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基于人DAF框架的酵母展示肽库的构建与鉴定
以hDAF cDNA为模板,用随机引物分别通过大引物PCR和交叠PCR方法引入突变,酶切后克隆到酵母表面展示载体pYD1,构建DAF-pYD1重组质粒,转化酵母细胞,PCR鉴定随机性,流式细胞仪分析DAF的表达.结果表明,随机性达到理论要求,通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有DAF分子的表达.以上结果表明,成功构建了基于DAF框架的酵母表面展示肽库,为进一步筛选DAF的突变体库奠定了基础.
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人衰变加速因子与异种器官移植
目前全世界每年有数十万的患者因行器官移植手术而得以存活,然而移植技术的日趋成熟使得器官移植形成了供不应求的局面.供体器官的短缺使人们把目光投向了异种移植,而异种移植带来的第一个问题即是排斥反应特别是超急性排斥反应(hyperactue rejection,HAR).
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人衰变加速因子在酵母细胞表面的呈现
目的 为获得能在酵母表面正确折叠的人衰变加速因子。方法 通过PCR技术从DAF- pBluescript M13-(Amp+)质粒扩增出全长的DAF cDNA,酶切后克隆到酵母表面呈现载体pYD1,构建DAF-pYD1重组质粒,转化酵母细胞,流式细胞仪检测所呈现的DAF。结果 通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有DAF分子的表达,并且此表面呈现的DAF与针对DAF不同表位的3株单抗均能结合。结论 酵母表面呈现的DAF保持了天然DAF分子的构象,为进一步构建DAF的突变体库奠定了基础。