首页 > 文献资料
-
内源性ω-3多不饱和脂肪酸对AKT/Ras小鼠肝癌细胞抑制作用
目的:探讨ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因对细胞脂肪酸谱的影响,并对AKT/Ras癌基因激活小鼠肝癌细胞的抑制作用. 方法:通过构建pLenti-CMV-Fat-1过表达慢病毒载体,使小鼠AKT/Ras肝癌细胞转染Fat-1基因,以pLenti-CMV-GTP空载体病毒作为对照,观察Fat-1基因对小鼠AKT/Ras肝癌细胞增殖及克隆形成率的影响.Westernblot检测癌基因信号通路p-AKT和p-Erk的表达情况,并检测两组细胞脂肪酸谱的改变情况. 结果:Fat-1基因可明显增加细胞ω-3/ω-6脂肪酸的比率,并抑制AKT/Ras癌基因信号通路,抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成. 结论:Fat-1基因通过增加内源性ω-3多不饱和脂肪酸来抑制AKT/Ras肝癌细胞的增殖.
关键词： ω-3多不饱和脂肪酸 Fat-1基因 脂肪酸脱氢酶 肝癌 AKT/Ras信号通路 -
fat－1基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖抑制作用
目的：探讨fat－1基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞中表达及对子宫内膜癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导的方法将含有fat－1基因和荧光蛋白标记基因的真核表达载体pEGFP－fat－1质粒转染子宫内膜癌Ishikawa细胞，以荧光显微镜观察及RT－PCR方法检测fat－1基因的表达情况，CCK－8法分析fat－1基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响。结果 fat－1基因在人子宫内膜癌Ishikawa细胞内有效异源表达，fat－1基因抑制了人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖（与对照组比较P＜0．05）。结论 fat－1基因能够抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖。
-
Fat-1基因过表达抑制宫颈癌Hela细胞生长机制研究
目的:探讨fat-1基因对宫颈癌Hela细胞生长的影响,并研究PI3 K/Akt/mTOR通路是否参与fat-1对Hela细胞生长的调控作用.方法:构建真核表达载体(p-EG-FP-fat-1),并转染人宫颈癌Hela细胞,使其过表达fat-1基因,为fat-1组,以转染空载质粒的Hela细胞为阴性对照组,以未经任何处理的Hela细胞为空白对照组.采用气相色谱法检测fat-1基因对 ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)和 ω-6多不饱和脂肪酸(ω-6PUFA)含量的影响;采用MTT和Hoechst实验检测fat-1基因对细胞增殖和凋亡的影响;采用Tr-answell和细胞划痕实验检测fat-1基因对细胞侵袭和迁移的影响;采用Western blot检测fat-1基因对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况的影响.结果:Fat-1组细胞中fat-1基因表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).Fat-1组细胞中 ω-3PUFA含量高于空白对照组和阴性对照组,ω-6PUFA含量和 ω-6PUFA/ω-3PUFA比例均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于空白对照组和阴性对照组,Fat-1组细胞凋亡水平高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞中p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).结论:Fat-1基因可通过增加细胞内 ω-3PUFA含量,靶向作用于PI3K/Akt/mTOR通路,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡.
-
Fat-1基因对人子宫内膜癌Ishikawa细胞体内生长抑制作用
目的:探究腺病毒介导的Fat-1基因(Ad-GFP-Fat-1)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞体内抑制效应及其潜在的分子机制.方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞,接种于裸鼠右前肢腋部,建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型.将成瘤后裸鼠随机分成3组:Ad-GFP-Fat-1实验组、Ad-GFP空载体组、PBS对照组,分别对裸鼠进行皮下移植瘤注射治疗.观察并测量瘤体体积.RT-PCR检测Fat-1基因表达,TUNEL+DAPI染色法检测移植瘤组织凋亡,免疫组化SP法和Western blot检测瘤体内半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达情况.结果:Fat-1基因在Ad-GFP-Fat-1组移植瘤组织中有效异源表达.Ad-GFP-Fat-1组裸鼠移植瘤的体积和重量明显小于Ad-GFP组和PBS组(瘤体比较:P<0.05,瘤重比较:P<0.05).Ad-GFP-Fat-1组的凋亡指数明显高于Ad-GFP组和PBS组(P<0.05).Ad-GFP-Fat-1可明显上调Caspase-3表达.Ad-GFP-Fat-1主要通过增加活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)上调Caspase-3表达.结论:Ad-GFP-Fat-1表达对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤有抑制作用,其机制可能与Fat-1基因上调Cleaved Caspase-3表达诱导细胞凋亡有关.
-
子宫内膜癌组织Fat-1基因表达的变化及其对癌细胞生长的调控作用研究
目的:研究子宫内膜癌中Fat-1基因表达的变化及其对癌细胞生长的调控作用.方法:选择2016年8月 ～2017年8月期间在西京医院接受手术切除治疗的150例子宫内膜癌患者作为研究的恶性组,并收集子宫内膜癌组织,另取同期在西京医院接受子宫全切除术的80例良性病变患者作为研究的对照组,并收集正常子宫内膜组织,检测Fat-1基因 、抑癌基因 、增殖基因 、血管新生基因的mRNA表达量.结果:恶性组子宫内膜癌组织中Fat-1、PTEN、p16、BRCA1、Bid、Caspase-3的mRNA表达量均显著低于对照组,恶性组子宫内膜癌组织中SRPX2、TET1、CyclinD1、HMGB1、Livin、Septin9、β-arres-tin2、HIF-1α 、VEGF的mRNA表达量均显著高于对照组;Pearson分析显示:子宫内膜癌组织中Fat-1的mRNA表达量与PTEN、p16、BRCA1、Bid、Caspase-3的mRNA表达量呈正相关,与SRPX2、TET1、CyclinD1、HMGB1、Livin、Septin9、β-arrestin2、HIF-1α 、VEGF的mRNA表达量呈负相关.结论:子宫内膜癌中Fat-1基因的低表达对癌细胞的生长具有促进作用.
-
fat-1转基因小鼠的构建与鉴定
目的 构建和鉴定携带有外源fat-1基因的转基因小鼠.方法 将fat-1基因的cDNA与动物表达载体pEF-neo连接,构建pEF-fat-1重组质粒, 酶切、测序鉴定正确后,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、Southern blot杂交等方法确立阳性整合有目的 基因的G0代小鼠.结果 成功构建了pEF-fat-1重组质粒,将其显微注射到小鼠受精卵中,得到G0代小鼠,PCR、Southern blot杂交确立了4只整合有fat-1基因的首建鼠.结论 fat-1基因可整合到小鼠体内,得到的转基因小鼠为研究fat-1基因的生物学功能提供了动物模型.
