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雷至胶囊对嘌呤霉素氨基核苷肾病的减毒增效作用
目的:探讨雷至胶囊(雷公藤多苷10 mg·kg-1+女贞子、墨旱莲4 g·kg-1)在治疗嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病的减毒增效作用.方法:80只雄性大鼠随机分为8组:空白组、模型组、雷至胶囊高、低剂量组、雷公藤多苷高、低剂量组、雷公藤甲素组和缬沙坦组,每组10只.颈静脉注射PAN 100 mg·kg-1建立PAN肾病模型.空白组颈静脉注射等量生理盐水.其余各治疗组造模后第2天开始每日分别ig给药,持续10 d.第11天,处死大鼠,摘取肝肾,用于光镜、免疫荧光及透射电镜检测.结果:一般情况:模型鼠第5天尿量减少、腹水,而浮肿不明显,体重下降.第7～10天腹水明显,24 h尿蛋白增加,死亡率30％(3/10).病理改变:模型鼠肾小管上皮细胞变性,电镜下,可见足细胞足突融合、消失,而空白组足细胞结构正常.各药物治疗组24 h尿蛋白、血生化、血红蛋白均有不同程度改善,各治疗组血尿素氮轻度升高(P＜0.05).雷至胶囊及雷公藤多苷10 mg·kg-1组降蛋白尿、改善贫血、降低AST疗效优于其余各组,电镜下,雷至胶囊高剂量组足突融合减轻,足突明显恢复.结论:雷至胶囊可能通过降低PAN肾病大鼠蛋白尿、改善贫血、降低AST、减轻足细胞足突融合及肾小管上皮细胞变性等发挥减毒增效作用.
关键词： 雷至胶囊 雷公藤多苷 嘌呤霉素氨基核苷肾病 雷公藤减毒 -
嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用
目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系；阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达；同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合；在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达；上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达；差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合；还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达；减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿；雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.
关键词： 微小RNA 雷至胶囊 嘌呤霉素氨基核苷肾病 足细胞 蛋白尿 -
雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响
目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体(VEGFR)表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组(单次尾静脉注射PAN造模,n=8)、雷帕霉素干预组(单次尾静脉注射PAN造模+雷帕霉素干预,n=8)和对照组(单次尾静脉注射PBS,n=8).各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组(P<0.05),且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(P<0.05).结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.
关键词： 嘌呤霉素氨基核苷肾病 血管内皮细胞生长因子 血管内皮生长因子受体 蛋白尿 雷帕霉素 小鼠 -
不规则趋化蛋白在嘌呤霉素氨基核苷肾病模型中的表达
目的:检测CX3C族趋化因子不规则趋化蛋白(fractalkine,Fkn)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycinaminonucleoside,PAN)肾病中的表达,进一步阐明肾病的发病机制,为肾病的治疗提供新的靶点.方法:从Wistar大鼠的颈静脉给予PAN,对照组给予等量生理盐水,在不同的时间点观察PAN引起的尿蛋白改变和肾脏炎性细胞浸润情况,并于第1、3、5、7、10天处死动物,制作肾组织匀浆和冰冻切片,分别用于RT-PCR和免疫组化研究,观察在PAN注射的不同时间点肾组织中Fkn mRNA和蛋白质的表达情况;同时在体外用白介素-1β(IL-1β)刺激培养的肾小管上皮细胞观察Fkn的表达.结果:PAN注射后第5天尿蛋白开始升高,持续增加直至第10天,同时伴有肾间质中CD4+T细胞,CD8+T细胞和单核/巨噬细胞的增加.RT-PCR和免疫组化均显示Fkn在第7、第10天表达升高,第3天主要分布在肾小球,以后主要在肾小管上皮细胞表达.用IL-1β刺激后1h体外培养的肾小管上皮细胞即开始表达Fkn mRNA,在4～6h达到高峰.结论:本文首次观察到Fkn在PAN肾病模型中表达增高,其特征为先出现于肾小球,后移行至肾小管,并早于肾组织中白细胞浸润及蛋白尿的发生.提示Fkn可能是肾病发病和进展过程中的另一重要的相关分子.
关键词： Fractalkine 趋化因子 嘌呤霉素氨基核苷肾病 -
SRT1720对实验性肾病大鼠足细胞的保护作用
目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)激活剂SRT1720对嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromyein aminonueleoside nephrosis,PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用.方法:雄性SD大鼠一次性腹腔注射150 mg/kg嘌呤霉素氨基核苷建立PAN肾病大鼠模型,设正常对照组、模型组、SRT1720治疗组[模型组大鼠给予SRT1720 100 mg/(kg·d)灌胃].Bradford法检测大鼠的24h尿蛋白总量；应用透射电镜观察足细胞超微结构；实时定量RT-PCR、Western blot检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin及Podocin的表达.结果:①与正常对照组相比,PAN注射后第3天,模型组大鼠尿蛋白的排泄量开始增加(P＜0.01),至第7天达高峰,尿蛋白总量达259.73 mg/24 h；SRT1720治疗组在治疗3d后尿蛋白明显降低(P＜0.01),第7天则降到52.47 mg/24 h；②模型组大鼠血清白蛋白显著降低[(22.14±3.05)g/L]而胆固醇则显著升高[(7.03±1.64)mmol/L],SRT1720治疗后显著提高模型组大鼠血清白蛋白水平[(35.48±3.96)g/L]并降低胆固醇水平[(2.81±0.41)mmoL/L]；③透射电镜结果显示模型组大鼠肾小球足细胞足突广泛融合、消失,SRT1720治疗显著减轻足细胞足突的融合；④与正常对照组相比,模型组大鼠肾组织中Nephrin和Podocin核酸和蛋白表达均显著降低,SRT1720治疗组肾组织中Nephrin和Podocin表达显著上调,能够恢复到正常组的85％～90％.结论:SRT1720能够降低PAN大鼠蛋白尿,改善低蛋白血症和高胆固醇血症,并明显减轻足细胞损伤.
关键词： SRT1720 嘌呤霉素氨基核苷肾病 足细胞 -
嘌呤霉素氨基核苷肾病肾脏中RANK-RANKL的表达
目的：探讨RANK-RANKL在嘌呤霉素氨基核苷肾病（PAN）大鼠动物模型肾脏中的表达。方法36只SD大鼠被分配为PAN组及对照组，单次静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（PA，100 mg/kg）制作PAN动物模型。大鼠于第3、7、14天检测蛋白尿及血肌酐。检测肾脏病理，并分析RANK和RANKL变化。结果（1）在PAN SD大鼠动物模型中，第3、7、14天时蛋白尿与对照组比较有显著差别，第7天达到高峰；（2）用Western blotting及RT-PCR定量检测发现RANK-RANKL蛋白及mRNA在PAN模型组高于对照组；（3）用激光共聚焦技术显示足细胞标记蛋白Synaptopodin与RANK完全重合，提示RANK主要在足细胞表达；（4）免疫电镜发现RANK在PAN模型组明显增多，且主要定位于足突的顶部胞膜和胞质内。结论在PAN SD大鼠动物模型足细胞异常表达RANK-RANKL，提示RANK及RANKL在足细胞损伤中可能发挥重要作用。
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大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病中肾小球“小管化”现象的观察
目的 观察大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)模型中肾小球“小管化”的现象.方法 将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,溶媒对照组(一次性腹腔注射生理盐水2 mL)及注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PA)后2、5、10、15、20 d组(均一次性腹腔注射溶于生理盐水的嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g),每组5只.采用一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g的方法制作PAN模型.用HE染色、免疫荧光检测和透射电镜观察的方法确定各组大鼠肾小囊壁层上皮细胞的类型,测定各组24 h尿蛋白定量.采用SPSS 13.0统计软件分析各组该现象的发生率和严重度差异.结果 大鼠PAN模型肾小囊壁层的立方状上皮细胞的形态学特征和免疫学表型均与近端小管上皮细胞表型一致,即肾小球发生了“小管化”.模型初期,肾小球“小管化”的发生率和严重度随模型进展逐渐加重,10、15 d组较正常组均明显升高(P＜0.05),20 d组虽然“小管化”仍较正常组明显升高(P＜0.05),但已出现下降的趋势.肾小球“小管化”的发生率(r =0.55,P＜0.05)和严重度(r=0.56,P＜0.05)与24h尿蛋白定量正相关.结论 大鼠PAN模型发生了肾小球“小管化”,并且在模型中呈现动态变化.这一现象有可能为研究足细胞和肾小囊壁层上皮细胞损伤的机制提供新思路.
