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白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响研究
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用及白藜芦醇对TRAIL的增敏效果.方法 培养SMMC-7721细胞,同步化后,分成对照组、TRAIL干预组、Res+ TRAIL干预组,作用24h后,收集细胞,用流式细胞仪进行凋亡分析.结果 对照组SMMC-7721细胞的凋亡率为3.02％±0.17％,TRAIL干预组凋亡率为8.55％±1.46％,Res+TRAIL干预组中25μmol·l-1、50μmol·l-1、100μmol·-1 凋亡率分别为8.61％±1.41％、20.72％±1.33％、27.19％±1.43％.TRAIL干预组、Res+ TRAIL干预组与对照组相比,差异均有显著性(P＜0.01).Res+ TRAIL干预组(50μmol·l-1、100μmol·l-白藜芦醇)与TRAIL干预组相比,差异均有显著性(P＜0.01);而Res+ TRAIL干预组(25μmol·1-1白藜芦醇)与TRAIL干预组比较差别无显著性(P＞0.05).结论 本研究表明TRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,且呈剂量依赖关系.
关键词： 白藜芦醇 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 肝癌 凋亡 -
SAHA和TRAIL联合作用对MDA-MB-231细胞增殖影响
目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合作用对三阴乳腺癌细胞系细胞增殖影响.方法 以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,实验设对照、SAHA、TRAIL、SAHA+ TRAIL组,应用自动细胞分析仪检测MDA-MB-231细胞活力、细胞凋亡率和细胞周期变化,采用实时定量PCR和固相凋亡抗体芯片技术检测MDA-MB-231细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组(96.6％)比较,SAHA、TRAIL、SAHA+ TRAIL组MDA-MB-231细胞活力(分别为82.5％、87.1％、57.6％)明显降低,细胞增殖被明显抑制,SAHA与TRAIL联合应用对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用具有协同效应;与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用使MDA-MB-231活细胞比率降低39％,活细胞总数下降超过40％;实时定量PCR和凋亡抗体芯片筛查结果表明,与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用后MDA-MB-231细胞caspase-3、TRAIL DR5以及p21 CIP1表达量明显增加,Bcl-2、Bcl-x、p53表达量明显减少.结论 SAHA与TRAIL联合应用对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具有协同抑制作用,其机制可能与激活TRAIL相关细胞凋亡通路,诱导细胞凋亡有关.
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乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响
目的 构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察其对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响.方法 利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,MTT法检测A549细胞增殖的变化,流式细胞术检测A549细胞周期的变化.结果 BamH I和Sma I酶切,所得片段大小分别为1 284 bp和4 998 bp、2 292 bp和3 990 bp;以载体为模板,Egr1和shTRAIL引物进行PCR扩增,可得到469 bp和820 bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确.转染肺腺癌A549细胞后,乏氧与辐射能够降低细胞增殖能力,增加G0/G1和S期细胞百分比,降低G2/M期细胞百分比(P＜0.05,P＜0.01),二者联合作用更明显.结论 乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因在乏氧和/或辐射条件下能够延长细胞G0/G1和S期,缩短G2/M期,并且抑制肺腺癌A549细胞增殖能力,二者协同作用更明显.
关键词： 乏氧/辐射 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 增殖 周期 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体临床治疗应用前景
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)具有选择性细胞毒性,不仪诱导肿瘤细胞凋亡,还诱导肝和脑细胞凋亡,也诱导病毒感染的细胞凋亡,但对机体正常组织无毒性.TRAIL已成为全球新药研究的热点.本文从TRAIL的凋亡通路及其调控、肿瘤细胞对TRAIL抵抗的原因综述TRAIL在难治性疾病治疗中的应用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 凋亡 临床治疗 -
小鼠肝星状细胞(HSC)中ATF5促进TRAIL基因的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用
目的 探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5(activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用.方法 半定量RT-PCR检测HSCs中ATF5 mRNA、TRAIL mRNA的表达水平,流式细胞术检测HSCs表面TRAIL蛋白质水平.慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs,针对ATF-5基因进行RNA干扰,半定量RT-PCR检测慢病毒感染的HSCs中ATF5 mRNA及TRAIL mRNA水平.单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)观察HSCs和慢病毒感染的HSCs对T细胞的增殖反应.分别将单纯胰岛、胰岛联合HSCs、胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植到小鼠的肾包膜下,比较移植胰岛的存活时间.结果 γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)上调HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平(P＜0.01),IFN-γ亦可上调HSCs表面TRAIL蛋白质水平.慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA水平明显下降(P＜0.01),TRAIL mRNA水平亦下降(P＜0.05).IFN-γ作用于感染慢病毒的HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平亦增加(P＜0.01),但明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P＜0.01).HSCs可明显抑制T细胞增殖反应(P＜0.01),慢病毒感染的HSCs亦能抑制T细胞增殖反应(P＜0.05),但抑制作用明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P＜0.01).单纯胰岛移植组(A组)移植胰岛中位存活时间为11天;胰岛联合HSCs移植组(B组)移植胰岛中位存活时间为88天,B组胰岛移植物存活时间明显长于A组(P＜0.01);胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植组(C组)移植胰岛中位存活时间为18天,C组胰岛移植物存活时间长于A组(P＜0.01),但明显短于B组(P＜0.01).结论 小鼠HSCs中ATF5可促进TRAIL基因表达,表达TRAIL的HSCs可以抑制T细胞的增殖反应,此HSCs与胰岛细胞联合移植,明显延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间.
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肺腺癌细胞 DR4基因启动子甲基化与 TRAIL 敏感性的相关性研究?
目的：探讨 DR4基因启动子甲基化水平与肺腺癌细胞株对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）敏感性之间的相关性。方法选取未经5?氮杂?2’?脱氧胞苷（5?Aza?CdR）处理和10μmol／ L 5?Aza?CdR 处理3 d 后的肺腺癌细胞A549、LTEP?α?2，采用 CCK?8法检测细胞增殖抑制率，倒置显微镜下观察细胞形态学改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率；采用RT?PCR 法、免疫印迹法和甲基化特异性 PCR（MSP）法分别检测肺腺癌细胞株（A549、LTEP?α?2）DR4基因 mRNA、蛋白表达和启动子区甲基化状态。结果肺腺癌细胞（A549、LTEP?α?2）对低浓度 TRAIL 高度耐受，提高 TRAIL 浓度（15??625、31??25、62??5、125、250、500μg／ ml）作用细胞24、48 h 后，细胞生长受到不同程度抑制，且呈剂量和时间依赖性；经5?Aza?CdR 处理后， TRAIL 对肺腺癌细胞的增殖抑制作用均较处理前显著增强（P＜0??05），倒置显微镜下细胞形态表现出变圆、皱缩甚至脱落等特征。应用5?Aza?CdR 处理后，125μg／ ml TRAIL 诱导肺腺癌细胞的凋亡率较处理前明显升高（P＜0??05）。 A549、LTEP?α?2细胞存在 DR4 mRNA 及蛋白的低表达，其基因启动子处于甲基化状态；经5?Aza?CdR 处理后，肺腺癌细胞中 DR4 mRNA 及蛋白的表达均显著升高（P＜0??05），其基因启动子处于非甲基化状态。结论5?Aza?CdR 可以逆转 DR4基因启动子甲基化状态，上调基因表达，增强 TRAIL 诱导肺腺癌细胞凋亡的能力，从而逆转 TRAIL 耐药。5?Aza?CdR 联合 TRAIL 可能是治疗肺腺癌的一种新策略。
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TRAIL的诱导肿瘤细胞凋亡与临床
TRAIL是近发现的属肿瘤坏死因子家族新成员,它能选择性地杀伤多种肿瘤细胞而对正常细胞没有细胞毒性.它的作用机制主要通过细胞膜的表面死亡受体DR4和DR5介导细胞的凋亡信号,激活细胞内的多种诱导细胞凋亡蛋白的表达.主要的途径是通过TRAIL与死亡受体结合后促进DISC的形成和caspase8的激活,然后启动非依赖线粒体的凋亡途径和线粒体的凋亡途径.非线粒体凋亡途径通过激活的csapase8直接激活caspase3,从而启动细胞的凋亡.线粒体依赖途径通过激活的tBID导致细胞色素C的释放,与Apaf1和caspase9形成凋亡小体导致细胞的凋亡.通过以往的研究表明,非融合表达的TRAIL能明显诱导多种肿瘤细胞的凋亡,对正常人和猴的肝细胞没有细胞毒性,提示非融合表达的人TRAIL蛋白可能是未来有发展前途的抗肿瘤药物.
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敲低TRAIL-DR5抑制辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)诱导的MCF-7乳腺癌细胞自噬
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-死亡受体5(TRAIL-DR5)在辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬过程中的调控作用.方法 对数生长期MCF-7细胞分为空白对照组、SAHA处理组、TRAIL-DR5 siRNA处理组及SAHA联合TRAIL-DR5 siRNA处理组.Western blot法验证TRAIL-DR5的沉默效果,定量PCR阵列检测细胞自噬相关基因9B(ATG9B)、微管相关蛋白1轻链3A(LC3A)及LC3B的mRNA水平;Western blot法检测MCF-7细胞自噬相关蛋白beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7、ATG12、ATG16、ATC4A、ATG4B、ATG9B及LC3Ⅱ和组织蛋白酶B(CTSB)的蛋白水平;ELISA分析乳腺癌细胞培养上清液CTSB水平;免疫荧光细胞化学染色检测乳腺癌细胞LC3Ⅱ表达和分布.结果 TRAIL-DR5 siRNA转染后明显敲低MCF-7细胞的TRAIL-DR5水平.敲低TRAIL-DR5受体可抑制上述自噬相关基因及蛋白的表达水平,抑制乳腺癌细胞中CTSB蛋白的表达;SAHA处理MCF-7细胞后,LC3Ⅱ含量增加,当敲低TRAIL-DR5受体后,LC3Ⅱ水平明显弱于单独SAHA处理的细胞.结论 敲低TRAIL-DR5受体抑制SAHA诱导的MCF-7乳腺癌细胞自噬作用.
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白藜芦醇促进膀胱癌细胞对TRAIL凋亡诱导作用的研究
目的 探讨白藜芦醇对膀胱癌细胞的作用及其与TRAIL联合对膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其可能的机制.方法 MTT法检测白藜芦醇或/和TRAIL对膀胱癌细胞5637和T24体外生长能力的影响.流式细胞术测定白藜芦醇和/或TRAIL对细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响.Western blot检测白藜芦醇对死亡受体(DR)4、5与细胞凋亡相关蛋白表达水平的变化.结果 MTT证实白藜芦醇可抑制膀胱癌细胞体外生长能力,且呈剂量与时间依赖性.单独应用TRAIL未能抑制膀胱癌细胞的生长,但与白藜芦醇联合应用时可显著抑制细胞的增殖速度.白藜芦醇能够诱导膀胱癌细胞发生凋亡,而TRAIL则不能诱导细胞凋亡,但联合应用白藜芦醇和TRAIL可诱导膀胱癌细胞发生显著的凋亡.此外,在白藜芦醇或联合应用白藜芦醇与TRAIL可诱导肿瘤细胞丢失线粒体膜电位(AΨm),而单独应用TRAIL则未能诱导线粒体膜电位的丢失.Western blot结果表明,白藜芦醇可上调DR4和DR5的表达,并下调Bcl-2与survivin的表达.结论 白藜芦醇可抑制膀胱癌5637和T24细胞增殖并诱导细胞凋亡.此外,白藜芦醇可以提高膀胱癌细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡作用.单独应用白藜芦醇或与TRAIL联合应用可能成为临床膀胱癌治疗的新策略.
关键词： 白藜芦醇 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 膀胱癌 凋亡
