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德都红花-7味散原药方与优化方对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的影响
目的:探讨德都红花-7味散原药方及优化方对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:40只Wistar大鼠分为正常组、模型组、阳性药组、原药组、优化组.大鼠ip 30％ CCl4橄榄油溶液建立肝纤维化模型.同时1次/日ig给药,阳性药组给予秋水仙碱片0.4 mg·kg-1;原药组给予德都红花-7味散0.6 g·kg-1;优化组给予德都红花-7味散优化方0.6g·kg-.连续40 d后处死大鼠.取肝脏天狼星红染色,观察肝组织纤维化程度和Ⅰ,Ⅲ型胶原分型.酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织匀浆Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原,层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA)含量.实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原mRNA表达变化.结果:天狼星红染色模型组Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维较正常组增多,阳性药组、原药组、优化组Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维较模型组减少.与正常组比较,酶联免疫法检测模型组Ⅳ型胶原,HA含量升高(P＜0.05).与模型组比较,阳性药组、原药组、优化组Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、HA含量明显降低(P＜0.05).实时荧光定量PCR法检测模型组Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA表达较正常组上调(P＜0.01).阳性药组、原药组、优化组Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA表达较模型组下调(P＜0.01).原药组、优化组Ⅰ型胶原mRNA表达较阳性药组下调(P＜0.05).优化组Ⅰ型胶原mRNA表达较原药组下调(P＜0.05).结论:德都红花-7味散原药方与优化方是通过抑制Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA的转录,达到阻断或延缓肝纤维化的发生发展,德都红花-7味散优化方优于原药方.
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蒙药德都红花-7味散对慢性肝损伤大鼠肝线粒体能量代谢的影响
目的:观察德都红花-7味散对四氯化碳(CCl4)所致慢性肝损伤线粒体能量代谢的影响.方法:将Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱阳性对照组、德都红花-7味散低、高剂量组,每组8只.除空白对照组,其他组均腹腔注射30％ CCl4橄榄油溶液2.0 mL·kg-1,1周2次,连续7周.空白对照组和模型组灌胃蒸馏水,秋水仙碱组以0.4 mg·kg-1,德都红花-7味散低剂、高剂量组以(0.62,1.04 g·kg-1),灌胃给药,连续7周.末次给药后取肝脏,肝左叶制备肝线粒体,肝组织匀浆,检测肝线粒体钠钾三磷酸腺苷酶(Na+-K+-ATP酶)活性和肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量；高效液相色谱(HPLC)方法检测肝线粒体三磷酸腺苷(ATP),二磷酸腺苷(ADP),一磷酸腺苷(AMP)含量,计算能荷(ED).结果:与空白对照组比较模型组SOD,Na+-K+-ATP酶活性明显下降,MDA含量升高,秋水仙碱组Na+-K+-ATP酶活性明显下降(P＜0.05)；与模型组比较秋水仙碱组、德都红花-7味散低、高剂量组肝组织SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,德都红花-7味散低、高剂量组肝线粒体Na+-K+-ATP酶活性明显升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组ATP,ADP含量和ED明显降低(P＜0.05).与模型组比较德都红花-7味散高、低剂量组和秋水仙碱组ATP,ADP含量和ED明显升高(P＜0.05).结论:德都红花-7味散可能通过抗脂质过氧化,保护肝线粒体能量代谢,发挥保护CCl4所致慢性肝损伤.
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德都红花-7味散对实验性肝纤维化大鼠肝功能和纤维化的影响
目的 研究德都红花-7味散对四氯化碳(CCl4)和猪血清(PS)诱导的肝纤维化的作用及其机制. 方法 120只大鼠随机分为CCl4造模组和PS造模组各60只,CCl4造模组采用腹腔注射30％ CCl4橄榄油溶液,PS造模组采用腹腔注射0.5ml PS.CCl4造模组和PS造模组再随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、德都红花-7味散高剂量组、德都红花-7味散低剂量组各12只,正常对照组和模型组给予蒸馏水每次2ml/100g,秋水仙碱组灌胃秋水仙碱0.2mg/kg,德都红花-7味散高、低剂量组灌胃德都红花-7味散0.52g/kg、0.31g/kg,按2ml/100g每日灌胃2次,共7周.观察各组大鼠肝功能和纤维化指标变化,并用HE、Masson、Gomori法染色,观察肝组织病理学变化,对炎症活动度及纤维化程度进行评分. 结果 与正常对照组比较,CCl4造模组和PS造模组肝功能、纤维化各项指标及炎症活动度、纤维化程度评分差异均有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,秋水仙碱组和德都红花-7味散高、低剂量组均能改善大鼠肝功能、纤维化指标和病理学改变(P＜0.05).与模型组比较,德都红花-7味散高、低剂量组及秋水仙碱组炎症活动度及纤维化程度均降低(P＜0.05).结论 德都红花-7味散可能是通过减轻炎症反应,抑制免疫损伤和胶原合成,促进胶原的降解而起到抗肝纤维化作用.
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德都红花-7味散对肝纤维化组织中转化生长因子β1及smad蛋白通路的影响
目的 探讨德都红花-7味散治疗肝纤维化的作用及其与转化生长因子β1及smad蛋白通路的相关性. 方法 将肝纤维化大鼠随机分为A组、B组、C组,每组8只;同时,另取8只正常大鼠,作为D组. A组予以灌胃0.6 g·kg-1德都红花-7味散,每天1次;B组予以灌胃0.4 mg·kg-1秋水仙碱,每天1次;C组和D组同时予以蒸馏水,每天1次. 4组均连续给药40 d. 用弹力胶原纤维染色法观察肝组织纤维化程度. 用酶联免疫法检测肝组织匀浆透明质酸、层黏连蛋白含量. 用免疫组织化学法检测肝smad2、smad3、smad6、smad7、转化生长因子β1蛋白表达变化. 结果 C组胶原纤维较D组增多,A组和B组胶原纤维较C组减少. C组透明质酸、层黏连蛋白含量较D组升高( P<0.05 ) ,A组和B组透明质酸、层黏连蛋白含量较C组降低( P<0.05 ). C组转化生长因子β1、smad2、smad3蛋白表达较D组上调(P<0.05),A组和B组转化生长因子β1、smad2、smad3蛋白表达较C组下调( P<0.05 ). C组smad6、smad7蛋白表达较D组下调( P <0.05 ) , A 组和 B 组 smad6、smad7 蛋白表达较 C 组上调(P<0.05).结论 德都红花-7味散通过调节转化生长因子/smad蛋白通路,从而阻断转化生长因子表达,抑制细胞外基质的合成,促进细胞外基质的降解,达到阻断或延缓肝纤维化发展的目的.
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德都红花－7味散对基质金属蛋白酶及转化生长因子β1在肝纤维化中表达的影响
目的：探讨德都红花－7味散对肝纤维化的治疗作用及其与基质金属蛋白酶（MMPs）表达及转化生长因子β1（TGF－β1）的相关性。方法大鼠分成4组，空白组、模型组、对照组、实验组，每组8只。用四氯化碳诱导建立大鼠肝纤维化模型。同时灌胃给药，对照组给予秋水仙碱片，用CMC纤维素钠水配制成2％的混悬液，每次0.2 mL · kg－1，1次／日；实验组给予德都红花－7味散，用CMC纤维素钠水配制成3％的混悬液，每次0.2 mL · kg－1；空白组和模型组给予等体积纯净水，持续40 d后，处死大鼠。用蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶－1（MMP－1）、基质金属蛋白酶－13（MMP－13）、基质金属蛋白酶抑制剂－1（TIMP－1）蛋白；实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TGF－β1mRNA的表达变化。结果模型组，MMP－1、MMP－13蛋白表达较空白组显著下调（P＜0.05），TIMP－1蛋白表达较空白组显著上调（P＜0.05）；Ⅰ型胶原 mRNA 和Ⅲ型胶原 mRNA、TGF －β1mRNA 表达比空白组显著上调（P＜0.05）。对照组和实验组，MMP－1、MMP－13蛋白表达较模型组显著上调（P＜0.05），TIMP－1蛋白表达较模型组显著下调（P＜0.05）；Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原 mRNA、TGF －β1 mRNA 表达较模型组显著下调（ P ＜0.05）。结论德都红花－7味散通过调节和维持MMP／TIMP的稳态，阻断TGF－β表达和抑制Ⅰ型胶原mRNA和Ⅲ型胶原mRNA、TGF－β1mRNA的转录，达到延缓肝纤维化的发生发展。
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蒙药德都红花-7味散对急性肝损害的保护作用及其急毒性药理试验
目的:研究蒙药德都红花-7味散降酶保肝作用及其急性毒性作用.方法:将蒙药德都红花-7味散分为高、中、低剂量组和护肝片组分别灌胃7天,腹腔注射CCl4引起小鼠肝损害,观察蒙药德都红花-7味散和护肝片对血清ALT、AST、LDH含量的影响;应用光镜观察肝脏形态学的变化.采用近似LD50试验方法,24h大剂量、多次连续灌胃给药60g/kg体重,测出该药LD50或大耐受剂量,并检测血清ALT、AST含量,观察肝组织形态学的改变.结果:模型组与正常组比较,小鼠血清AST、ALT、LDH显著升高(P＜0.01);德都红花-7味散高、中、低剂量组和护肝片组与模型组比较均有显著降低血清AST、ALT、LDH含量作用(P＜0.05);而德都红花-7味散中、低剂量组降低血清AST、ALT、LDH含量显著优于德都红花-7味散高剂量组和护肝片组(P＜0.05).模型组肝组织学改变主要表现为碎片状坏死;护肝片组可见散在点状及小碎片状坏死;德都红花-7味散高剂组以点状为主,偶有小碎片状坏死,较护肝片组轻;德都红花-7味散中、低剂组肝组织损伤状况较相似,主要表现为细胞水肿,脂肪变性,偶有点状坏死.急性毒性试验未观察到明显毒性反应,无动物死亡,测得大耐受剂量MTD＞60g/kg,相当于成人日用药量的1200倍以上.结论:德都红花-7味散和护肝片均有降酶保肝作用,而且德都红花-7味散作用更显著.德都红花-7味散大剂量服用比较安全.
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蒙成药德都红花-7味散长期毒性试验研究
目的:观察大鼠长期口服德都红花-7味散产生的毒性反应,为临床提供安全用药依据.方法:取wister大鼠,按体重随机分为空白对照组和德都红花-7味散低剂量组(1.34g·kg-1·d-1)、高剂量组(5.36g·kg-1·d-1),连续灌胃给药6个月,观察实验动物外观体征、体重、给药后的反应；检测血常规、凝血四项、血液生化指标；计算脏器指教,常规对主要脏器做he染色,观察组织形态学改变.结果:连续灌胃给药6个月和停药1个月后,给药组与空白对照组比较外观体征、行为活动、体重、脏器系数、血常规分析、凝血四项均无明显改变.生化检测中给药六个月后德都红花-7味散高剂量组ALT、AST、CRE与空白对照组比较明显下降,P＜0.05;停药后1个月生化检测CRE仍低于空白对照组,P＜0.05,其它检测项目均无明显改变.组织病理学检查各脏器均未发现明显的病理改变.结论:德都红花-7味散在临床剂量的120倍,即5.36g/kg内给予大鼠长期灌胃给药较安全,为临床用药提供了安全性依据.
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德都红花-7味散对CCl4诱导实验性肝纤维化疗效和IL-1、IL-6、TNF-α的影响
目的:观察德都红花-7味散对CCl4所致实验性肝纤维化疗效和对IL-1、IL-6、TNF-α的影响,探讨该药的作用机制.方法:将大鼠随机分为5组,除空白对照组,其余各组腹腔注射30%四氯化碳橄榄油溶液诱导大鼠形成肝纤维化;同时德都红花-7味散低、高剂量组和秋水仙碱阳性对照组分别灌胃德都红花-7味散每日0.62 g/kg、1.04 g/kg和秋水仙碱0.4 mg/kg;于第7周末,采集血清和肝组织,酶联免疫吸附试验检测纤维化指标HA、LN、PCⅢ、ⅣC和血清TNF-α、IL-1、IL-6含量,并用HE、Gomori、Masson染色观察肝组织病理学变化,采用2000年西安会议制定的<肝纤维化诊断及疗效评估共识>和<肝纤维化分期半定量评估系统Ishak>对肝纤维化程度进行分级、分期和评分.结果:与模型组比较德都红花-7味散低剂量组血清和肝组织HA、LN、PCⅢ、ⅣC、Hyp含量,炎症活动度及纤维化程度半定量值,血清TNF-α、IL-1、IL-6含量均明显降低,P＜0.05;高剂量组血清HA、ⅣC,肝组织LN、ⅣC含量,炎症活动度及纤维化程度半定量值,血清TNF-α含量均明显降低,P＜0.05;秋水仙碱组肝组织HA含量升高、ⅣC含量下降,有显著性差异,P＜0.05;炎症活动度和纤维化程度半定量值无显著性差异,P＞0.05;血清TNF-α、IL-1、IL-6含量升高,有显著性差异,P＜0.05.与空白对照组比较德都红花-7味散低剂量组血清HA、PCⅢ、ⅣC,肝组织LN、PCⅢ、ⅣC,德都红花-7味散高剂量组血清PCⅢ、ⅣC,肝组织ⅣC含量无显著性差异,P＞0.05.结论:德都红花-7味散能够明显改善CCl4所诱导实验性肝纤维化组织病理变化,降低肝纤维化指标HA、LN、PCⅢ、ⅣC和血清IL-1、IL-6、TNF-α含量,具有抗肝纤维化作用.
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德都红花-7味散各味药活性成分及现代药理作用的研究
研究从蒙药德都红花-7味散各味药中提取的主要活性成分:黄酮类化合物、多糖、生物碱及皂苷,以及这些成分的现代药理作用.对该方剂在保肝利胆、抗肝纤维化、防治脂肪肝、调节免疫、抗氧化等方面的研究进展进行了综述,对比它们活性成分及作用的相同点及不同点,组成方剂后活性加强或相辅相成,为其指导临床用药及进一步研究开发提供理论依据.
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德都红花-7味散对猪血清诱导慢性肝纤维化大鼠IL-1、IL-6、TNF-α及对小鼠脾淋巴细胞、巨噬细胞的影响
目的:观察蒙药德都红花-7味散对猪血清诱导肝纤维化模型IL-1、IL-6、TNF-α和对小鼠巨噬细胞、脾淋巴细胞功能的影响,揭示其免疫调节作用.方法:大鼠腹腔注射猪血清诱导肝纤维化模型,分为秋水仙碱组、德都红花-7味散低剂量组、高剂量组,灌胃给药,2次/日,连续9周,观察对血清IL-1、IL-6、TNF-α的影响;选用ICR小鼠,采用吞噬鸡红细胞法,分为香菇菌多糖组、德都红花-7味散低剂量组、高剂量组,灌胃给药连续1周,观察对巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的影响;选用ICR小鼠,采用MTT法,分为香菇菌多糖组和德都红花-7味散组,灌胃给药连续1周,观察对脾淋巴细胞增殖功能的影响.结果:猪血清致慢性肝纤维化实验表明,与模型组比较秋水仙碱组(0.2mg/kg)明显降低IL-1,德都红花-7味散低剂量组(0.31g/kg)、德都红花-7味散高剂量组(0.52g/kg)明显降低IL-1、IL-6;小鼠巨噬细胞吞噬功能实验表明,与空白对照组比较德都红花-7味散低剂量组(0.50g/kg)、德都红花-7味散高剂量组(0.83g/kg)、香菇菌多糖组(6.67mg/kg)吞噬率和吞噬指数明显升高,与香菇菌多糖组比较德都红花-7味散高剂量组(0.83g/kg)吞噬率明显升高.小鼠脾淋巴细胞增殖实验表明,与空白组比较德都红花-7味散组(0.50g/kg)脾淋巴细胞培养液吸光度OD值明显升高.结论:蒙药德都红花-7味散具有显著降低猪血清所致肝纤维化大鼠细胞因子IL-1、IL-6的作用和明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,促进淋巴细胞增殖作用,而发挥免疫调节作用.
