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膀胱逼尿肌细胞的培养及鉴定
目的:建立膀胱逼尿肌细胞的分离、培养、扩增的常规方法.方法:采用胶原酶消化法分离大鼠膀胱逼尿肌细胞,在含15%胎牛血清DMEM中培养,观察细胞形态及扩增情况,用特异性抗α-SM-Actin抗体进行免疫组化鉴定细胞类型.结果:膀胱逼尿肌细胞生长良好,培养12 h后细胞开始贴附瓶底,3～4 d后可观察到细胞融合现象,7 d可覆盖培养瓶底部75%～80%以上.α-Actin 免疫组化染色鉴定,光镜下观察梭形细胞胞浆内见纵行排列的棕黄色丝状物.结论:该培养方法简单、可靠,短期内可获得大量较纯的膀胱逼尿肌细胞.
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人非小细胞肺癌微血管内皮细胞原代培养方法改进
目的 探索人非小细胞肺癌血管内皮细胞(HNSCLC-MECs)的培养方法,观察细胞生长状态并鉴定.方法 收集外科非小细胞肺癌手术组织标本,研磨至匀浆经钢筛网过滤收集沉淀,短时少量胰酶消化后组织块贴服培养.根据细胞差速粘附的原理对细胞进行纯化和传代.结果 原代培养60 h后可见少量细胞贴壁生长,7d后贴壁细胞明显增多,传代后10 d单层细胞呈典型“铺路石”样改变.应用激光共聚焦显微镜可见FactorⅧ及CD34抗体表达于细胞膜上,表达阳性率＞95％.结论 应用筛网法、贴壁法和少量胰酶法可以获得大量生长良好的HNSCLC-MECs,经鉴定符合血管内皮细胞特性.
关键词： 人非小细胞肺癌血管内皮细胞 原代培养 细胞鉴定 -
大鼠原代肝星状细胞分离、鉴定及培养方法的研究
目的 改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源.方法 采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定.结果 采用改良方法后,每只大鼠分离收获的HSC细胞稳定在(2.1±0.2)×10 7个,存活率为(96.2±0.8)％,细胞生长状态良好;流式细胞分选测定具有自发荧光特性的HSC细胞所占比例为96.3％,免疫荧光细胞化学法检测分离的HSC细胞表达特征性表面抗原α-SMA和Desmin.结论 采用严格控温、控流、控时的灌注方法及使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液有效提高了大鼠HSC细胞的收获数量、细胞活力和纯度,为进一步围绕HSC开展相关研究奠定了细胞基础.
