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海水淡化阻垢剂遗传毒性试验观察
目的 用体外彗星试验和流式细胞术体外微核试验检测不同海水淡化阻垢剂作用于CHO细胞的遗传毒性效应.方法 改性聚羧酸阻垢剂、聚丙烯酸阻垢剂(DM101)和马来酸阻垢剂3种阻垢剂的IC50值分别为2.781、2.401和1.347 mg/mL,将不同阻垢剂的IC50值作为试验的高剂量.高、中、低不同剂量的3种阻垢剂分别处理CHO-K1细胞3h,以浓度为1 μg/mL的K2Cr2O7为阳性对照组,以尾部DNA百分比(tail DNA％)和尾距(tail moment)作为DNA损伤的指标;3种阻垢剂流式细胞术体外微核试验分为高、中、低三个剂量组,试验分为+S9短时处理组(0.1 μg/mL环磷酰胺和1μg/mL秋水仙碱作为阳性对照)和-S9持续处理组(0.1 μg/mL丝裂霉素C和0.1μg/mL秋水仙碱作为阳性对照),采用EMA和SYTOX green双色标记,流式细胞仪分析微核率.结果 与阴性对照组相比,3种阻垢剂的尾部DNA百分比和尾距在高、中剂量组的浓度上均出现统计学显著性差异.与阴性对照组相比,在-S9的条件下,马来酸聚合物阻垢剂高剂量组试验结果为阳性;在+S9的条件下,马来酸聚合物阻垢剂在高、中和低剂量组实验结果为阳性,聚丙烯酸阻垢剂(DM101)和马来酸阻垢剂在高剂量组试验结果为阳性.结论 在本试验条件下,3种阻垢剂具有遗传毒性.
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用体外微核试验评价番茄红素的抗突变性
番茄红素(lycopene,LCP)是成熟番茄中的主要色素,也是常见的类胡萝卜素之一.LCP具有独特的长链烯烃分子结构,可表现出抗氧化、抑制突变、降低DNA损伤、降低心血管疾病和癌症发生危险性等多种种功能[1].已大量用作保健食品的原料.本课题采用人类淋巴母细胞TK6的体外微核试验,对LCP的抗诱变性进行评价,为其作为药品、保健品原料的进一步开发利用提供毒理学依据.
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流式细胞术在体外微核分析中的应用进展
体外微核试验以观察分裂细胞中微核的形成来检测化合物遗传毒性,试验周期较体内微核试验短、成本低且符合“减少、替代、优化”原则.与染色体畸变试验比较,体外微核试验还能检测非整倍体诱变剂,且检测终点简单,易于自动化检测.基于流式细胞仪的微核自动化检测技术与传统镜检技术相比,具有显著优势,可以快速、准确、高通量检测化合物的遗传毒性,且贴壁细胞和悬浮培养细胞均适用.本文阐述了流式细胞仪检测体外微核技术的发展,方法学验证,客观、高效、检测信息量大的优势,尚存不足之处及改进,望为其在体外微核试验中的广泛应用提供参考依据.
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流式细胞术检测体外微核方法的验证
目的:采用不同作用强度、不同作用机制的遗传毒性化合物及非遗传毒性化合物验证已建立的96孔板流式细胞术体外微核自动化检测方法.方法:试验分为+S9短时处理组(4 h)和-S9持续处理组(24 h),加样后24 h(5-氟尿嘧啶为48 h)收获细胞.验证的化合物分别选择3个不同浓度处理CHO-K1细胞,设置环磷酰胺(+S9组)或丝裂霉素C(-S9组)的阳性对照和溶剂对照.采用EMA和SYTOX green双色标记,流式细胞仪分析96孔板的微核率,并与常规平皿培养、人工阅片的细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较.结果:人工阅片和流式细胞术检测验证化合物诱导CHO-K1细胞微核的结果一致.在有或无S9处理条件下,甲基磺酸甲酯、秋水仙素、依托泊苷和4-硝基喹啉-1-氧化物体外微核试验结果均为阳性;5-氟尿嘧啶和己烯雌酚仅在无代谢活化系统条件下,试验结果为阳性;苯并芘仅在代谢活化系统的情况下,试验结果为阳性;氯化钠、蔗糖和2-氨基蒽体外微核试验结果为阴性.结论:本试验进一步证实流式体外微核检测方法灵敏度高、特异性好,可代替人工阅片的双核微核方法,用于化合物遗传毒性早期筛选和遗传毒性评价.
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p53基因状态对体外微核试验结果影响的研究进展
近年来,体外哺乳动物细胞遗传毒性试验假阳性率高的不足引起了毒理学研究者的关注.体外微核试验常用的啮齿类动物细胞系如CHO,V79,CHL和L5178Y,易产生假阳性结果,可能原因之一是啮齿类动物细胞系的p53基因为突变型,即p53基因功能缺陷.但也有观点认为,p53基因功能不同的细胞系不影响体外微核试验结果的判定.本文主要比较了不同细胞系体外微核试验结果,包括常用的p53基因功能缺陷的啮齿类动物细胞系、p53基因功能完整的细胞系和p53基因功能缺失的NH32细胞.希望有助于阐明遗传毒性化合物引起p53功能不同的细胞系的DNA损伤的机制,合理选择体外微核试验系统,从而降低体外微核试验结果的假阳性率.
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有机污染物对人肝肿瘤细胞的遗传毒性
目的 用人肝肿瘤细胞Hep G2/体外微核试验检测3种持久性有机污染物(POPs)Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕的遗传毒性.方法 人肝肿瘤细胞Hep G2经Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕染毒24 h,继续在补充细胞松弛素B(3μg/ml)的培养液中培养24h后,计数1000个双核细胞中的微核.结果 20,40μmol/L毒杀芬处理HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比显著增加(P＜0.01,P＜0.01);经Aroclor1254(23～184μmol/L)和滴滴涕(17.8～60μmol/L)处理的HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比,差异无统计学意义.结论 Aroclor1254和滴滴涕未显示对Hep G2细胞明显的遗传毒性;毒杀芬可诱导Hep G2细胞遗传损伤,有必要进一步评价其对人类健康的潜在危害.
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TK6和WTK1细胞体外微核试验比较研究
目的:比较5种诱变剂诱导人类淋巴母细胞TK6和WTK1的微核反应.方法:用人的类淋巴母细胞TK6和WTK1进行体外微核试验,评价5种诱变剂的染色体损伤效应.结果:5种受试物均可诱导两种细胞微核率显著升高,但在大多数剂量和采样时间,受试物诱导的TK6细胞微核率均不同程度地高于WTK1细胞微核率.结论:TK6细胞对受试物诱导的染色体损伤更为敏感.
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流式细胞术检测体外微核方法的建立
目的：建立96孔板流式细胞术体外微核自动化检测的方法，并探讨其用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的可能性。方法：试验分为+S9短时处理组(4 h)和-S9持续处理组(24 h)，分别选择3个不同浓度的环磷酰胺和丝裂霉素C处理CHO-K1细胞，24 h后收获细胞。采用EMA和SYTOX Green双色标记，流式细胞仪分析96孔板的微核率，并与常规标准平皿培养、细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较。结果：在有或无S9处理条件下，不同浓度的环磷酰胺、丝裂霉素C诱导产生的微核率较溶剂对照组均显著增加(P均<0.05)，剂量-效应关系明显。两种微核检测方法的Spearman相关系数( rs)为1.000。结论：流式细胞术检测环磷酰胺、丝裂霉素C作用于CHO-K1细胞的微核试验结果均为阳性，与文献报道一致，因而本试验初步建立了流式细胞术体外微核检测方法。流式细胞术检测微核的方法与人工阅片的方法相关性好，提示该方法用于化合物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价具有良好的前景。
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芦荟大黄素及芦荟提取物的诱变性和抗诱变性
目的:用L5178Y小鼠淋巴瘤细胞体外微核试验评价芦荟大黄素和芦荟提取物的诱变和抗诱变作用,为其安全性评价提供依据.方法:设溶剂对照、阳性对照和抗诱变对照,芦荟大黄素和芦荟提取物诱变和抗诱变试验各设4个剂量组,处理L5178Y细胞12h后按常规方法进行体外微核试验分析.结果:较高浓度(6.67μg/ml)的芦荟大黄素可致微核细胞率增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；而芦荟提取物未见此效应.在一定剂量范围内,芦荟大黄素(0.22～6μg/ml)和芦荟提取物(20～180μg/ml)对甲磺酸甲酯(MMS)所致微核细胞率均有一定程度的拮抗作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:芦荟大黄素具有一定的诱变作用,而在本实验剂量范围内的芦荟提取物未见遗传毒性.两种受试物在一定范围内均能较好地拮抗MMS所致的染色体损伤.
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多遗传学终点的遗传毒性试验组合的建立
目的：建立Ames波动试验、中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞体外微核试验和小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(MLA)方法，探讨其作为一套新的遗传毒性试验组合检测化合物诱变性的可能性。方法：在Ames波动试验中，用TA100沙门氏菌进行96孔板的Ames波动试验，非活化条件下以叠氮钠(SA)、活化条件下以环磷酰胺(CP)染毒处理，计数阳性孔数并进行卡方检验。在CHL细胞体外微核试验中，非活化条件下用丝裂霉素C (MMC)分别染毒处理4和24 h，活化条件下用CP染毒4 h，计数2000个细胞中含微核的细胞数，并进行卡方检验。在MLA中，小鼠淋巴瘤细胞经清除自发突变后，非活化条件下用MMC、活化条件下用CP分别染毒处理3 h，计算相对存活率(RS)、相对悬浮增长率(RSG)、相对总增长率(RTG)、平板效率PE0、PE2、突变率(MF)、小集落比例(SC)。2结果：Ames波动试验中SA和CP在各自试验条件下阳性孔数均较对照组显著增加(χ>6.63，<0.01)，量效关系明显。CHL细胞体2外微核试验中，MMC和CP在各自试验条件下均引起微核率显著升高(χ>6.63，P<0.01)，量效关系明显。MLA中MMC和CP在各自+/-试验条件下均引起L5178Y 3.7.2C-tk 细胞的PE、RS、RSG和RTG呈剂量依赖性下降，MF呈剂量依赖性升高，高出溶剂对照的2倍以上。结论：此3种短期遗传毒性试验方法可互为补充、相互验证，其组合应用可提高检出化合物遗传毒性的准确性，有望得到进一步推广应用。P
关键词： Ames波动试验 体外微核试验 小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验
