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树突状细胞与移植免疫耐受
树突状细胞(dendritic cells, DC)在机体外周与中枢免疫耐受维持中发挥重要作用,其以多种机制参与自身免疫耐受的形成,且具有极强可塑性,因此成为近年来移植免疫耐受领域的研究热点.本文概述了DC的分型及作用、DC诱导免疫的间接通路、F1t3L和凋亡细胞的作用、基因工作修饰DC及免疫抑制剂.
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CD4+CD25+调控T细胞及其在移植耐受中的作用
CD4+CD25+调控T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群,能抑制CD4+CD25-和CD8+T细胞的活化和增殖,以及IL-2和IFN-γ的产生,在移植免疫耐受中发挥着重要的作用,其免疫调控机理仍不明确.CD4+CD25+在体外能有效地被分离、活化和扩增,并能保持其免疫调控能力,其活化后的免疫抑制功能是抗原非特异性的.体外活化和扩增的CD4+CD25+调控T细胞有广阔的应用前景.
关键词： CD4+CD25+调控T细胞 T细胞 移植耐受 -
异基因小鼠皮肤移植后阻断T细胞活化双信号途径诱导耐受
T细胞的有效活化需要抗原信号(或称第一信号),同时还需要第二信号的协同作用,即T细胞表面的CD152、CD28分子与APC表面的CD80(B7-1)、CD86 (B7-2)分子有效结合.器官移植中,T细胞是介导移植排斥的主要效应细胞[1].因此,我们试图通过阻断这两种信号来诱导移植耐受.本实验中,我们采用不同的抗体组合,以治疗用药的方式观察小鼠皮肤移植物的存活情况,并检测受体小鼠的耐受状态.
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抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究
目的探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用. 方法第0天,C57BL/6(H-2b,B6)小鼠尾静脉注入2×108 BALB/c(H-2d,B/c)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体500μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应测定,混合淋巴细胞反应分析,并进行MLR的IL-2逆转实验和过继转移实验,初步探讨耐受形成机制. 结果抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠中供体皮肤移植物平均存活为50.4d,显著长于其它各组(P<0.001).相对于正常对照组小鼠,耐受B6小鼠在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性(P<0.001).IL-2逆转实验结果表明,克隆不应答(anergy)可能参与了移植耐受的形成.体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性. 结论抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功地诱导出皮肤移植物的长期耐受.多种耐受机制,包括克隆不应答、抑制细胞,都参与了耐受的形成.
关键词： 移植耐受 骨髓细胞 抗TCRαβ单克隆抗体 -
CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合供体细胞输注诱导混合嵌合体和大鼠心脏移植耐受
目的在心脏移植手术中实施CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗并联合术后输注供体骨髓细胞,诱导异基因大鼠心脏移植耐受,并对相关机制进行研究. 方法将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注供体DA的脾细胞(SC,3×108)、CTLA-4 Ig腺病毒[(1～5)×109 PFU/ml],第4天由舌静脉输注DA的骨髓细胞(BMC,3×108).观察、记录心脏移植物的存活时间.并对皮肤移植的受体作同样处理,观察皮肤移植存活情况.通过MLR、IL-2逆转实验及嵌合体的测定,探讨耐受机理,并检测了CTLA-4 Ig的体内表达、TH1/TH2型细胞因子的表达. 结果单用CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗,或CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合单独的供体脾细胞或骨髓细胞能不同程度地延长异基因心脏移植物的存活,但不能延长皮肤移植物的存活.脾细胞、CTLA-4 Ig腺病毒和骨髓细胞(SC/Ad/BMC)处理组的心脏移植物存活时间明显超过其它各耐受诱导组,并且能够诱导皮肤耐受.RT-PCR实验证明,在受体内不同的组织CTLA-4 Ig基因的表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.TH1和TH2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性降低,IL-2逆转实验、嵌合体检测表明,该耐受可能与克隆无能、嵌合体的存在有关. 结论在术中注射供体脾细胞和CTLA-4 Ig腺病毒,然后再给予供体骨髓细胞,能够提高嵌合体水平,加深移植耐受,进一步延长异基因大鼠心脏移植物存活,该移植耐受的形成涉及多种机制.
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Neuropilin-1在CD4+ CD25+ T细胞上的表达
目的 探讨neuropilin-1(NRPl)在外周血中CIM+ CD25+ T细胞上的表达以及意义.方法 收集肾移植术后长期存活、慢性移植物肾病和急性排斥患者以及健康成年人的外周血,分离外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞上NRPl和Foxp3的阳性细胞的百分比.结果 各组CD4+ CD25+ T细胞NRPl的表达率差异有统计学意义(P＜0.05);各组CD4+ CD25+ T细胞Foxp3的表达率差异亦有统计学意义(P＜0.05).长期存活组CD4+ CD25+ T细胞上NRP1和Foxp3表达率分别为19.6%±3.84%、50.19 ±3.90%,显著高于对照及慢性移植物肾病和急性排斥组(P＜0.05);急性排斥组的CD4+ CD25+ T细胞NRP1和Foxp3表达率低4.64%±1.26%、17.24%±5.29%.各组CD4+ CD25+ T细胞NRP1表达变化趋势与Foxp3变化趋势相同.结论 NRP1在长期存活组的外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞的表达上调,在急性排斥组时表达下调,且其在各组的表达变化趋势与Foxp3的表达变化趋势是一致的,这就提示CD4+ CD25+ NRP1+ 细胞是一群调节性T细胞,即NRP1是CD4+ CD25+ Treg的一个重要的表面标志.
关键词： 肾移植 移植耐受 调节性T细胞 Neuropilin-1 -
短期运用免疫抑制药物对非去髓异基因骨髓移植方案诱导的混合嵌合体和移植耐受的影响
目的 探讨免疫抑制药物对CTLA4-FasL重组腺病毒和供者骨髓移植联合方案诱导的混合嵌合耐受的影响.方法 将BALB/c(H-2d)小鼠皮肤移植于C57BL/6(H-2b,B6)小鼠,同时经尾静脉给B6小鼠注射BALB/c小鼠骨髓细胞和腺病毒AdCTLA4-FasL,B6小鼠接受皮肤移植术后4周内每天注射环孢素A(CsA)或霉酚酸酯(MMF)或这两种药物同时注射;然后观察移植皮肤存活情况,通过流式细胞仪测定受体外周血Vβ11+的T细胞的水平和供体来源细胞的嵌合水平,通过单向混合淋巴细胞反应了解对供体抗原的耐受状态.结果 在CTLA4-FasL重组腺病毒和供者骨髓移植联合方案诱导的混合嵌合耐受模型中,短期运用免疫抑制药物均促进早期供体骨髓细胞植入,但注射CsA或CsA与MMF联用的受体小鼠在皮肤移植后140 d时混合嵌合降低到很低水平,且单用CsA或CsA与MMF联用的受体小鼠中供体皮肤平均生存时间显著低于不用免疫抑制药物或用MMF的受体小鼠(P＜0.05);皮肤移植后21 d时单用CsA或CsA与MMF联用的受体小鼠Vβ11+的T细胞水平显著高于不用免疫抑制药物或用MMF的受体小鼠(P＜0.05);皮肤移植后150 d时单用CsA或CsA与MMF联用的受体小鼠脾细胞未显示对同种抗原特异性耐受.结论 CsA或含CsA的免疫抑制方案对CTLA4-FasL重组腺病毒和供者骨髓移植联合方案诱导的混合嵌合耐受有抑制作用,其机理可能与早期外周供体特异性T细胞删除减少有关;而MMF与该嵌合耐受方案兼容.
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供体脾细胞输注诱导小鼠移植耐受及其机理的研究
目的以持续供体脾细胞输注的方法建立异基因嵌合体动物模型，并探讨移植耐受形成的机制。方法 BALB/c（H-2d）小鼠经尾静脉注入C57BL/6（H-2b，B6）脾细胞5×107，2?d后，给BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺（Cy）150mg/kg体重，注射Cy后1?d，开始给BALB/c小鼠静脉注射B6源小鼠的脾细胞1次/d，107/次，共持续5?d。之后，通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)确定移植耐受的状态，并通过过继转移实验、嵌合体检查及耐受和排斥小鼠脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况，进一步探讨耐受形成的机制。结果耐受小鼠获得供体特异性移植耐受；耐受可以被过继转移；耐受小鼠体内嵌合程度与耐受程度有一定相关性；IL-2、IFN-γ等TH1型细胞因子在耐受小鼠脾细胞中较对照小鼠明显降低，IL-10在耐受小鼠中的表达明显升高，但IL-4在耐受小鼠中的表达与排斥小鼠差异无显著性。结论供体脾细胞＋Cy＋持续供体脾细胞输注可以诱导供体特异性耐受；多种耐受机理，包括嵌合体形成、抑制细胞以及TH1/TH2型细胞的偏移都对耐受形成起作用。
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抗原葡萄球菌肠毒素B诱导大鼠肾细胞移植免疫耐受形成过程中对CD4+CD25+T细胞的影响
目的：探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导大鼠肾细胞移植免疫耐受形成过程中对CD4＋CD25＋T细胞的影响情况。方法10只LEW大鼠作为供体，20只F344大鼠作为受体，设为对照组和SEB组各10只。取供体鼠肾脏细胞注入受体鼠血中建立鼠肾细胞移植模型。SEB组大鼠注射剂量为3.0 mg/kg，对照组大鼠注射同量生理盐水。分别用流式细胞仪法和放射免疫法测定受体鼠血中在移植前后第5、10、20天 CD4＋CD8＋T细胞数量百分数和IL-2、TGF-β含量，对结果进行比较和统计学分析。结果肾移植模型成功率100%，SEB组大鼠外周血中CD4+CD25+T较对照组第5天和第10天明显增高（P＜0.05），但第20天无显著差异。对照组血中IL-2不断增高，在第10天、20天时明显高于SEB组；TGF-β表达量无论对照组及SEB组均逐步增加，但 SEB组较对照同期增加显著（P＜0.05）。结论 SEB通过影响CD4+CD25+T的表达，调节T细胞亚群的分布，对免疫排斥产生调节作用，在诱导免疫耐受中具有一定的作用。
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肝脏移植耐受及其抗原递呈细胞相关作用的研究进展
免疫排斥反应是移植器官组织终能否成活的大障碍.解决此问题理想的方法是诱导特异性免疫耐受.肝脏除了有代谢消化功能外,还能够处理外来抗原并诱导机体对其产生特异性免疫耐受反应,尤其是在移植耐受中表现出了独特作用.目前相关机制研究发现,除了特殊的微环境外,肝脏还拥有大量的驻留和非驻留型抗原提呈细胞参与内部免疫反应.肝脏抗原递呈细胞在移植耐受诱导过程中占有重要地位.
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调节性T细胞与慢性感染性疾病
近年来,随着细胞及分子免疫学等相关学科的飞速发展,对T细胞及其亚群功能与作用机制的研究也日渐深入.近年来,调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)的效应和意义受到了高度关注,它作为一个具有调节功能的成熟T细胞亚群,参与了自身免疫性疾病、移植耐受、肿瘤免疫、微生物感染等发病过程[1],本文拟重点介绍Treg在慢性感染性疾病中的作用及其机制的研究进展.
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IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用
吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是一种能分解色氨酸的细胞内血红素单体蛋白,实验证明通过色氨酸的剥夺和分解产物聚集可以抑制T细胞成熟并促其凋亡.随着对IDO免疫调节机制研究的不断累积,其在器官移植和肿瘤治疗等领域的临床应用前景令人期待.本文就IDO的免疫调节机制及在移植耐受和肿瘤逃逸中的作用做一综述.
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芳香烃受体在色氨酸代谢调节免疫中的作用
芳香烃受体(AhR)是一种配体依赖性胞内受体,配体种类多样,根据来源可分为外源性和内源性配体.不同配体结合并激活AhR,可使AhR转位至核上,调节下游基因如细胞色素P450家族基因CYP1转录活动,在介导病理过程和维持机体正常发育与生理功能中发挥着重要作用.色氨酸(Trp)代谢产物是一类主要的内源性配体.犬尿氨酸(Kyn)作为Trp代谢的主要产物,与AhR相互作用后可影响免疫细胞分化与活性,调节机体适应性免疫应答,发挥抑制抗肿瘤免疫的作用.近年来Kyn在移植免疫中的作用也越来越引人瞩目.本文将对AhR在Trp代谢调节免疫中作用的研究进展进行综述.
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VEGF在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的表达研究
目前从血管内皮细胞和炎症反应相互作用横向联系角度来进一步探讨其机制的研究还非常罕见.参与移植器官急性排斥反应过程的细胞因子有多种,但血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)起着介导免疫炎症反应和血管新生相互作用.材料与方法1.动物模型与分组:采用经典的二袖套法建立近交系DA(RT1a),LEW( RT11)原位肝脏移植急性排斥反应模型,进行大鼠原位肝移植.48只大鼠分2组:对照组24只,LEW( RT11 )-DA(RT1a)大鼠间移植为同系移植耐受(syngeneic OLT,OLTS),实验组24只,DA( RT1a)-LEW( RT11)大鼠间移植为同种异体移植急性排斥(acute allograft rejection OLT,OLTR).对照组和实验组均按移植术后1,3,7天分亚组,每个亚组8只大鼠.
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缺乏可诱导共刺激信号的供体特异性输血促进受体鼠T细胞凋亡的体内研究
目的 探讨缺乏可诱导共刺激分子(ICOS)/B7h信号的供体特异性输血(DST)对异基因小鼠心脏移植术后T细胞(Tc)凋亡的影响.方法 按陈氏方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,术后统计各组移植物的存活时间.实验分3组,异基因组:分别以BALB/c和C57BL/6为供、受体,不予治疗;同基因组:供、受体均为C57BL/6,不予治疗;治疗组:以BALB/c和C57BL/6为供、受体,给予治疗.通过流式细胞术检测受体鼠外周血CD8+ICOS+Tc亚群比例以及受体鼠引流淋巴结中CD8+Tc的凋亡情况.结果 与异基因组比,治疗组中心脏移植物存活时间明显延长[(84.4±29.1) d vs.(7.0±0.8) d,P＜0.01].与异基因组比,治疗组外周血CD8+Tc亚群无明显缩减,而在CD8+ICOS+Tc亚群中,治疗组中显著低于异基因组[(7.5±2.0)% vs.(14.0±3.0)%,P＜0.05].与异基因组比,治疗组受体移植术后7 d引流淋巴结中CD8+Tc凋亡比例显著上调[(19.5±5.1)% vs.(8.7±3.1)%,P＜0.05].结论 通过ICOS/B7h信号的供体特异性输血预处理可以诱导引流淋巴结中CD8+Tc凋亡,这与受体外周血中CD8+ICOS+Tc亚群变化相关,可能在耐受的诱导过程中起重要作用.
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FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导移植免疫耐受的动物研究
目的 探讨FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导移植免疫耐受的可行性.方法 采用ProtEx~(TM)源蛋白修饰技术,将FasL嵌合蛋白修饰供者WF大鼠的脾脏细胞,在围手术期分次输注给受者ACI大鼠.施行大鼠异位心脏移植术,按注射细胞的不同处理将实验动物随机分为3组:(1)SA-FasL修饰的供者脾脏细胞组(SA-FasL组,n=23);(2)链霉亲和素蛋白(SA)修饰的供者脾脏细胞对照组(n=20);(3)未修饰的供者脾脏细胞对照组(n=8).围手术期未作任何细胞治疗为空白对照组(n=10).将耐受大鼠脾脏细胞输注给未处理ACI大鼠再行心脏移植.进行混合淋巴细胞反应;将第三方F344大鼠心脏移植给耐受大鼠,观察排斥反应.结果 SA-FasL组移植心脏长期存活率为70%,显著高于其他组(P<0.05).耐受大鼠的脾脏细胞输注能够过继转移免疫耐受;混合淋巴细胞反应与第三方移植后的排斥反应表明形成了供者特异性免疫耐受.结论 FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注能够诱导供者特异的免疫耐受,这一简便高效的方法具有潜在的临床应用价值.
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移植耐受诱导细胞在肾移植受者免疫干预中的临床应用
德国研究者在前期研究基础上通过体外培养和免疫干预一类巨噬细胞获取移植耐受诱导细胞(transplant acceptance-inducing cells,TAICs)并在前期动物实验中证实应用TAICs可以在一定程度上特异性减轻排斥反应,使移植受者可以安全地减少传统免疫抑制剂的用量.
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抗T细胞受体αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植诱导小鼠皮肤移植耐受
目的:探讨抗T细胞受体(T cell receptor, TCR)αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用.方法:第0天,向C57BL/6小鼠(受体)尾静脉输注2×108个BALB/c小鼠(供体)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单抗500 μg;第2天,向C57BL/6小鼠腹腔注射抗CD80单抗500 μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对C57BL/6小鼠进行迟发型超敏反应测定和混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)分析,并进行MLR的白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)逆转实验、过继转移实验和嵌合体检查,探讨耐受形成的机制.结果:接受了抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植的C57BL/6小鼠,供体皮肤移植物平均存活70 d;在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性.IL-2逆转实验结果表明克隆不应答可能参与了移植耐受的形成.体内、体外过继转移实验均显示耐受C57BL/6小鼠脾细胞中存在抑制细胞的活性.嵌合体检查结果表明在耐受C57BL/6小鼠的胸腺和脾中均形成了混合嵌合体,嵌合体水平随时间下降.结论:抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功诱导出皮肤移植物的长期耐受.
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CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植耐受
目的: 通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.方法: 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒(1×109～5×109 pfu*ml-1).通过RT-PCR检测CTLA4Ig的体内表达,观察记录心脏移植物的存活时间,通过MLR、IL-2逆转实验,Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:用LacZ腺病毒载体(AdLacZ)治疗组,不能延长移植物的存活,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组,DA大鼠的心脏移植物明显延长.RT-PCR实验证明,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.Th1和Th2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性,IL-2逆转实验表明,该耐受与克隆失活有关.结论: 在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受,延长心脏移植物存活,该移植耐受表现为供体特异性,其形成与克隆失活有关,未发现Th1/Th2型细胞因子的偏移现象.
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多途径联合诱导器官移植耐受和促进免疫功能重建
器官移植是治疗终末器官功能衰竭的主要方法,由于组织配型和高效免疫抑制剂的应用,急性排斥的发生率已大大降低,但目前慢性排斥仍无有效的控制方法,致使器官移植患者的长期(5～10年或更长)存活率明显偏低,而移植患者终身使用免疫抑制剂使感染、肿瘤的发病率增高,不但增加患者经济负担,而且严重影响患者的生活质量.通过诱导免疫耐受(移植耐受)的方法是解决移植排斥,避免上述问题的理想方法.
