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肝干细胞的研究进展
肝干细胞的来源主要有以下几个方面:1.肝实质细胞;2.卵圆细胞;3.骨髓造血干细胞;4.胚胎肝细胞;5、肝细胞样祖细胞.本文就近几年肝干细胞的来源及其分化的相关文献作一综述.
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慢性病毒性肝炎患者甲胎蛋白的检测及临床意义
甲胎蛋白(AFP)是胚胎肝细胞和卵黄囊细胞产生的一种特殊球蛋白,在电泳谱上介于白蛋白与α1球蛋白之间.AFP是胎儿血清的正常成分,出生后逐渐停止合成,约于第五周用常规方法已不能正常检出.慢性病毒性肝炎的甲胎蛋白常呈不同程度升高.本文通过对144例慢性病毒性肝炎的甲胎蛋白的检测,探讨甲胎蛋白的变化与肝炎病情严重程度及预后的关系.
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胚胎肝细胞用于肝组织工程的体外培养研究
目的:观察三维受控组装系统下,胚胎肝细胞在三维立体结构的体外生长状态,探讨胚胎肝细胞在肝组织工程中应用的可行性.方法:用清华大学机械工程系研制的”三维受控组装系统”,将第15d小鼠胚胎肝细胞作为肝组织工程的种子细胞,与以明胶为主的复合材料混合,构建成复杂三维立体结构,观察其体外生长发育状态.对体外培养1周及4周的三维类肝组织标本进行苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学方法检测甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(ALB)的表达,并对体外培养4周的三维类肝组织用PAS显色法检测肝糖原表达.结果:HE染色结果显示体外培养的胚胎肝细胞在三维支架材料中,可形成含有类血管和肝组织样结构;体外培养1周的类肝组织AFP表达呈阳性,体外培养4周的三维类肝组织ALB表达呈阳性,PAS显色亦呈阳性.结论:在三维受控组装系统的构建下,呈立体状生长的胚胎肝细胞,可逐渐形成肝组织样结构,并显示一定的肝脏功能.
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静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米材料与小鼠胚胎肝细胞生物相容性的研究
目的 探讨小鼠胚胎肝细胞与静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)-聚乙二醇(PEG)共聚物纳米材料的体外生物相容性.方法 采用胰酶分步消化法分离培养孕16 d昆明小鼠胚胎肝细胞并进行免疫荧光鉴定;使用静电纺丝法制备PLGA和PLGA-PEG纳米材料;取第5代胚胎肝细胞分别接种于PLGA和PLGA-PEG纳米纤维材料上,进行体外培养,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定两种材料的细胞毒性及细胞在材料表面的黏附、增殖;扫描电镜(SEM)观察材料结构、细胞复合材料的形态.结果 体外分离培养的小鼠胚胎肝细胞呈单层多边形样生长,免疫荧光检测胚胎肝细胞角蛋白18(CK18)和甲胎蛋白(AFP)表达阳性;CCK-8检测显示PLGA(0.255±0.062、0.259±0.039、0.239±0.029、0.257±0.026)和PLGA-PEG (0.293±0.033、0.283±0.200、0.249±0.021、0.244±0.025)两种纳米材料与空白对照组(0.258±0.017)比较均无明显的细胞毒性(P＞0.05).小鼠胚胎肝细胞在材料表面生长良好,PLGA-PEG组(0.113 ±0.005、0.234±0.008、0.678±0.006、1.108±0.004、1.182±0.004、1.114±0.011)及PLGA组(0.108±0.005、0.206±0.010、0.502±0.009、0.817 ±0.005、0.807±0.007、0.819±0.005)吸光度(A)值均随时间延长而增大.两组A值在各时间点差异均有统计学意义(P＜0.05).各时间点两组材料的细胞黏附率差异有统计学意义,PLGA-PEG组(21.250±2.165、51.250±7.806、75.000±3.750)明显高于PLGA组(15.000±3.750、38.750±7.806、65.000±4.330,P＜0.05).SEM结果显示,与PLGA组比较,PLGA-PEG组中小鼠胚胎肝细胞更易于黏附生长.结论 静电纺丝法制备的PLGA-PEG纳米材料具有良好的细胞生物相容性,安全无毒,适宜胚胎肝细胞生长.
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商陆遗传毒性研究
目的:探讨商陆水煎液对试验小鼠及胚胎的遗传毒性.方法:采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验法、小鼠胚胎细胞转移微核实验法.结果:商陆10g/kg或给孕鼠5g/kg可分别诱发小鼠骨髓和胚胎肝内的嗜多染红细胞微核率阳性.结论:商陆在一定剂量时对小鼠具有潜在致突变性,且小鼠胚胎肝嗜多染红细胞明显比骨髓的细胞对药物敏感.
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鼠胚胎肝细胞在体外L-聚乳酸支架上的长期培养及其成熟化诱导
目的研究三维生物降解材料L-聚乳酸(PLLA)对胚胎肝细胞的支持作用及制瘤素M(OSM)、尼克酰胺(NA)和二甲亚砜(DMSO)在胚胎肝细胞成熟化中的作用,探讨胚胎肝细胞在肝脏组织工程中应用的可行性.方法将两步法分离获得的E 14.5-C57 BL/6 CrSlc小鼠胚胎肝细胞接种于具有三维立体多孔结构的PLLA支架后,在含有及不含有OSM、NA和DMSO的Williams' E条件培养基中进行原代长期培养,了解其增殖能力、形态及功能变化. 结果与单层培养相比,三维立体PLLA支架培养胚胎肝细胞其细胞数量与白蛋白的分泌量均明显增加;单层培养中,单独添加OSM组白蛋白分泌仅有轻微增加,但PLLA培养中OSM组的胚胎肝细胞白蛋白分泌量明显增加;无论是单层培养或PLLA培养,OSM/NA/DMSO组白蛋白分泌均明显增加. 结论三维PLLA支架是胚胎肝细胞培养的良好支持物;OSM、NA和DMSO可明显促进肝脏实质细胞在体外的成熟.
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永生化肝细胞移植治疗肝衰竭
目的: 观察永生化胎肝细胞及胚胎肝细胞经脾脏移植对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用. 方法: 采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭,分3组进行治疗实验,Ⅰ组: 经脾脏移植永生化胎肝细胞2×107个;Ⅱ组: 移植原代胚胎肝细胞2×107个;Ⅲ组: 脾脏注射生理盐水1 mL,各组大鼠同时肌肉注射环孢霉素A(CsA) 10 mg/kg. 观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化情况. 结果: Ⅰ组及Ⅱ组大鼠存活率均显著高于Ⅲ组大鼠(72.2% vs 22.2%, 61.1% vs 22.2%, P＜0.01),肝脏功能及肝脏病理均有改善, Ⅰ组与Ⅱ组之间大鼠存活率无明显差异(72.2% vs 61.1%, P＞0.05). 结论: 经脾脏移植胚胎肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,改善肝功能及肝脏病理,该永生化胎肝细胞可以成为肝细胞移植研究中的理想细胞材料.
