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Rho相关蛋白激酶及其抑制剂的研究进展
Rho相关蛋白激酶(Rho-associated protein kinase，ROCK)1、2属于丝氨酸-苏氨酸激酶AGC家族，对细胞多种生物学功能均有调节作用。抑制ROCK已经被证实可用于多种疾病的潜在治疗。笔者将简要介绍ROCK的结构和治疗的重要性，以及新关于ROCK抑制剂的研究进展。
关键词： Rho/ROCK通路 Rho相关蛋白激酶 ROCK抑制剂 法舒地尔 -
机械牵伸对体外大鼠肌腱干细胞RhoA/Rho相关蛋白激酶分子表达的影响
目的 探讨不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs) RhoA/Rho相关蛋白激酶(Rho associated protein kinases,ROCK)分子表达的影响. 方法 取2～3月龄雄性SD大鼠(体重200～250 g)跟腱组织,采用酶消化法分离培养TSCs.取第2～3代细胞接种于微沟槽培养皿中,分别以牵伸应变量4％、8％(4％牵伸组、8％牵伸组),牵伸频率1 Hz,牵伸时间4h/d进行机械牵伸,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况;牵伸1、2、3d后收集细胞,采用实时定量PCR、Western blot检测RhoA、ROCK基因及蛋白表达情况,应用细胞计数试剂盒8检测牵伸后细胞增殖情况.以未牵伸的TSCs作为对照组. 结果 第2代TSCs形态呈鹅卵石样,聚集生长;接种于微沟槽培养皿后呈杂乱生长;牵伸后细胞贴壁良好,无脱落,并沿受力方向排列.各时间点TSCs中RhoA、ROCK基因相对表达量随牵伸应变量的增加呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).牵伸1d时,4％、8％牵伸组与对照组相比RhoA、ROCK蛋白表达水平相似(P＞0.05);2、3d时,4％、8％牵伸组表达水平显著高于对照组,且随牵伸应变量增加呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各时间点,8％牵伸组细胞增殖显著低于4％牵伸组及对照组(P＜0.05);4％牵伸组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 大鼠TSCs中RhoA、ROCK分子表达水平随牵伸应变量的增加而增加,RhoA/ROCK分子可能是TSCs机械牵伸后的重要效应分子.
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溶血磷脂酸对牙髓细胞中β-连环蛋白核转位的影响及机制初探
目的 采用体外培养的牙髓细胞,探讨溶血磷脂酸(LPA)对牙髓细胞内β-连环蛋白释放、活化及核转位的影响.方法 采用LPA刺激牙髓细胞,Y-27632阻断剂抑制Rho相关蛋白激酶(ROCK),通过免疫荧光和Western blot检测Rho/ROCK信号通路对牙髓细胞β-连环蛋白释放、活化及核转位的影响.结果 LPA刺激牙髓细胞3 h,β-连环蛋白向核膜边缘集聚;刺激6、10 h,见部分牙髓细胞的β-连环蛋白转运至细胞核.用Y-27632预先阻断ROCK后,能够抑制LPA所引起的β-连环蛋白核内转位.Western blot检测结果显示,LPA促进β-连环蛋白表达及活化,Y-27632能够在一定程度上抑制LPA介导的β-连环蛋白的活化水平.结论 LPA能够通过Rho/ROCK通路影响牙髓细胞β-连环蛋白的释放、活化及核转位.
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模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能的变化可能与Rho激酶改变有关
目的:观察模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能的变化及Rho相关的蛋白激酶(Rho-associated protein kinase,ROCK)表达的改变,并探讨二者之间的关系.方法:以尾部悬吊4周建立模拟失重大鼠模型并观察模拟失重对胸主动脉的主要生理的影响.采用离体血管环功能实验检测大鼠胸主动脉的收缩反应性变化；通过蛋白印迹技术检测大鼠胸主动脉ROCKⅡ蛋白的表达.结果:与对照组相比,悬吊组氯化钾、苯肾上腺素诱导的大鼠胸主动脉收缩功能均明显增强(P＜0.05).用ROCK特异性抑制剂Y-27632孵育1h后,两组胸主动脉的收缩反应均显著降低至同一水平,两组间无统计学差异.蛋白印迹结果显示,悬吊组ROCKⅡ的表达增加.结论:ROCK表达的改变可能在模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能增强中发挥重要作用,去除ROCK的作用可消除模拟失重大鼠与正常大鼠胸主动脉收缩功能的差异.
