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牛膝提取物对碘乙酸钠诱导的软骨细胞保护作用
目的:探讨牛膝提取物对碘乙酸钠(MIA)诱导的软骨细胞保护作用.方法:通过Ⅱ型胶原酶消化SD大鼠软骨,获得软骨细胞,实验分为5组,分别为正常组,模型组(4 μmol· L-1 MIA),牛膝提取物低剂量组(10 mg·L-1 +4 μmol·L-1MIA),牛膝提取物中剂量组(30 mg·L-1 +4 μmol· L-1 MIA),牛膝提取物高剂量组(100 mg·L-1 +4μmol·L-1 MIA),造模与给药分别为24 h;MTT法检测各组软骨细胞活力;Hoechst 33258染色法检测各组软骨细胞形态变化;分光光度法检测各组软骨细胞中Caspase-3活性;Western blot分析各组AKT激活状况及下游靶分子Bax,Bcl-2的表达.结果:与正常组比较,模型组中软骨细胞活力下降,细胞核发生皱缩或裂解,细胞中Caspase-3活性和Bax表达量上升,Bcl-2表达量下降,AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性意义(P＜0.01).与模型组比较,牛膝提取物中、高剂量组可改善软骨细胞活力,恢复软骨细胞形态并抑制Bax表达;牛膝提取物低、中、高剂量组皆能降低大鼠软骨细胞中Caspase-3活性,提高Bcl-2表达,并促进AKT磷酸化,差异具有显著性意义(P＜0.01).结论:牛膝提取物具有保护MIA诱导的软骨细胞作用,是通过抑制软骨细胞凋亡实现的,可能与PI3 K/AKT信号通路有关.
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中药牛膝提取物抗肿瘤活性的初步研究
目的探讨中药牛膝提取物的抗肿瘤活性及其作用机制. 方法 MTT法检测细胞抑制率;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况;分别用生物化学法和ELISA法检测巨噬细胞因子TNF-α和IL-6的表达;用RT-PCR法检测巨噬细胞因子IL-6 mRNA表达. 结果牛膝提取物在体外对两种肿瘤细胞株的增殖具有明显抑制作用,量效、时效关系显著(P＜0.01),细胞周期停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡可能是其发生作用的机制之一;牛膝提取物虽然在体外不能促进小鼠脾细胞的生长增殖,但对巨噬细胞的吞噬功能却有较强的刺激作用(P＜0.01),并可促进细胞因子TNF-α和IL-6的产生以及IL-6 mRNA的表达. 结论该提取物具有抗肿瘤作用,不仅对免疫功能没有抑制作用,而且可以通过延缓肿瘤细胞周期、诱导凋亡、增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及分泌细胞因子如TNF-α、IL-6等参与其抗肿瘤机制.
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牛膝提取物对大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化的影响
目的 研究牛膝提取物对大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化的影响.方法 分离培养原代大鼠骨髓间充质干细胞后,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分成对照组和牛膝提取物组(10、30、50 μg/mL).培养14 d后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖含有量,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、免疫印迹(Western blot)检测细胞中Sox-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)水平.SIRT1抑制剂(尼克酰胺)处理细胞,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR和免疫蛋白印迹检测SIRT1、Sox-9水平.结果 骨髓间充质干细胞表面CD90和CD44呈阳性表达,而CD45和CD34呈阴性表达.与对照组比较,牛膝提取物可显著促进骨髓间充质干细胞细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调细胞葡糖胺聚糖含有量及Sox-9、ColⅡ、Aggrecan水平,以上差异均有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量依赖效应.另外,尼克酰胺可抑制牛膝提取物诱导的骨髓间充质干细胞细胞增殖和Sox-9表达升高.结论 牛膝提取物可通过上调SIRT1水平来促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化.
