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复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究
目的 建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法.方法 研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断.结果 该检测方法的特异性为100％,低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101～1×106拷贝范围内的模板进行定量,低可检测至1×102 cfu/ml细菌.该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均＜5％.结论 本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义.
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复合探针荧光定量PCR法检测布鲁氏菌的实验研究
目的:建立用复合探针荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌的方法.方法:研究根据BSCP31基因编码31KDa的布鲁氏杆菌表面蛋白的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测布鲁氏菌的方法,用于布鲁氏菌病的筛选和诊断.结果:结果表明该检测方法的特异性为100％,低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1× 101-1× 106拷贝范围内的模板进行定量,低可检测至1× 102CFU/ml细菌.该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定三次及同一时间五次重复实验结果CV值均小于5％.结论:本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测布鲁氏杆菌的方法,可对布鲁氏病原菌进行快速检测,对布病的筛选和确诊具有重要意义.
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复合探针PCR定量检测HBV方法的建立及临床应用
我们采用复合探针技术,设计、建立的实时、荧光定量检测HBV DNA的方法,对实验条件进行了优化,并对临床提供的202份血清标本进行HBV DNA检测,与ELISA方法结果进行比较.
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应用复合探针实时荧光定量RT-PCR技术高灵敏度检测呼吸道合胞病毒
目的 建立一种运用复合探针实时荧光定量PCR技术检测呼吸道合胞病毒(RSV)的方法.方法 根据复合探针技术原理,以其F蛋白基因作为基因靶序列建立检测方法,对引物与探针进行优化与筛选;对检测的灵敏度、特异性、精密度等进行评价,并通过对259例临床标本的检测对本方法的检测效果进行评估.结果 本方法的检测灵敏度RSV A型可达2.0×102 PFU/ml、RSV B型低可达5.0×102 PFU/ml;与非呼吸道合胞病毒等常见呼吸道病毒均无交叉反应;批间批内变异系数均小于5％;与临床咽拭子标本的检测结果对比表明,该方法与临床诊断结果的符合率为99.23％.结论 该方法建立的荧光定量RT-PCR检测技术能够快速、准确、特异、高灵敏度的对呼吸道合胞病毒核酸进行定性分析,为呼吸道合胞病毒的临床检测提供了新的、更为有效的检测方法.
关键词： 呼吸道合胞病毒 复合探针 实时荧光定量RT-PCR
