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疏肝利胆消石法治疗胆泥症78例
用超声检查示胆囊内有新月形液体界面存在,这种液体沉积在胆囊受地心引力影响的部位,通常是底部,粘稠但可随体位改变而缓慢移动,其移动需数秒至数分钟,具有特征性的低幅回声却无胆石特征性的后方声影,此即为胆泥[1].它不能被CT、同位素扫描或胆囊造影检出,其诊断完全依赖超声检查[2].随着灰阶超声检查技术问世,对胆泥症的认识有了很大的进展和足够的重视.
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杆树突状细胞的分离培养
树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pit tshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6～8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/10 0ml)灌流2～3min,改用注射器缓慢推注2ml Ⅳ胶原酶(GIBCOL公司,0 .05%);取材后剪碎,15ml Ⅳ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4～5ml细胞悬液. 下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,5 00g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到底层的血细胞,RPMI 1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加G M-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液 .后隔天半量换液,培养第7～8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0～1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24～48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6～8个细胞组成的小集落.第7～8d,HD C数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7～8d,每只小鼠HDC得率约为2～3×106个.因HDC难于分离培养,使HDC的研究受到限制.我实验室在查阅文献的基础上,经过摸索,终于能在普通实验条件下分离培养HDC,为进一步进行HDC相关研究提供技术基础 .
