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不同浓度尼古丁对种植体骨愈合的影响
目的：探讨不同浓度的尼古丁干预，对种植体周围骨组织的愈合情况和骨保护素（OPG）及骨形成蛋白2（BMP-2）表达情况的影响。方法：选取24只3月龄SD大鼠，雌雄不限，随机数表法分为实验组和对照组，尔后分别采用不同浓度（2mg/kg、0.2mg/kg、0.02mg/kg）的尼古丁和等量生理盐水干预，每天2次背部皮下注射。2周后，大鼠左右胫骨近骺端均植入表面喷砂蚀刻处理的钛合金种植体，并继续施加干预因素。种植后第2、4周分别行X线、 CT、电镜观察和qRT-PCR检测。采用SPSS17.0软件对数据进行单因素方差分析（One-Way ANO-VA test），组内比较行t检验。结果： X线灰度值显示，除高浓度尼古丁组（HDN）与对照组存在差异（P＜0.05）外，各组组间差异不明显。 CT-BMD值观察，在高浓度或长期尼古丁刺激下种植体周围骨组织矿化程度明显低于对照组，且实验各组差异明显（P＜0.05）。实时荧光定量PCR结果显示，2周时随着尼古丁干预浓度的增加，种植体周围基因表达量逐渐降低，且与对照组差异明显（P＜0.05），仅低尼古丁浓度（LDN）组与对照组中的BMP-2的表达无明显差异（1/0.93±0.17， P＞0.05）；实验第4周，各尼古丁组的基因表达量均出现下调（P＜0.05）。扫描电镜（SEM）观察发现，随着尼古丁浓度和干预时间的增加，骨小梁结构发生改建障碍，多呈纤维骨或编织骨，骨基质分布不均匀且纤维结构排列紊乱无定向。结论：尼古丁对种植体周围骨愈合的抑制作用可能与其下调相关骨活性基因的表达关系密切，且抑制作用受尼古丁干预时间和浓度的影响明显。
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BMP2、VEGF165双基因共表达质粒在小鼠骨髓基质干细胞的表达
目的 观察转染BMP2和VEGF165双基因共表达质粒在小鼠骨髓基质干细胞的表达情况.方法 脂质体介导下将双基因真核表达质粒pIRES-BMP2-VEGF165导入小鼠骨髓基质干细胞,用RT-PCR和免疫组织化学方法观察BMP2和VEGF165双基因在小鼠骨髓基质干细胞内的表达.结果 转染BMP2、VEGF165的小鼠骨髓基质干细胞有明显的BMP2和VEGF165mRNA及其蛋白表达.结论 转染BMP2和VEGF165双基因的小鼠骨,髓基质干细胞能同时表达以上两种基因.
关键词： 骨形成蛋白2 血管内皮生长因子165 骨髓基质干细胞 -
柚皮苷促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化能力的研究
目的:研究柚皮苷对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)成骨分化能力的影响.方法:组织块法培养原代HPDLCs,加入含不同浓度柚皮苷的培养液(100、1 0、1、0.1、0.01 mg/L),用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测HPDLCs的培养上清液中ALP的活性,用实时定量PCR检测加入柚皮苷后不同时间点(24h、48h、72h),HPDLCs的骨形成蛋白2(BMP2)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、骨保护蛋白(OPG)和核因子κb受体活化因子配体(RANKL)的mRNA表达水平的变化.结果:与对照组比较,不同浓度柚皮苷试验组HPDLCs培养上清液中的ALP活性显著增高(P＜0.05),其中1mg/L组的ALP活性高,此浓度柚皮苷作用下,24h后,BMP-2的mRNA表达水平显著升高,并呈时间依赖性,48h后,Col Ⅰ和OPG的mRNA表达水平也显著上升.结论:柚皮苷促进了HPDLCs细胞向骨细胞分化功能,其作用可能是通过上调Coll Ⅰ、BMP2和OPG基因的表达.
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骨形成蛋白2基因注射小鼠骨骼肌表达的初步实验研究
目的:探讨骨形成蛋白(BMP)基因能否直接导入骨骼肌细胞并表达.方法:将BMP2真核表达质粒注射于小鼠骨骼肌内,14 d后分别用HE及免疫组化ABC法观察组织学变化和BMP2的表达情况.结果:注射部位局部有炎症反应,部分骨骼肌细胞内可见BMP2的阳性信号.结论:直接注射BMP2基因可使其导入骨骼肌细胞内并表达.
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两种不同种植方式种植体骨界面BMP-2表达的比较研究
目的:比较非埋植型和埋植型不同种植方式种植体义齿修复受载后其骨界面中骨形成蛋白2(BMP-2)表达变化的异同.方法:取纯系Beagle犬 8只,于每只犬的两侧下颌分别植入非埋植型和埋植型种植体各3枚,每侧第1枚不作义齿修复用于对照,其余各枚均采用钴-铬合金铸造金属全冠修复.分别于修复后2、4、8、12周各随机处死2只实验犬,取下颌相应骨段,在每个种植体周围10mm处制作颊舌向纵行石蜡切片(片厚4μm),采用免疫组化法检测各时期种植体周围骨界面组织中BMP-2的表达水平.结果:两种类型种植体未进行冠修复时,其骨界面组织中BMP-2的表达均呈弱阳性,且不随观察时间延长而变化(P>0.05);而冠修复受载后,两种种植体骨界面组织中BMP-2表达的阳性强度均随观察时间的延长而增加,8周时达到高峰,12周时下降至接近对照组水平,各时间点两两相比差异均有统计学意义(P<0.05);非埋植型与埋植型种植体之间相比,无论是对照组还是实验组,各时间点内两者的BMP-2表达强度均无显著性差异(P>0.05).结论:非埋植型和埋植型种植体在义齿修复受载后,所承受的机械载荷均能刺激种植体-骨界面组织中BMP-2表达的规律性变化,两种种植体相比无明显差异.
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真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2的构建和鉴定
目的:构建并鉴定人hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2. 方法:采用RT-PCR方法从人成骨肉瘤细胞中克隆hBMP2基因,连接T载体并测序正确后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接,并进行酶切鉴定,后将pIRES2-EGFP-hBMP2转染入HEK293细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定. 结果:成功克隆了人BMP2基因,酶切鉴定和测序均正确,构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2能够正确表达hBMP2蛋白. 结论:构建了hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2,为研究该基因的功能奠定了基础.
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hBMP2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响
目的:分析hBMP2基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性.方法:用脂质体转染法将hBMP2基因转入人牙龈成纤维细胞内,经G418筛选后,获得阳性克隆.以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力.结果:hBMP2基因转染后,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组(两组均P＜0.01);在矿化液作用下,能形成体外矿化结节.但细胞的增殖特性无明显变化.结论:外源性hBMP2基因能够在人牙龈成纤维细胞表达,并促进其向成骨细胞方向转化,而对细胞的生长特性无明显影响.
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限制运动对大鼠股骨、胫骨物理性状、生物力学指标及骨形成蛋白2表达的影响
目的:本研究比较了限制运动4 wk大鼠和正常对照组大鼠下肢股骨、胫骨物理性状包括湿质量,灰质量,骨矿含量,骨密度,生物力学指标以及骨形成蛋白2表达量的变化,目的在于找出限制运动对大鼠下肢骨生长有哪些不良影响. 方法:采用腿-尾固定法制造大鼠限制运动的模型,用DPX双能X线骨密度仪测量大鼠左侧下肢骨骨矿含量和骨密度,用WD万能材料试验机进行股骨3点弯曲试验,测算出股骨的破坏强度,破坏载荷,破坏时能量吸收和刚度系数等生物力学指标,采用免疫组化染色及灰度比较的方法比较骨形成蛋白2表达的变化. 结果:限制运动4 wk后,大鼠股骨、胫骨的湿质量,灰质量,骨矿含量,骨密度,生物力学指标与正常对照组比较存在下降,并且与骨形成密切相关的骨形成蛋白2的表达也下降. 结论:限制运动对大鼠下肢骨(股骨、胫骨)的生长产生了负面影响,表现在下肢骨物理性状的变化及骨形成蛋白表达的抑制等方面.
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稳定表达人骨形成蛋白2成纤维细胞的建立与鉴定
目的:探讨BMP对细胞分化的调节作用,为BMP基因疗法的建立提供依据. 方法:构建了含有人BMP2开放阅读框(1.2 kb)的真核表达载体pBK-B2,利用脂质体转染方法将其导入NIH3T3细胞,通过G-418筛选获得阳性细胞克隆. 细胞原位杂交和免疫组化检测BMP2基因的稳定转染及表达情况. 结果:转染细胞内有BMP2 mRNA 的转录及其蛋白的表达. 结论:人BMP2基因在NIH3T3 细胞中得到稳定有效的表达.
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荒漠肉苁蓉对快速老化骨质疏松小鼠BMP-2蛋白表达的影响
目的 以快速老化骨质疏松小鼠(SAMP6)为研究对象,观察肉苁蓉对血清骨钙素(BGP)的含量、骨密度(BMD)、软骨中骨形成蛋白2(BMP-2)的影响,探讨肉苁蓉治疗骨质疏松症的作用机制.方法 选取6月龄SAMP6雄性小鼠40只,随机分为肉苁蓉高剂量组、肉苁蓉低剂量组、鲑鱼降钙素组和空白对照组,各10只.肉苁蓉高剂量组给予临床用药量2倍的剂量灌胃,肉苁蓉低剂量组给予临床药量的0.5倍灌胃,鲑鱼降钙素组给予皮下注射鲑鱼降钙素5.6 IU·d-1,空白对照组给予等体积蒸镏水灌胃,所有治疗均1次·d-1,连续治疗28 d.治疗完成后摘取眼球取血,用放免法检测血清BGP,双能X线骨密度测量仪测骨密度,Western blot法测定BMP-2表达.结果 治疗后肉苁蓉高剂量组、肉苁蓉低剂量组和鲑鱼降钙素组与空白对照组BGP、BMD、BMP-2比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);肉苁蓉高剂量组优于肉苁蓉低剂量组和鲑鱼降钙素组(P＜0.05).结论 荒漠肉苁蓉可有效地改善SAMP6雄性小鼠的BGP、BMD、BMP-2水平,肉苁蓉高剂量组疗效更为显著.
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pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒的构建及其活性测定
目的:构建pIRES2-绿色荧光蛋白(EGFP)-骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)真核表达质粒,并检测其表达活性.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人骨肉瘤组织中扩增出人骨形态发生蛋白2 (hBMP-2)的基因片段,构建成pIRES2-EGFP-BMP-2重组质粒,经酶切、测序检测其构建的正确性,通过转染3T3细胞后分别采用RT-PCR、免疫组化及Western免疫印迹(Western blotting, WB)法检测其转录、表达活性.结果:构建的pIRES2-EGFP-BMP-2质粒经酶切、测序、RT-PCR、免疫组化、EGFP表达鉴定、WB等检验表明质粒构建成功并具有转录活性.结论:本实验成功构建了具有表达活性的hBMP-2真核表达质粒,为进一步研究用BMP-2基因转染的方法来促进实验动物骨折的愈合奠定了基础.
关键词： 人类 pIRES2-EGFP 骨形成蛋白2 基因
