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一种在体标记成体大鼠室管膜/室下区细胞的方法
目的 研究正常成体大鼠侧脑室注射DiI标记室管膜/室下区(SVZ)细胞的方法.方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,均接受2 g/L的 DiI 10 μL右侧脑室注射.采用H33258染色和激光共聚焦显微镜检测DiI注射后6 h、12 h、24 h、36 h和48 h时左侧脑室壁的标记细胞以及标记组织厚度.结论 右侧脑室DiI注射后24 h,DiI标记细胞位于左侧脑室的室管膜层; DiI注射后48 h,DiI标记细胞限定于左侧室的管膜层和室下区.此外,左侧室管膜/中隔室下区(SVZspt)和室管膜/神经节隆起的生后对应物(SVZge)部位荧光标记组织的厚度分别在DiI注射12 h和24 h后维持于稳定水平,而且,在相应各时间点上,室管膜/SVZge部位荧光标记组织的厚度都厚于室管膜/SVZspt部位(P＜0.05).结论 2 g/L 的DiI 10 μL注射于正常大鼠侧脑室后24～48 h,可能仅标记室管膜/室下区细胞.
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成年小鼠脑室下区及室周器官BrdU标记细胞的对比观察
目的:比较成年健康小鼠脑室下区及室周器官BrdU标记细胞的数量及分布,探讨生理状态下室周器官的神经生发功能.方法:成年健康BALB/c小鼠,腹腔注射BrdU(50 mg/kg),连续3d给药.4d后用含4％多聚甲醛的磷酸缓冲液灌注动物,取脑制备石蜡切片,免疫组织化学染色.结果:侧脑室室下区可见大量BrdU标记细胞(33.70％±1.92％),在后区、穹窿下器及脉络丛内BrdU标记细胞分别为(2.42％±0.38％),(2.78％±0.67％)和(1.12％±0.24％),连合下器未见BrdU标记细胞.侧脑室室下区BrdU标记细胞分别与室周器官BrdU标记细胞相比较均具有显著差异(P＜0.05).后区及穹窿下器BrdU标记细胞的数量分别与脉络丛的Br-dU标记细胞的数量相比均具有显著差异(P＜0.05).结论:室周器官存在少量的BrdU标记细胞,这表明生理状态下成年小鼠室周器官具有一定程度的神经生发功能;但室周器官神经生发功能比室下区的神经生发功能弱的多.
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液压性脑损伤后室下区神经干细胞的分离培养与鉴定
目的 分离液压性脑损伤室下区巢蛋白(nestin)和胶质酸性纤维蛋白(GFAP)阳性(nestin+/GFAP+)共存细胞进行培养和诱导分化,观察其分裂、增殖和分化能力,以阐明损伤反应性星形胶质细胞增生过程中nestin+/GFAP+共存细胞是否具有神经干细胞特性.方法 用液压冲击法建立动物模型,分离损伤成年SD大鼠室下区nestin+/GFAP+共存细胞,制成单细胞悬液,培养和诱导分化,以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及原代和传代培养诱导分化的细胞进行鉴定.结果 结果显示培养及传代的细胞不断分裂增殖,可以形成悬浮生长nestin阳性的神经球;神经球诱导分化后可以分化为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞.结论 成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统神经干细胞.
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损伤反应性星形胶质细胞对成年大鼠室下区的再生作用
目的 ①观察液压性脑损伤后不同时期室下区Nestin和GFAP的表达及其细胞类型.②分离脑损伤室下区Nestin+/GFAP+共存细胞进行培养、诱导分化鉴定.方法 ①用液压冲击法建立SD大鼠动物模型,用免疫组化和免疫荧光双标法分析和显示不同时期(1、3、5 d,1、2、3、4、6、8周)Nestin和GFAP的表达变化以及细胞类型.②分离液压损伤SD大鼠室下区Nestin+/GFAP+共存细胞,制成单细胞悬液,进行培养、传代,以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及诱导分化的细胞进行鉴定.结果 ①室下区免疫荧光染色:正常组及空白对照组在前脑侧脑室SVZ区出现神经干细胞,主要集中在外侧壁上部和上角,其他部位及三脑室的SVZ区有少量神经干细胞.脑损伤模型组脑损伤24 h后,和正常组相比,室下区Nestin和GFAP的表达显著增加,阳性表达在3 d后逐渐达到高峰,持续1周.②在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球;神经球贴壁后分化的细胞表现为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞的形态,且分别呈GalC阳性、β-tublin Ⅲ阳性和GFAP阳性.结论 ①成年大鼠液压性脑损伤可诱导室下区表达Nestin和GFAP,Nestin的表达和反应性星形胶质细胞增生呈正相关,且表达多相互共存,并且具有星形胶质细胞的形态;室下区的星形胶质细胞和神经干细胞都对脑损伤都有反应,并可能参与中枢神经系统损伤修复.②成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多分化潜能,可以分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞,是中枢神经系统的干细胞.
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川芎嗪对脑缺血后不同脑区神经元型NO合酶表达的影响
目的 通过观察脑缺血后不同时间、不同脑区神经元型NO合酶(nNOS)的表达,探讨川芎嗪对脑缺血后nNOS表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血模型组及川芎嗪低(20mg/kg)、中(40mg/kg)、高(80mg/kg)剂量组5组,每组按缺血后时间又分为1、3、7、14、21d 5个亚组.线栓法制作左侧大脑中动脉阻塞模型,术后2h腹腔注射不同剂量的川芎嗪(1次/d),至处死前2h.免疫组化染色观察脑缺血后不同时间侧脑室室下区(SVZ)、胼胝体(CC)、梗塞区周围纹状体和大脑皮质、海马CA1区及齿状回(DG) nNOS表达.结果 假手术组各脑区不同时间nNOS的表达相近,差异均无统计学意义(P>0.05).在SVZ,模型组1～14d nNOS表达降低,21d 时增高;川芎嗪各剂量组均表现为3～14d nNOS表达明显降低,21d明显增高.在CC,模型组3～14d明显降低,21d有所回升;芎嗪各剂量组nNOS表达均表现为3～14d明显降低,以中、高剂量组降低为明显,21d增高.在缺血周围皮质和纹状体,模型组nNOS表达均表现为3、7d明显降低,14、21d呈明显增加趋势;川芎嗪各剂量组nNOS的表达3～21d均较低,以中、高剂量组7～14d降低为明显,21d时稍有回升.在DG、CA1区,模型组3、7d nNOS表达明显降低,14d时增高;川芎嗪各剂量组3～21d nNOS的表达均降低.各脑区不同时间点nNOS表达模型组与川芎嗪各组间均存在明显差异(P<0.05).结论 川芎嗪对脑缺血后3～14d各脑区nNOS的表达有明显抑制作用,提示川芎嗪可能通过抑制nNOS的表达、减少NO产生发挥其脑保护作用.
