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用于我国新生儿HIV-1感染早期诊断的单管降落巢式三重PCR检测方法的建立
目的 我国面临着艾滋病母婴垂直传播的挑战.发展经济、有效的新生儿HIV-1感染早期诊断方法至关重要.本研究拟结合降落PCR、巢式PCR、多重PCR技术,以期建立一种能够在同一个PCR反应体系中同时扩增Env、Gag、Pol三个基因区的单管降落巢式三重PCR方法用于我国新生儿滤纸干血斑样本(DBS)中的HIV-1前病毒DNA检测,并对所建立的方法进行初步评价.方法 样本采自云南、新疆、广西、河南四省HIV-1阳性母亲所生婴儿.用18个DBS样本进行方法优化(感染婴儿及未感染婴儿样本分别9个).采用由重组质粒及8E5细胞制备的涵盖HIV-1各亚型的DNA稀释盘确定方法的亚型适用性及检测下限.采用134个DBS样本进行临床评价(含25个感染婴儿的64个DBS样本及30个未感染婴儿的70个DBS样本).结果 所建方法对HIV-1 A、AE、AG、B、BC、C、D、F、H亚型均可适用,检测下限为3拷贝/PCR反应体系；其临床特异度100％,阳性检出率在3月龄时接近95％、6月龄时可达到100％.结论 本研究建立的方法能够检测出我国新生儿DBS样本中各亚型的HIV-1前病毒DNA,且省时、省力、节约成本,在我国新生儿HIV-1感染的早期诊断领域具备应用潜力.
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三重PCR鉴别牛、羊和猪3个布氏杆菌种的方法研究
布氏杆菌是引起布氏杆菌病的病原体.根据宿主范围、培养生物特性、氧化代谢和抗原特征等,布氏杆菌属主要分为6个种(specides)19个生物型(biovar)[1-2].
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O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法的建立
目的 建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法.方法 基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法.对该方法的检测特异性和灵敏度进行分析.结果与结论 该方法对O3∶K6血清型副溶血性弧菌具有很好的检测特异性,灵敏度可以达到102 CFU/PCR反应体系.
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肉鸡源弯曲菌的分离、多重PCR鉴定及其耐药性分析
目的 了解肉鸡屠宰加工过程中弯曲菌的污染及其耐药情况.方法 根据GB 4789.9-2008,采用增菌培养、选择性平板分离、生化鉴定从肉鸡屠宰过程中分离疑似弯曲菌,并以弯曲菌属的16S rRNA、空肠弯曲菌的HipO和结肠弯曲菌的CeuE为靶基因,采用三重PCR方法对疑似菌株进行鉴定.采用琼脂稀释法对弯曲菌阳性菌株进行8种常用抗生素的药敏试验,参考CLSI标准(2010)判定药敏结果.结果 根据形态特征、生化指标及PCR鉴定结果,从651份样品中,鉴定出空肠弯曲菌160株、结肠弯曲菌130株,其他弯曲菌11株,弯曲菌总分离率为46.24％;其中屠宰前、屠宰过程中及屠宰后鸡肉中弯曲菌的污染率分别为56.10％、31.00％、17.00％,可能存在由屠宰前向屠宰后传播趋势.药敏试验表明,弯曲菌对环丙沙星、左氧氟沙星、四环素和林可霉素的耐药率较高,分别为93.02％、87.71％、87.71％、80.07％,对庆大霉素、红霉素、链霉素、氟苯尼考的耐药率分别为67.11％、49.50％、31.89％、13.29％.结论 肉鸡屠宰过程中弯曲菌的污染及其耐药情况较为严重,应该加强卫生和抗生素使用监督.
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猪源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析
目的 为调查猪肠道内空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行和耐药性状况.方法 本试验自北京郊区养猪场和屠宰场采集猪肠道粪便样品,经增菌培养后利用三重PCR进行弯曲菌属、空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测,进而对PCR检测阳性样品进行弯曲菌的分离鉴定,后对分离鉴定的弯曲菌分离株进行药敏试验鉴定.结果 本试验共采集猪肠道和肛门棉拭子样品241份,PCR检测结肠弯曲菌阳性样品数为178份,阳性率为73.9%,而空肠弯曲菌阳性样品数5份,阳性率仅为2.1%.经分离鉴定后共获得结肠弯曲菌菌株63株,分离率为35.4%,未分离获得空肠弯曲菌菌株.对26种抗生素的药敏试验结果显示结肠弯曲菌分离株对氯霉素(100%)、丁胺卡那(93.65%)、强力霉素(91.48%)、庆大霉素(82.54%)和阿莫西林(82.54%)等抗生素比较敏感,而对头孢哌酮(100%)、头孢氨苄(100%)、头孢拉啶(100%)、头孢唑啉(98.41%)、头孢克肟(92.06%)、萘啶酸(92.06%)、链霉素(90.48%)、环丙沙星(90.32%)、诺氟沙星(88.89%)和青霉素(87.30%)具有显著的耐药性;而且分离株多重耐药现象比较普遍,主要集中于14-20耐.结论 本试验结果显示猪肠道内普遍存在结肠弯曲菌,而且菌株对多种抗生素产生了显著的耐药性.
