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橄榄苦苷对胰岛素抵抗HepG2肝细胞胰岛素信号传导的影响
目的:观察橄榄苦苷(oleuropein,OL)对胰岛素抵抗HepG2肝细胞的胰岛素信号传导的影响.方法:常规复苏细胞,于10％ FBS+ 1％青-链霉素的DMEM(1 g·L-1葡萄糖)培养基中,37℃5％ CO2细胞培养箱中培养,常规细胞培养传至第3代待用;利用1×10-6mol· L-1胰岛素溶液刺激HepG2肝细胞36 h后建立肝细胞胰岛素抵抗模型,分为模型组,OL组(50 μmol·L-),另设正常HepG2肝细胞为正常组,每组设6个复孔;对数生长期细胞,饥饿培养24 h后,诱导建立胰岛素抵抗模型,进行药物干预36 h后,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测OL对细胞活性的影响;OL对胰岛素抵抗HepG2肝细胞干预后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肝细胞胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性明显降低(P＜0.05),胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,OL干预后胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性显著升高(P＜0.01);胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:OL能够增加胰岛素抵抗肝细胞活性,上调肝细胞胰岛素信号通路中InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白的表达,这可能是其改善胰岛素抵抗的机制之一.
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大黄素对KKAy糖尿病小鼠肝脏PPAR-γ及GluT-2表达的影响
目的 探讨大黄素改善KKAy糖尿病小鼠肝脏胰岛素敏感性及降血糖的作用机制.方法 将SPF级KKAy小鼠20只按血糖值随机分为模型组(DM),大黄素治疗组(EM组,按50mg/kg·d剂量灌胃),并选10只C57BL/6J小鼠为正常对照组(NC),连续灌胃给药8周.8周后测定血清空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)及葡萄糖转运蛋白-2mRNA(GluT-2mRNA)在肝脏的表达水平.结果 与NC组比较,DM组FPG、TG、TC明显升高,ISI明显降低,肝脏PPAR-γ及GluT-2mRNA的表达丰度明显降低(P<0.05);与DM组比较EM组FPG、TG、TC明显降低,ISI明显升高,肝脏PPAR-γ蛋白表达明显升高,积分光密度有统计学差异,GluT-2mRNA的表达丰度明显升高(P<0.05).结论 大黄素可以上调KKAy糖尿病小鼠肝脏PPAR-γ及GluT-2mRNA表达,降血糖并改善胰岛素敏感性.
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抗炎药物双醋瑞因对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响
目的：近年来研究发现炎性细胞因子参与了糖尿病的发生和发展。文中探讨抗炎药物双醋瑞因对2型糖尿病（T2DM）大鼠肝过氧化物酶活化增生受体γ（PPAR-γ）和葡萄糖转运受体2蛋白（GLUT-2）蛋白表达水平的影响及调节糖脂代谢的作用。方法将55只SD雄性大鼠随机数字表法分为4组，分别为正常对照组（n＝10）、T2DM组（n＝15）、吡格列酮组（ n＝15）和双醋瑞因组（ n＝15）。正常对照组予普通饲料喂养，余3组均予高脂饲料喂养，实验第8周末，3组高脂饲料喂养的大鼠按30 mg／kg腹腔注射链脲佐菌素（ STZ）溶液造模，正常对照组注射同等体积无菌柠檬酸钠溶液，第10周末行口服糖耐量试验（ OGTT）成模大鼠筛选，吡格列酮组予吡格列酮10 mg／（ kg· d）灌胃，双醋瑞因组予双醋瑞因50 mg／（ kg· d）灌胃，正常对照组和T2DM组予同体积的等渗盐水，干预时间均为4周。在实验第8、10、14周末禁食不禁水采血检测糖脂、空腹胰岛素（ FINS）、IL-1β及肝功相关指标。第14周末取血后，处死所有大鼠并分离大鼠肝组织，Western blot法检测肝PPAR-γ，免组化检测肝GLUT-2蛋白。结果实验第8周末，与正常对照组相比，吡格列酮组FBG升高（ P＜0．05）；T2DM组、吡格列酮组、双醋瑞因组TC、TG、LDL-C、FINS、LDL-C、ALT、AST及IL-1β水平亦升高（ P＜0．05）；第10周末，与正常对照组相比，T2DM组、吡格列酮组、双醋瑞因组FBG、FINS、TC、TG、LDL-C、ALT、AST和IL-1β水平显著升高（ P＜0．05）；而ISI和HDL-C显著降低（ P＜0．01），T2DM组、吡格列酮组、双醋瑞因组的FINS、TC、TG、LDL-C、ALT、AST和IL-1β水平较第8周明显升高（P＜0．05）。第14周末，与正常对照组相比，T2DM组、吡格列酮组、双醋瑞因组FBG升高（ P＜0．01）；与T2DM组相比，吡格列酮组FBG降低，吡格列酮组和双醋瑞因组的HbA1c、TC、TG、LDL-C及ALT降低（P＜0．05），ISI、HDL-C升高（P＜0．05）；与第10周同一指标相比， T2DM组的FBG、HbA1c、LDL-C、ALT、AST升高（ P＜0．05），而吡格列酮组、双醋瑞因组的HbA1c、TC、ALT、AST及IL-1β均明显下降（P＜0．01）。吡格列酮组PPAR-γ表达量（0．91±0．03）显著高于正常对照组、T2DM组、双醋瑞因组（0．82±0．15，0．75±0．28，0．83±0．34），差异有统计学意义（P＜0．01），而正常对照组和双醋瑞因组表达差异无统计学意义（P＞0．05），但均高于T2DM组（P＜0．01）。第14周末，正常对照组GLTU-2蛋白表达量（0．209±0．023）、吡格列酮组（0．226±0．017）、双醋瑞因组（0．232±0．012）组较T2DM组（0．173±0．009）均明显升高（P＜0．01）；吡格列酮组、双醋瑞因组表达量高于正常对照组（P＜0．05）。肝PPAR-γ与GLTU-2蛋白、HDL-C、FINS、ISI含量呈正相关（ r＝0．815、0．780、0．747、0．482，P＜0．01），与FBG、HbA1c、TC、TG、AST、ALT、IL-1β呈负相关（r＝－0．465、－5．716、－0．615、－0．657、－0．617、－0．521、－4．872，P＜0．05）。结论双醋瑞因能增强肝PPAR-γ和GLUT-2表达以及降低IL-1β、HbA1c、血脂水平，继而改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗。
关键词： 双醋瑞因 炎症 2型糖尿病大鼠 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 葡萄糖转运蛋白-2 -
Exenatide对KKAy糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制探讨
目的 观察Exenatide对KKAy糖尿病小鼠血糖水平的影响,并探讨其作用机制.方法 将SPF级KKAy小鼠16只,随机分为糖尿病模型组(DM组),Exenatide治疗组(EX组),并选8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组).EX组予Exenatide 2 μg/kg腹腔注射,2次/d,DM组与NC组腹腔注射相同剂量的生理盐水,共8周.8周后测定三组小鼠血清空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素( FINS)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、血清甘油三酯(TG)、血清胆固醇(TC);采用RT-PCR法测定三组小鼠肝脏组织中的过氧化物酶体增殖物激活受体y(PPAR-γ)mRNA及葡萄糖转运蛋白2 (GluT-2) mRNA.结果 与NC组比较,DM组小鼠血清FPG、TG、TC明显升高,ISI明显降低,肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的相对表达量明显降低(P均＜0.05);与DM组比较,EX组小鼠血清FPG、TG、TC明显降低,ISI明显升高,肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的相对表达量明显升高(P均＜0.05).结论 Exenatide可降低KKAy糖尿病小鼠血糖水平,可能通过上调小鼠肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的表达,改善肝脏对胰岛素的敏感性.
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胃转流术对2型糖尿病大鼠肝细胞胰岛素受体-β及葡萄糖转运蛋白-2表达的影响
目的 观察胃转流术(GBP)对自发性2型糖尿病大鼠(GK大鼠)肝细胞胰岛素受体-β(IR-β)及葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的机制.方法 30只8周龄雄性GK大鼠随机分为手术组(10只)、假手术组(10只)、饮食配对组(10只),另8周龄雄性SD作为空白对照组(10只).检测和比较术前及术后4周各组大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算术前及术后4周胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),应用Western blot技术检测各组术后4周肝细胞IR-β、GLUT-2的表达.结果 GK手术组术后4周FPG水平[(5.13 ±0.22) mmol/L]明显低于术前(P＜0.05);术后4周HOMA-IR[(2.16 ±0.18) mmol/L]明显降低(P＜0.01);术后4周IR-β、GLUT-2表达明显增加(P＜0.01).结论 GBP能上调2型糖尿病大鼠肝细胞胰岛素信号转导通路中IR-β及GLUT-2的表达,改善肝细胞胰岛素抵抗,提高胰岛素的敏感性.
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葡萄糖转运蛋白-2逆转录病毒表达载体构建/包装及其鉴定
目的 构建葡萄糖转运蛋白-2(glucose transporter-2,GLUT-2)基因逆转录病毒表达载体及其稳定产毒细胞系,为新型"人工胰岛β细胞"的构建奠定基础.方法 质粒pCB7/GLUT2经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,克隆至逆转录病毒载体PLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,经酶切及测序鉴定;转pL-GLUT2-SN至包装细胞系PA317,G418抗性筛选,检测上清病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞克隆行PCR及RT-PCR鉴定.结果 建立GLUT-2基因逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,经酶切及测序证实目的基因插入位点及读码框架正确;所建稳定产毒细胞克隆PA317/GLUT2,其高病毒滴度达7.1×105 CFU/ml,PCR及RT-PCR证实GLUT-2基因整合入其中并稳定表达.结论 成功构建GLUT-2基因逆转录病毒表达载体及其稳定产毒细胞系,为"人工胰岛β细胞"的构建奠定了基础.
