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莪术油对人直肠癌细胞株SW1463细胞增殖及免疫因子的影响
目的:研究莪术油对直肠癌细胞(SW 1463)增殖作用及免疫因子的影响,检测白细胞介素-2(IL-2),转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达及对死亡因子配体(FasL),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响.方法:水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制质量浓度40,80,120,160,200,240,280 mg·L-1,干预SW1463细胞24,48,72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对SW 1463细胞的增殖抑制率,倒置显微镜观察药物作用细胞的形态变化,并采用姬姆萨(Giemsal)染色观察不同浓度的莪术油对SW1463细胞凋亡形态学的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测IL-2,TGF-β1的表达,免疫印迹(Western blot)法检测细胞内FasL,Capase-3,MMP-9蛋白表达.结果:莪术油对SW1463细胞有一定的增殖抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性,半数抑制率(IC50)为128.49 mg·L-1;Giemsal染色细胞可见典型的凋亡形态学特征;与正常组比较IL-2和TGF-β1的含量随着莪术油浓度的增加表达减少(P＜0.05,P＜0.01);Western blot表明,莪术油处理SW1463细胞24 h后,Caspase-3,FasL的蛋白表达上调,MMP-9的蛋白表达下调.结论:黔产莪术油能明显抑制SW1463细胞,而Caspase-3与MMP-9的表达呈现负相关性,其机制可能与FasL上调诱导的细胞相关免疫因子有关.
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AS-miR-21对直肠癌HT29细胞系增殖、侵袭与迁移的影响
目的:探讨反义miR-21(AS-miR-21)对直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:采用Lipofectamine2000向直肠癌HT-29细胞系中转染AS-miR-21以及无义序列干扰内源miR-21的表达,采用CCK-8法检测各组直肠癌细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测各组HT-29细胞体外侵袭能力的差异,以及划痕实验对HT-29细胞迁移能力进行评估.结果:HT-29细胞系中存在miR-21高表达,而体外转染实验结果发现,当细胞内源AS-miR-21的表达上调,可显著降低内源miR-21的表达,从而抑制细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力,相比于阴性对照组以及空白对照组差异有统计学意义(P<0.05);同时检测细胞培养液中的IL-6浓度发现,细胞内源AS-miR-21的表达升高,可抑制其IL-6的表达,相比于阴性对照组以及空白对照组差异有统计学意义(P<0.05).结论:AS-miR-21在直肠癌细胞中表达上调,可有效抑制miR-21的表达,从而在抑制直肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移等方面发挥重要的生理功能,降低癌细胞IL-6的表达,通过影响IL-6的表达水平参与肿瘤细胞的免疫反应.
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腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合黄连素对直肠癌细胞的杀伤作用
目的:探讨黄连素联合腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因(Ad-CD)对直肠癌细胞的体外杀伤作用.方法:用重组腺病毒介导外源CD基因转染到人直肠癌细胞株HR-8348,检测病毒的转导效率和CD基因表达.用四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测黄连素联合Ad-CD基因对HR-8348细胞存活率及体外旁观者效应的影响.结果:在250μg/ml 5-氟胞嘧啶(5-FC)浓度下,0 1、 0 3、 3 0、 30 0μmol/L浓度的黄连素联合5-FC对直肠癌细胞生长抑制率分别为27 7%、 42 4%、 52 3%、 56 3%.3 0μmol/L浓度的黄连素可作为参考用药浓度.在转染和未转染CD基因的HR-8348混合体系中,黄连素联合CD/5-FC对直肠癌细胞具有更强的抑制作用.结论:黄连素可以增强自杀基因系统对直肠癌细胞的杀伤作用,可作为一种增效剂应用于直肠癌的治疗.
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大鼠腹腔镜不同气腹模型的建立及对直肠癌细胞Colo-320种植转移的影响
目的 建立大鼠腹腔镜不同气腹模型,探讨其对直肠癌Colo-320细胞种植转移的影响.方法 64只裸鼠分为4组,即开腹组、二氧化碳(CO2)气腹组、N2气腹组、无气腹组,每组16只,术前30 min于每只裸鼠腹腔内注入1×107直肠癌Colo-320细胞,建立大鼠腹腔镜不同气腹模型,3周后每组取10只处死,观察腹腔及各脏器的成瘤情况,剩余6只观察生存时间.结果 腹腔镜不同气腹模型建立稳定,无大鼠死亡；各组裸鼠致瘤率:开腹组10/10、CO2气腹组10/10、N2气腹组9/10、无气腹组9/10,差异无显著性(p＞0.05)；裸鼠腹腔内瘤结节数、不同脏器成瘤率无气腹组低,与其余各组相比差异有显著性(P＜0.05),其余各组间差异无显著性(P＞0.05)；各组裸鼠生存时间差异无显著性(P＞0.05).结论 通过技术改进能够建立稳定的大鼠气腹模型；与开腹手术相比,CO2气腹和N2气腹并不增加直肠癌细胞在腹腔内以及对各脏器的侵袭转移能力,对致瘤裸鼠的生存时间无影响,而无气腹腹腔镜在减少肿瘤细胞侵袭及转移有一定的作用.
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修复基因LIG4在姜黄素对直肠癌放疗增敏效应中的作用研究
目的：揭示修复基因LIG4在姜黄素放疗增敏中的作用。方法常规培养人直肠癌细胞HT-29，通过基因转染建立LIG4过表达的直肠癌细胞株和空白对照质粒直肠癌细胞株，分别设立姜黄素组、放疗组、姜黄素与放疗联合组和空白对照组4个亚组。分别应用MTT法和Annexin V／PI法检测各组HT-29细胞的生长抑制情况和细胞凋亡情况。应用移植瘤裸鼠模型，动态观察各组裸鼠肿瘤体积变化，并应用TUNEL法测肿瘤细胞凋亡情况。结果对于空白对照质粒HT-29细胞，联合组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均明显高于放疗组（P ＜0．05）；联合组荷瘤裸鼠的细胞体积明显低于放疗组，肿瘤细胞凋亡指数明显高于放疗组（P ＜0．05）。而对于过表达LIG4的HT-29细胞，联合组与放疗组细胞生长抑制率和细胞凋亡率的差异无统计学意义（P ＞0．05）；联合组与放疗组荷瘤裸鼠瘤体大小和凋亡指数的差异亦无统计学意义（P ＞0．05）。结论 LIG4基因表达下调是姜黄素对直肠癌细胞放疗增敏的一项重要机制。
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莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的 探讨莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响.方法 水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg/L浓度梯度,干预SW1463细胞24、48、72 h,MTT法检测莪术油对SW1463细胞的增殖抑制率;Giemsa染色法观察莪术油对SW1463细胞凋亡形态的影响;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Capase-3、Bax与Bcl-2蛋白表达.结果 莪术油对SW1463细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间-剂量相关性,24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为144.33、134.11、120.04 mg/L;Giemsa染色可见细胞明显的凋亡形态学特征;莪术油干预SW1463细胞24 h后,与对照组比较,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上调、Bcl-2蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论 莪术油能明显抑制SW1463细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3和Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关.
