛭对不同凝血途径的影响。结果：凝血酶滴定法的结果表明,不同水蛭的抗凝活性顺序依次为：菲牛蛭活体冻干品>菲牛蛭清水吊干品>>宽体金线蛭清水吊干品；发色底物法-萃取-HPLC法测定不同水蛭对凝血酶抑制作用的结果表明：不同水蛭水提取物对凝血酶的作用均表现出低浓度促进,高浓度抑制,且菲牛蛭具有强烈凝血酶抑制活性,而宽体金线蛭在加入更高剂量时才表现出抑制作用,且抑制作用较弱,菲牛蛭的抗凝血酶活性远远高于宽体金线蛭；不同水蛭样品均使APTT、PT、TT延长,但是菲牛蛭活体冻干品主要延长TT,清水吊干品主要延长APTT,而宽体金线蛭使APTT、TT延长更加显著。结论：宽体金线蛭和菲牛蛭对凝血酶及凝血途径的作用很大区别。
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凝血酶滴定法测定宽体金线蛭抗凝血活性的影响因素
目的：对测定宽体金线蛭抗凝血活性的凝血酶滴定方法的影响因素进行分析。方法：用白瓷点滴板代替试管进行滴定反应(简称白瓷板法),考察白瓷板法和常规的试管法、不同凝血酶滴定间隔时间和凝血酶浓度对抗凝血活性测定的影响。结果：在同样条件下,白瓷板法测定抗凝血活性的精确度和稳定性较试管法高。用白瓷板法测定,宽体金线蛭样品浓度在一定范围内(0.125~0.333 g·ml-1)、凝血酶浓度为20 u·ml-1或10 u·ml-1时,每隔1 min滴加1次,每次5μl,样品浓度与消耗的凝血酶体积呈线性相关,r值分别为0.961和0.992；所测得样品的抗凝血活性分别为(33.08±2.64)和(31.24±1.32)u·g-1,RSD分别为8.0%和4.2%；对于0.333 g·ml-1的样品,其测量产生的理论误差不大于10%和5%。结论：白瓷板法可用于测定宽体金线蛭样品的抗凝血活性,用10 u·ml-1的凝血酶溶液,每分钟滴加一次,每次5μl进行测定,其线性和精确度均较好。
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宽体金线蛭抗凝血活性物质的提取方法
目的:比较不同提取方法对宽体金线蛭提取物抗凝活性的影响,确定抗凝活性物质的较佳提取方法.方法:应用凝血酶滴定法、APTT试剂盒法、PT试剂盒法等3种检测方法比较干品冷提、干品热提、干品脱脂后热提及鲜品冷提等提取物中抗凝活性的差异.结果:与空白对照组比较,各种提取方法所得提取物均具有明显的抗凝活性,各种检测方法所得结果一致.其中,水蛭鲜品和干品脱脂后提取物中抗凝活性较强.结论:水蛭提取物的抗凝活性强弱与原料的处理和提取方法有关.水蛭干品脱脂有利于提高提取物的抗凝活性.凝血酶滴定法可作为提取物抗凝活性的初步检测方法,其结果稳定,易于操作.APTT、PT试剂盒法可作为抗凝活性进一步检测的方法.
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不同品种水蛭抗凝抗血栓作用的比较
目的:比较研究宽体金线蛭和菲牛蛭的体内外的抗凝、抗血栓作用.方法:采用凝血酶直接滴定法测定不同处理方法的2种水蛭体外抗凝血活性；采用胶原蛋白肾上腺素诱导小鼠脑血栓,角叉菜胶诱导小鼠尾静脉血栓以及大鼠动-静脉旁路血栓形成的方法,观察不同处理方法的两种水蛭的抗血栓作用.采用毛细管法和剪尾法,观察不同处理方法的两种水蛭的抗凝血作用.结果:菲牛蛭鲜体和干品的体外抗凝活性远优于鲜体及干燥宽体金线蛭；鲜品菲牛蛭、干燥菲牛蛭以及经不同方法处理的宽体金线蛭均具有明显的体内抗凝抗血栓活性,其中以菲牛蛭鲜品的作用强烈；煎煮后的菲牛蛭几乎无体内外生物活性.结论:菲牛蛭与宽体金线蛭的活性成分有很大区别,且菲牛蛭比目前广泛应用的宽体金线蛭具有更优的药效活性.
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宽体金线蛭苗对萝卜螺和方形环棱螺仔螺摄食及生长特征研究
目的:弄清宽体金线蛭(Whitmania pigra)苗期适饵料.方法:以宽体金线蛭苗(体质量0.1140±0.0424 g)作为研究对象,实验时间为20d,分别投喂耳萝卜螺(Radix auricularia)(体质量0.1981±0.1113 g)和方形环棱螺(Bellamya quadrata)仔螺(体质量0.0356±0.0181 g),记录蛭苗对两种饵料的摄食数量,体重变化,水质变化等特征.结果:宽体金线蛭苗会积极采食萝卜螺和方形环棱螺仔螺,方形环棱螺仔螺组几乎无残饵,但萝卜螺组残饵较多;萝卜螺组体质量是方形环棱螺仔螺组的1.7倍;萝卜螺组饲养6d内氨氮、亚硝酸盐、硫化物指标在第6天分别达到7.81±2.33 mg/L、2.11±0.81 mg/L、0.13±0.03 mg/L,显著高于方形环棱螺仔螺组.结论:萝卜螺和方形环棱螺仔螺两种饵料均是宽体金线蛭苗适口饵料,萝卜螺作为饵料生长速度更快,但残饵较多,水质容易败坏.
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宽体金线蛭选育群体生产性状的选择效应
目的:为选育经济性状优良的宽体金线蛭新品种.方法:以江苏里下河地区野生宽体金线蛭为材料,以生长速度为指标,选择个体体重18.00 g以上构建宽体金线蛭选育群体,比较选育群体与普通群体繁殖及F1代养殖生产性状.结果:选育群体每10 kg亲蛭产茧1.81 kg,较普通群体提高了63.04％,卵茧规格较普通群体明显增大(P＜0.01),亲蛭体重下降率及卵茧平均出苗率选育群体与普通群体无明显变化(P＞0.05);选育群体F1养殖产量、均重及成活率较普通群体分别提高了55.69％、17.18％和33.17％,差异极显著,特定生长率及增重率明显高于普通群体(P＜0.01),而干物质比2个群体F1代差异不显著(P＞0.05).结论:通过群体选育可以有效提高宽体金线蛭繁殖和养殖性能.
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饥饿胁迫下宽体金线蛭苗生长特性研究
目的:研究饥饿胁迫后宽体金线蛭苗生长特性.方法:将孵出的宽体金线蛭幼苗进行饥饿处理,测定了其在饥饿胁迫下体重变化规律;并在不同饥饿时间点给予足量适口饵料,观察其摄食后的生长特性.结果:持续饥饿胁迫下,宽体金线蛭苗体重逐渐下降,和饥饿胁迫时间成负相关关系,相对负增重率呈现出阶段性增大的规律.饥饿12天内投饵后,幼苗会以高于正常投喂组的生长速度补偿生长,但饥饿14天以后补偿生长基本消失,仍可以正常速度生长,但生长过程中晚投喂组体重无法赶上或超过正常摄食组.结论:宽体金线蛭耐饥饿能力较强,解除饿胁迫后可以部分补偿生长形式继续生长.
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循环养殖药用蚂蝗效益高
药用蚂蝗为宽体金线蛭,饵料主要是无脊椎水生动物,来源少,所以人工养殖药用蚂蝗很难推广.为解决这一难题,江苏省海门市养蝎技术咨询服务站的药用昆虫研究组,经过摸索,发现了一种能将植物性饲料转化为动物性饲料的田螺与药用蚂蝗混养的新方法.
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水蛭提取物结肠迟释微丸与普通微丸的抗血栓作用比较
目的 比较水蛭提取物结肠迟释微丸(colon delayed-release pellets,CDP)和水蛭提取物普通微丸(regular pellets,RP)的抗凝血和抗血栓形成作用.方法 采用毛细管法检测新西兰兔凝血时间,考察CDP和RP对大鼠动-静脉旁路血栓、 狭窄法诱导的下腔静脉血栓和三氯化铁(FeCl3)诱导颈动脉血栓形成的作用.凝血时间测定实验为单次给药,设3个组:正常组,CDP组(64 mg·kg-1·d-1)和RP组(43.7 mg·kg-1·d-1);动-静脉旁路血栓实验为单次给药,设6个组:模型组,CDP低、 高剂量组(87,174 mg·kg-1·d-1),RP低、 高剂量组(59.4,118.8 mg·kg-1·d-1),阿司匹林组(7.8 mg·kg-1·d-1);狭窄法诱导大鼠下腔静脉血栓实验设8组:假手术组,模型组,CDP低、 高剂量组,RP低、 高剂量组,阳性药华法林组(2.0 mg·kg-1·d-1)和活血通脉胶囊组(312.5 mg·kg-1·d-1),每天给药1次,连续给药7 d;FeCl3诱导颈动脉血栓实验为单次给药,设8组:假手术组,模型组,CDP低、高剂量组,RP低、 高剂量组,阳性药氯吡格雷组(30 mg·kg-1·d-1)和活血通脉胶囊组.称量动-静脉旁路血栓湿重和干重以及静脉血栓质量和长度,计算血栓形成抑制率;对动脉血栓进行半定量病理学分析,计算血栓形成百分比和血栓形成抑制率.结果 与正常组比较,CDP组和RP组分别在给药后4 h和0.5 h显著延长新西兰兔凝血时间(P<0.05),抗凝作用分别维持4 h和1 h.CDP组和RP组能剂量依赖性抑制大鼠动-静脉旁路血栓和下腔静脉血栓形成,抑制动脉血栓形成,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01).此外,在抑制大鼠动-静脉旁路血栓和下腔静脉血栓作用上,CDP强于RP.结论 CDP抗血栓形成作用显著优于RP,且CDP抗静脉血栓的作用比抗动脉血栓明显.
