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杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株携带毒力基因的特征
目的了解杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株的毒力基因特征.方法对近年从食物中毒病人、临床散发病人和外环境(小水产品)中分离的174株副溶血弧菌菌株,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测.结果临床来源的副溶血弧菌(94株来自食物中毒病人和34株来自散发腹泻病人)菌株的tdh携带率均大于97%,trh携带率为0%;而所有46株分离自环境(小水产品)的副溶血弧菌菌株未见有tdh携带,仅1株trh阳性.1株tdh阴性、trh阳性的副溶血菌株,其尿素酶试验为阳性,而在其他所有trh阴性的副溶血菌株中,不管其tdh是阳性或是阴性,尿素酶试验均为阴性.结论引起杭州地区食物中毒及散发腹泻的副溶血弧菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株,外环境中存在的trh阳性的副溶血弧菌也是一个潜在的病原.
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新型溶血素在临床检验中的价值分析
目的 对应用新型溶血素进行血常规检验的临床价值进行研究分析.方法 抽取60例健康体检正常人病例资料,分别采用传统溶血素和新型溶血素对其进行血常规检验.结果 采用B法进行血常规检测的Hb水平明显高于A法;该方法检测后的白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)水平与A法比较差异无统计学意义.结论 采用新型溶血素对血常规检验Hb水平会明显偏高,但可以采用相应方法进行纠正.
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单核李斯特菌溶血素蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化单核李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)溶血素(Listeriolysin O,LLO)蛋白.方法 用1对LM LLO基因特异性引物从LM基因组DNA中扩增LLO基因,并构建重组原核表达质粒pET-30a(+)/rLLO,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的rLLO蛋白经镍离子金属鳌合柱纯化后,进行SDS-PAGE及质谱分析.结果 重组表达质粒pET-30a(+)/rLLO经PCR、双酶切及测序,证明构建正确.表达的rLLO融合蛋白相对分子质量约为78 000,主要以包涵体形式表达.质谱分析显示,两个相对分子质量分别为35 000和45 000的小分子也均为LLO蛋白.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了rLL0蛋白,并进行了纯化,为进一步研究LLO蛋白的生物学功能及研制基于LLO蛋白的特异性诊断制剂奠定了基础.
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杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌食物中毒流行株的分型研究
目的:研究杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌食物中毒株与不同流行株进行耐热溶血素基因分析.方法:采集可疑食物标本等104株进行副溶血性弧菌血清分型,对45株流行株应用PCR技术对TDH和TRH检测.结果:富阳市1997年、1999年- 2001年、2003年- 2004年副溶血性弧菌以O1:K6、O3:K6、O4:K8三个血清型为食物中毒优势菌型；上城区2005年- 2007年以O1型23株；O2型1株；O3型37株；O4型25株；O5型1株；O10型1株为食物中毒优势菌.用PCR技术对45株TDH和TRH进行检测结果O1型16株,15株TDH阳性,1株TDH阴性；O3型9株TDH阳性；O4型20株,17株TDH阳性,3株TDH阴性.45株TRH1和TRH2全部阴性.结论:杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌所致食物中毒优势菌型以O1、O3、O4和O2、O5、O10血清璎为主,能够为食物中毒疾病预防和流行病学调查提供依据.
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杭州市上城区2005～2007年食物中毒事件病原体分析
目的:研究调查分析杭州市上城区2005年～2007年食物中毒事件的病原体动向,重点对副溶血性弧菌菌株进行血清分型,即不同血清型的耐热溶血素基因分析,为防止食物中毒事件的发生提供可靠的依据.方法:对采集自2005年～2007年上城区发生食物中毒事件中的食品、患者粪便、患者肛拭、呕吐物、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等,进行微生物学检验、副溶血性弧菌血清分型,应用PCR技术对其中45株副溶血性弧菌进行耐热直接溶血素基因(1'DH)和耐热直接溶血素相关基因(TRH)的检验.结果:2005～2007年共发生27起食物中毒,由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件发生16起(59.26%).由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件发生7起(25.93%).有4起食物中毒事件由2种及2种以上致病菌引起,其中2起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌和变形杆菌混合感染引起食物中毒;1起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌混合感染引发食物中毒;1起由副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌混合引发食物中毒.1位凉菜制作厨师同时带有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等三种致病菌引发食物中毒.对88株副溶血性弧菌进行血清分型,单独1种血清型副溶血性弧菌食物中毒事件发生14起(70%),由2种或2种以上混合血清型副溶血性弧菌引发食物中毒事件6起(30%).26起由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件中,88株副溶血性弧菌进行血清分型:检出01型23株(26.14%),检出02型1株(1.14%),检出03型37株(42.05%),检出04型25株(28.41%),检出05型1株(1.14%),检出010型1株(1.14%).45株不同血清型的副溶血性弧菌,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因和耐热直接溶血素相关基因(TDH和TRH)的检测分析.结果表明:01型的16株菌中有15株TDH阳性,1株TDH阴性;O3型的9株菌全部TDH阳性;O4型的20株菌中,17株TDH阳性.3株TDH阴性.45株菌的TRH1和TRH2全部阴性.结论:加强对食品卫生饮食行业的监督管理,提高对食物中毒病原体快速准确检测,以控制减少食物中毒的发生.
