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益肾养阴合剂通过CXCR4/STAT3信号通路对MRL/lpr小鼠肾脏发挥保护作用
目的:研究益肾养阴合剂对系统性红斑狼疮小鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机制.方法:MRL/lpr疾病模式小鼠饲养发病后,益肾养阴合剂灌胃给药(17.25 g·kg-1),同时阳性药组用醋酸泼尼松灌胃给药(0.65 mg·kg-1),正常C57背景小鼠和实验MRL/lpr小鼠组灌胃同体积生理盐水,每天2次,连续给药28 d,每7d收集尿液,检测尿蛋白变化情况;第29天取材肾脏组织,免疫荧光染色检测免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;Raybiotech抗体芯片检测308个细胞因子变化情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)验证部分变化因子(小鼠肾脏组织与患者血清水平);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Janus激酶2/信号转导和转录活化蛋白3(JAK2/STAT3)信号的磷酸化水平、基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4(SDF1/CXCR4)信号轴、辅助性T细胞17(Th17)分泌因子白细胞介素-17(IL-17)的表达情况.结果:与MRL/lpr组比较,在中药和激素给药组,随着给药时间延长,尿蛋白含量逐渐降低,在第4周变化为明显(P＜0.05),在给药28 d后,益肾养阴合剂组与醋酸泼尼松组的肾脏IgG沉积均有减轻(P＜0.05).经Raybiotech抗体芯片筛查后发现,与C57正常小鼠,MRL/lpr疾病小鼠的肾脏SDF1,CXCR4蛋白信号表达有显著增强(P＜0.01);与MRL/lpr疾病小鼠比较,益肾养阴合剂组的小鼠肾脏SDF1,CXCR4蛋白信号表达显著降低(P＜0.01),经大样本量ELISA实验验证后,SDF1/CXCR4蛋白的抗体芯片结果可靠,进一步经Western blot实验检测发现,与正常C57小鼠比较,MRL/lpr小鼠肾脏组织中JAK2/STAT3信号通路被激活,其磷酸化蛋白表达增高(P＜0.05),SDF1,CXCR4,IL-17蛋白表达明显升高(P＜0.05);与模型小鼠比较,给予中药和激素灌胃处理28 d后JAK2,STAT3的磷酸化水平明显降低(P＜0.05),SDF1,CXCR4蛋白表达下降(P＜0.05),IL-17的表达也有明显的减少(P＜0.05).结论:益肾养阴合剂可降低MRL/lpr模型小鼠的尿蛋白水平,其可通过抑制JAK2/STAT3与SDF1/CXCR4信号通路的激活,降低辅助性T细胞17的活性,减少IL-17的分泌,起到肾脏保护作用.
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益肾养阴合剂对MRL/Ipr小鼠狼疮性肾炎的保护作用及部分机制研究
目的 探讨益肾养阴合剂对肾功、肾脏病理变化及对P-STAT3表达的影响,揭示其发挥疗效的作用机制,为益肾养阴合剂治疗狼疮性肾炎(LN)提供理论依据.方法 两种种系相同不同品种的50只小鼠随机分5组:正常组C57BL/6J小鼠(0.9％生理盐水);MRL/1 pr小鼠根据尿蛋白含量随机分为4组:模型组、中药组、中药联合激素组、激素组,连续给药4周后观察P-STAT3、尿蛋白含量、血肌酐、尿素氮及肾脏病理变化.结果 在给药第一周,与模型组相比,尿蛋白含量在各治疗组之间无明显差异(P＞0.05).在第2、3、4周时,与模型组相比,各治疗组的尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量均有显著下降(P＜0.05),中药联合激素组的尿蛋白含量低(P＜0.05).给药处理后,p-stat3的表达均呈下降趋势,中药组、激素组的p-stat3表达相比模型组有所减少(P＜0.05);中药联合激素组的降低情况为显著(P＜0.05).HE染色三个治疗组肾组织局部轻度系膜细胞增生,肾小球炎症细胞浸润减少.结论 1.益肾养阴合剂能改善MRL/lpr小鼠的肾功能及肾脏病理,且联合激素肾功能改善更明显.2.下调磷酸化的STAT3的表达可能是益肾养阴合剂治疗狼疮性肾炎的作用靶点之一.
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益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠免疫调节机制的研究
目的 探讨益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠中的CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-10的影响.揭示益肾养阴合剂对MRL/1pr小鼠免疫紊乱发挥疗效作用的调节.方法 将C57BL/6雄性小鼠分2组,第1组生理盐水对照;第2组正常中药组(益肾养阴合剂).再将MRL/1pr雄性小鼠随机分为4组:第3组为生理盐水对照组;第4组为中药组(益肾养阴合剂);第5组为中西药组(益肾养阴合剂+醋酸泼尼松片);第6组为西药组(醋酸泼尼松片).各组小鼠均为10只.予每日灌胃连续治疗4周.4周后处死,取各组小鼠(每组取5只)新鲜脾脏组织进行研磨、淋巴细胞分离后,用流式细胞术检测CD4+、CD8+细胞比例;再取余下各组5只小鼠新鲜脾脏组织为两部分,一部分用ELISA法检测组织IL-10、IFN-γ浓度;另一部分运用RT-PCR实验检测IL-10、IFN-γmRNA含量.结果 1.4组MRL/1pr小鼠CD4+较C57BL/6小鼠低且治疗后以中药加激素组升高明显(P＜0.05);4组MRL/1pr小鼠CD8+较C57BL/6小鼠高,在治疗后,中药加激素组较MRL/1pr小鼠生理盐水组降低(P ＜0.05);CD4+/CD8+的比值中4组MRL/1pr小鼠与C57BL/6治疗前无差异且MRL/1pr比值低,给予治疗后以MRL/1pr中药配合激素组升高为明显(P＜0.05).2.MRL/1pr小鼠IL-10较C57BL/6小鼠有不同程度升高,经治疗后以中药配合西药组降低明显(P ＜0.05);MRL/1pr小鼠IFN-γ较C57BL/6小鼠有不同程度降低,经治疗后以中药配合西药组升高明显(P ＜0.05);IL-10 mRNA、IFN-γmRNA的表达6组间比较差异性与蛋白变化(ELISA结果)一致.结论 益肾养阴合剂可通过对CD4+、CD8+、IFN-γ、IL-10的调节缓解MRL/1 pr小鼠病情,且治疗调节了CD4+/CD8+比例,说明益肾养阴合剂对调节MRL/1pr小鼠免疫紊乱具有一定疗效.
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益肾养阴合剂治疗狼疮性肾炎气阴两虚型的临床观察
目的 评价益肾养阴合剂联合激素及来氟米特治疗狼疮性肾炎气阴两虚型的临床疗效及安全性.方法 选取120例符合纳入标准的狼疮性肾炎患者分为试验组、对照组各60例.试验组予益肾养阴合剂联合醋酸泼尼松片、来氟米特片治疗;对照组予醋酸泼尼松片、来氟米特片治疗,探讨益肾养阴合剂对减少狼疮性肾炎蛋白尿、撤减激素方面的作用.结果 2组临床总疗效比较,试验组优于对照组;中医证候总积分比较,差异有统计学意义(P＜0.05);2组治疗后均可改善临床症状和降低证候积分,在24h尿蛋白定量方面试验组明显优于对照组(P＜0.01);2组经治疗后激素用量均减少,且试验组优于对照组.结论 (1)益肾养阴合剂联合激素、来氟米特片治疗LN(气阴两虚型)具有良好疗效;(2)益肾养阴合剂可辅助激素撤减,可减少蛋白尿;(3)益肾养阴合剂是治疗LN(气阴两虚型)安全有效的药物.
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益肾养阴合剂抗自发性系统性红斑狼疮模型鼠 氧化应激损伤机制研究
目的 探讨益肾养阴合剂对自发性系统性红斑狼疮模型鼠氧化应激损伤的影响.方法 将30只MRL/lpr小鼠随机分为6组(每组5只):模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、激素组、中药配合激素组.用药4周后,心脏穿刺取血,4℃静置2h后2500rpm离心20min分离血清,以紫外分光光度法检测各组血清中SOD、CAT、MDA活性;脱颈处死小鼠,取新鲜肾脏组织检测dsDNA浓度.结果 (1)治疗4周后,益肾养阴合剂高剂量组、激素组、中药配合激素组SOD水平明显升高,具有显著差异(P<0.01),益肾养阴合剂中剂量组与模型组比较SOD数值有统计学意义;(2)与模型组相比,益肾养阴合剂高剂量组、激素组、中药配合激素组CAT活性明显升高,具有显著差异(P<0.01),益肾养阴合剂中剂量组、低剂量组与模型组比较CAT数值有统计学意义(P<0.05);(3)与模型组相比,益肾养阴合剂高剂量组、激素组、中药配合激素组MDA含量明显下降,具有显著差异(P<0.01),益肾养阴合剂中剂量组与模型组比较MDA数值有统计学意义(P<0.05).(4)与模型组相比,益肾养阴合剂高剂量组、激素组、中药配合激素组dsDNA水平明显降低,具有显著差异(P<0.01),益肾养阴合剂中剂量组与模型组比较dsDNA数值有统计学意义(P<0.05).结论 益肾养阴合剂可有效降低血清MDA、dsDNA水平,提高血清SOD、CAT活性.
