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不同pH值对变异链球菌ffh基因表达的影响
目的：???检测变异链球菌（S.?mutans）ffh基因在不同pH值条件下的表达水平，分析pH值对S.?mutans?ffh基因表达的影响，分析调控ffh表达的因素。方法???在不同培养时段（4?h和18?h）和不同pH值（pH值4.0~7.0）条件下培养S.?mutans标准菌株UA159，提取样本，用荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测样本中目的基因ffh的mRNA转录水平的变化情况，分析S.?mutans?ffh基因在不同培养时段和pH值条件下的表达变化趋势。结果???培养4?h时，ffh基因相对表达量随着pH值的降低而减少，培养18?h时，ffh基因相对表达量随着pH值的降低而增加；相同pH值条件下，ffh基因相对表达量在培养4?h与18?h时的差异有统计学意义（P<0.05）。结论???S.?mutans?ffh基因的表达受细菌培养时段和pH值的影响。
关键词： 变异链球菌 ffh基因 荧光定量聚合酶链反应 -
高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选
目的 初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株.方法 通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力,初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株.结果 不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同,其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高,提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株,另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低,提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株.结论 通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株.
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甘草酸对酸性环境中变异链球菌生长影响的体外研究
目的 研究酸性环境中甘草酸对体外培养变异链球菌生长的影响.方法 在pH 7.0、pH 5.5和pH 4.0环境中培养变异链球菌,同时在培养基中加入3种浓度(0.78、1.57、3.13 mg·mL-1)的甘草酸,37℃下厌氧培养24h后,测定各组的菌落计数和菌悬液吸光度值,分别以阴性对照组和pH 7.0组细菌生存率为对照,计算各组细菌的生存率.结果 以阴性对照组为对照,0.78、1.57和3.13 mg·mL-1甘草酸组在pH 5.5环境时细菌生存率为60.96％、60.27％和45.58％,在pH 4.0时细菌生存率为68.75％、53.12％和45.83％.以pH 7.0组为对照,0.78、1.57和3.13 mg·mL-1甘草酸组在pH 5.5和pH 4.0时细菌生存率分别为52.25％和39.05％、74.39％和43.11％、86.38％和55.30％.结论 在酸性环境中,甘草酸能够抑制体外变异链球菌的生长,环境酸度降低可使甘草酸的抑菌作用增强.
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烤瓷表面抛光和上釉对其表面粗糙度及细菌黏附的影响
目的 比较不同抛光方法对烤瓷表面粗糙度的影响,以及不同粗糙度烤瓷表面对口腔变异链球菌黏附的影响.方法 采用原子力显微镜测量不同抛光方法对瓷表面粗糙度的影响,并通过细菌实验观察不同粗糙度的瓷表面对细菌黏附的影响.结果 用抛光膏抛光或者上釉后,瓷面平整且有光泽.无论是表面粗糙度还是表面黏附的细菌数,橡皮轮组都大于抛光膏组和上釉组(P＜0.05).结论 建议调改过的瓷表面进行抛光膏抛光或上釉以恢复瓷表面的光滑度和减少口腔致龋菌的黏附.
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赤藓糖醇对变异链球菌作用机制的实验研究
目的 研究赤藓糖醇对变异链球菌细胞壁结构的影响,探讨其抑制变异链球菌生长的机制.方法 测定在蔗糖和赤藓糖醇条件下变异链球菌所在的液体培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；在扫描电镜下观察变异链球菌表面的形态变化,了解赤藓糖醇对变异链球菌细胞壁的影响.结果 在赤藓糖醇组中,变异链球菌所在的液体培养基内LDH的含量和蔗糖组有差别,但差别甚微.扫描电镜显示:在赤藓糖醇组中,变异链球菌的表面形态清晰,没有内容物溢出的迹象.结论 赤藓糖醇可能不是通过影响细胞壁结构和功能的完整性而抑制变异链球菌的.
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赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸作用的对比研究
目的 对比相同浓度下赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸的影响.方法 分别用含0.5%、1%、2%、4%、8%、12%、16%赤藓糖醇和木糖醇的TPY培养基在厌氧条件下培养变异链球菌,分别于0、2、4、6、8、10、12、18、24h测量液体培养基的光密度值(A值)和pH值,运用SPSS描绘其变化曲线图.结果 在0.5%、1%、2%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基高,pH值较木糖醇培养基低,说明变异链球菌在含0.5%、1%、2%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基高.在8%、12%、16%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基低,pH值较木糖醇培养基高,说明变异链球菌在含8%、12%、16%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基低.结论 对比木糖醇,低浓度下赤藓糖醇对变异链球菌生长和产酸的抑制作用较弱,高浓度下赤藓糖醇的抑菌效果更强.
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变异链球菌SMU.2055蛋白晶体结构及其小分子抑制剂设计与筛选
目的：研究变异链球菌UA159中SMU.2055蛋白的三维晶体结构，并基于其结构进行小分子抑制剂的设计与筛选。方法运用结构基因组学研究方法，通过基因克隆和表达、蛋白质纯化、晶体筛选、晶体衍射数据收集，解析SMU.2055蛋白三维晶体结构，并运用计算机辅助药物设计方法，利用Libdock、Autodock两种程序，通过虚拟筛选和精确对接方式，建立与SMU.2055结构相匹配的小分子抑制剂虚拟模型。结果获得SMU.2055蛋白结晶，解析SMU.2055蛋白三维晶体结构，晶体衍射率为0.23?nm，属于C2221空间群，晶胞参数为a=9.20 nm，b=9.46 nm，c=19.39?nm，溶剂体积分数为56.7%。设计并筛选出与SMU.2055蛋白结构匹配度高的5个小分子化合物。结论变异链球菌SMU.2055蛋白质晶体学研究有助于从分子水平上深入了解变异链球菌蛋白质的结构和功能，筛选出的5个小分子化合物可能成为SMU.2055的有效小分子抑制剂，所建立的小分子抑制剂虚拟模型为基于蛋白质结构的防龋研究奠定基础。
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十肽对变异链球菌作用的差异蛋白质组学研究
目的：??利用差异蛋白质组学技术检测十肽对变异链球菌蛋白的作用反应，初步鉴定并验证变异链球菌致龋过程中的部分重要蛋白质。方法??人工合成十肽（氨基酸序列：KKVVFKVKFK-NH2），利用双向电泳技术分离十肽作用前后变异链球菌的总蛋白，采用质谱分析联合生物信息学技术鉴定十肽作用前后发生差异性改变的变异链球菌蛋白质，并在蛋白质水平验证关键差异蛋白质烯醇酶的表达情况。结果??十肽作用前后变异链球菌蛋白质发生明显变化，其中发生差异性改变的蛋白质功能主要包括降解碳水化合物（经糖酵解途径），蛋白质折叠、结合、运输及蛋白质翻译等。Western?blot验证结果显示，十肽处理后烯醇酶的表达量明显降低。结论??人工合成抗菌肽十肽处理前后变异链球菌的蛋白质表达发生明显变化，推测其可能通过改变烯醇酶等标志性蛋白的表达而达到防龋作用。
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含碘的乳过氧化物酶-过氧化氢-硫氰化物系统对变异链球菌致龋性的影响
目的：研究含不同浓度碘（I-）的乳过氧化物酶-过氧化氢-硫氰化物系统（LPO-H2O2-SCN-）对变异链球菌生长、黏附、产水不溶性细胞外多糖以及葡萄糖基转移酶（GTF）活性的影响。方法选用S. mutans ATCC 25175为实验菌株。采用菌落形成单位（CFU）计数法进行生长实验；用分光光度计法测定细菌的黏附抑制率；用蒽酮法测定水不溶性细胞外多糖的质量浓度；用蒽酮法测定还原糖量，计算GTF活性。结果随着I-浓度的增高，含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans致龋力的抑制作用增强。当I-≥100μmol·L-1时，对S. mutans的生长抑制明显高于对照组（P<0.05）；且当I-≥1000μmol·L-1时，对S. mutans的生长抑制显著高于以硫氰酸盐（SCN-）为单底物的实验组（P<0.05）；当I-≥100μmol·L-1时，对S. mutans的黏附抑制率达到50%以上，水不溶性细胞外多糖生成量明显减少（P<0.05），GTF活性也明显降低（P<0.05）。结论通过增加I-的浓度，可以抵消生理浓度的SCN-的抑制作用，使含I-的LPO-H2O2-SCN-系统能显著抑制变异链球菌的生长、黏附、水不溶性细胞外多糖生成和GTF活性。
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老年人桩核冠修复前后龈沟内致龋菌变化的比较研究
目的：研究老年人桩核冠修复前后不同时期根面菌斑中主要致龋菌定植数量变化。方法以单纯随机法选择下颌第一磨牙无咬合功能的患者30人，将一侧需行桩核冠修复的第一磨牙和对侧健康第一磨牙分为受试牙和对照牙。受试牙预备前、预备后72 h、预备后1周及冠修复后1个月，分别采集受试牙与对照牙根面菌斑，然后进行厌氧培养、分离，通过菌落形态学检查、生化特征及聚合酶链反应（PCR）对其中变异链球菌、内氏放线菌和黏性放线菌进行鉴定和菌落计数。结果受试牙变异链球菌预备前、预备后72 h、预备后1周、修复后1个月菌落计数的变化差异有统计学意义（P<0.05）。受试牙黏性放线菌菌落计数在预备前、预备后72 h、预备后1周、修复后1个月的变化差异有统计学意义（P<0.05）。受试牙内氏放线菌菌落计数在预备前、预备后72 h及1周、修复后1月的变化差异有统计学意义（P<0.05）。结论变异链球菌、内氏放线菌及黏性放线菌在预备后1周菌落计数增加，修复后1个月菌落计数降低。以上结果提示在牙体预备后初期，应指导患者进行菌斑控制。
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不同龋敏感儿童菌斑中变异链球菌数量及菌群比例的定量分析
目的：比较不同龋敏感儿童口腔菌斑中变异链球菌数量及其在菌群中比例的差异。方法采集26名3~4岁不同龋敏感的儿童牙面菌斑，运用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测有龋组和无龋组儿童菌斑中变异链球菌和总菌数量，以及变异链球菌在总菌群中所占的比例，并对结果进行分析比较。结果有龋组和无龋组儿童每毫克菌斑中变异链球菌菌落数分别为1.33×105、1.16×103 CFU·mg-1，二者间差异有统计学意义（P=0.033）；每毫克干重菌斑中总菌落数分别为7.17×107、1.01×108 CFU·mg-1，二者间差异无统计学意义（P=0.418）；有龋组和无龋组变异链球菌在总菌中所占比例分别为0.058 6和0.018 6，二者间差异有统计学意义（P=0.008）。结论无龋与患龋儿童牙面总菌群数量差异无显著性，但患龋儿童牙面菌斑中变异链球菌数量更多，在总菌群中所占比例更大。提示菌斑中变异链球菌与总菌的比例与儿童患龋风险密切相关，可以作为评估龋易感性和预测龋病发展趋势的新指标。
关键词： 龋齿 乳牙 牙菌斑 变异链球菌 实时荧光定量聚合酶链反应 -
不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定
目的 分离鉴定变异链球菌临床分离株.方法 收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养,通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应(PCR)扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ(spaP)、葡糖基转移酶B(gtfB)和葡聚糖酶(dexA)以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定.结果 从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株,经生物化学,自动微生物分析系统,变异链球菌的特异性基因spaP、gtfB和dexA的PCR扩增均鉴定为变异链球菌,基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同.结论 获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株.
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口腔链球菌对白假丝酵母菌的拮抗作用
目的 观测3种口腔链球菌对白假丝酵母菌的生长有无抑制作用.方法 采用直接点种法、反点种菌落计数法和液体共培养法观测口腔变异链球菌、血链球菌、唾液链球菌对白假丝酵母菌的拮抗作用.结果 1)直接点种法中各组均未观察到清晰的抑菌圈;2)唾液链球菌软琼脂上的白假丝酵母菌菌落数较对照组减少(P<0.05);3)活菌与白假丝酵母菌液体共培养中,在各个时间点上变异链球菌组与对照组之间菌落计数差异均有统计学意义(P=0.001);4)细菌培养基上清液与白假丝酵母菌液体共培养中,在24、48、72h时间点上,各实验组与对照组之间菌落计数差异均有统计学意义(P=0.001);多数时间点上,各实验组间菌落计数差异无统计学意义(P>0.05).结论 3种口腔链球菌对白假丝酵母菌的体外生长有明显抑制作用,但尚不能确定哪种链球菌的抑制作用更强,并且抑制作用会逐渐衰减.
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噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究
目的 探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件.方法 本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照.实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件,获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数,对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数,并与CFU法所测的细菌数量相比较.结果 MTT法在测量变异链球菌时,佳的检测波长为510 nm,佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107 CFU·mL-1.MTT法在测量血链球菌时,佳的检测波长为545 nm,佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×1 07CFU·mL-1.MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时,佳的检测波长为557 nm,佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107 CFU·mL-1.MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的,并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用.结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量,并且具有快速、方便等优点.
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口腔龋坏组织中变异链球菌与乳酸杆菌的作用研究
目的 分析人龋坏组织中变异链球菌与乳酸杆菌在不同分组中的培养计数及不同细菌主导的病例数,研究变异链球菌和乳酸杆菌在致龋过程中的协同作用.方法 选取甘肃省靖煤公刮总医院口腔科110例龋病患者,按照不同龋坏程度、不同年龄、不同龋坏性质分组采集龋坏组织,在选择培养基上培养,计数菌落数量.统计2种细菌在不同分组中的检出率、细菌计数半均数及不同敛龋菌病例数,研究二者的致龋作用.结果 变异链球菌和乳酸杆菌的细菌计数平均数随着龋坏程度增加而增高(P<0.05),在老年组患者中变异链球菌和乳酸杆菌数鼍增高(P<0.05),在龋病活动期增高(P<0.05).随着龋坏程度的增加,变异链球菌和乳酸杆菌共同致龋病例数增高(P<0.05),在老年人龋坏中共同致龋病例数增高(P<0.05),变异链球菌和乳酸杆菌共同致龋作用与龋病的静止与活动无相关性.结论 变异链球菌和乳酸杆菌随着龋坏程度的增加,共同致龋作用增强;老年人龋齿中,二者的协同作用占主导作用;在龋病活动期与静止期中,变异链球菌和乳酸杆菌仪存在数量上的区别,二者的单独致龋能力均在活动期增强,但共同致龋作用与龋病的活动与静止无关联.
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甘草水煎剂对变异链球菌生长和产酸影响的体外研究
目的 研究甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌的抗菌活性.方法 取粒径为0.2～3.2 mm的甘草颗粒加去离子水煎煮后过滤,滤液为实验用甘草水煎剂.采用液体稀释法测定甘草水煎剂对变异链球菌的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).在不同浓度甘草水煎剂中培养变异链球菌,分别于培养0、3、7、12,23、40 h时测定细菌悬液光密度值和培养液pH值,绘制变异链球菌的生长曲线和产酸曲线.结果 甘草水煎剂对变异链球菌的MIC为50 mg·mL-1,浓度小于等于100 mg·mL-1的甘草水煎剂对变异链球菌无杀菌作用.甘草水煎剂对变异链球菌生长的抑制作用随浓度的增加而增强.甘草水煎剂对变异链球菌的产酸有一定的抑制作用,在培养12 h时抑制作用强.结论 甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌生长和产酸均有抑制作用.
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不同形貌氧化锌对复合树脂抗变异链球菌活性的影响
目的 研究3种不同形貌氧化锌(ZnO)对复合树脂抗蔺性能的影响.方法 液体稀释法测试纳米级ZnO粉、四针状氧化锌晶须(T-ZnOw)和微米级ZnO粉对变异链球菌的小抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC).然后按5%的比例分别将3种ZnO添加于化学崮化型复合树脂粉剂中,用薄膜覆盖法测定老化处理前后树脂的抗菌率,并比较其差异.结果 纳米级ZnO粉、T-ZnOw和微米级ZnO粉的MIC分别为78.13、312.50、1 250.00 μ/mL;MBC分别为156.25、625.00、1 250.00μg/mL.添加了纳米级ZnO粉、T-ZnOw和微米级ZnO粉的复合树脂老化处理前的抗菌率分别为(93.58±5.95)%、(89.42±4.1 1)%、(78.97±3.90)%;老化处理后的抗菌率分别为(89.01±7.91)%、(84.63±4.72)%、(72.27±3.89)%.结论 添加3种不同形貌的ZnO均能增强复合树脂的抗菌活性,其中纳米级ZnO的抗菌性强,微米级ZnO弱,而T-ZnOw在比表面积较小的情况下仍表现出较强的抗茼作用.
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变异链球菌蛋白质提取方法研究
目的 建立稳定、有效的提取变异链球菌蛋白质方法 .方法 以裂解液为提取介质,分别采用反复冻融超声、超声、热裂解和热裂解超声4种方法 提取细茼蛋白质,通过分析细菌破碎程度、蛋白质SDS-PAGE电泳及蛋白质质量浓度,比较各提取方法 的效果.结果 除热裂解法外,其他3种方法 均可有效裂解细菌,其中超声起主要作用,同时这3种方法 提取蛋白质的SDS-PAGE条带分布基本相同,但反复冻融超声法提取蛋白质条带丰度高.蛋白质质量浓度测定显示,反复冻融超声法提取蛋白质质量浓度高.4种方法 均具有较好的稳定性和重复性.结论 反复冻融超声法可以有效提取变异链球菌蛋白质,有较好的稳定性和重复性,且操作简单.
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变异链球菌gtfs在不同pH条件下表达的差异性
目的 检测具有不同产胞外多糖(EPS)能力的变异链球菌菌株在不同pH条件下产EPS的能力及其与gtfA、gtfB、gtfC、stfD表达变化的关系.方法 选取变异链球菌(血清型c)临床分离株502(高产糖株)和参考株UA159(低产糖株),以实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测在不同pH条件下与变异链球菌产糖能力密切相关的毒力因子gtfA、gtfB、gtfC、gtfD的表达变化.结果 在pH5.5条件下,高产糖株和低产糖株gtfA、gtfB、gtfD的表达均有不同程度的升高,而gtfC略降低,高产糖株gtfB、gtfC的表达水平高于低产糖株.结论 gtfs的表达水平与变异链球菌的致龋力密切相关.
关键词： 变异链球菌 葡萄糖基转移酶 实时定量逆转录聚合酶链反应 -
龋病微生物因素研究进展
龋病是发病率高的口腔慢性感染性疾病,以变异链球菌为代表的一系列细菌曾被认为是龋病的单一致病菌.然而,近几十年来,基于传统致病菌的防治手段未能有效降低龋病的发病率,人们逐渐认识到单一致病菌理论并不能全面反映疾病与微生物的关系.龋病病因学的微生物研究逐步从传统致病菌理论过渡至微生态失衡理论.目前,随着检测手段的不断发展,大量龋病微生物群落研究陆续开展,龋病“核心微生物组”的概念得以提出,即在龋病发生发展中起到关键作用的一组微生物,这将是未来龋病微生物因素研究的方向.
