ISCOMS重组乙型肝炎疫苗的研究

目的提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫原性.方法采用透析法制备HBsAg免疫刺激复合物(immunostimulating complexes简称ISCOMS).用放免法(RIA)检测免疫小鼠的抗体滴度;氚标记胸腺嘧啶掺入法(3H-TdR)检测小鼠脾淋巴细胞转化率;CTLL-细胞株/XTT法检测IL-2活性.结果经电镜观察ISCOMS颗粒呈蜂窝状,直径为30～40nm左右.SDS-PAGE分析,制备的ISCOMS颗粒HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成.用Bradfords法测定ISCOMS蛋白回收率为41.50%.免疫NIH小鼠结果显示ISCOMS重组乙肝疫苗和铝佐剂疫苗的ED50分别为103.225 5和25.8064;ISCOMS组的相对效力是铝佐剂组的4倍.刺激指数(SI)分别为6.78±2.32和3.12±0.54.IL-2水平分别是10.2IU/ml±2.12IU/ml和4.95 IU/ml±0.86 IU/ml.结论ISCOMS重组乙型肝炎疫苗稳定性好,免疫原性强,抗体产生早,滴度高,并且能激起细胞免疫,有可能发展成为新一代疫苗.

HBsAg免疫刺激复合物的制备及鉴定

目的提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫原性.方法采用离心法和透析法制备HBsAg的免疫刺激复合物,并探讨其影响因素.结果初步确定HBsAg的ISCOMs的佳形成条件是:温度25℃,反应时间18 h,pH 6.8.电镜下观察ISCOMs呈直径为30～40 nm的蜂窝状结构.SDS-PAGE分析表明,离心法和透析法制备的颗粒HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成.用Bradfords法检测离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31.50%和41.15%,其稳定性和免疫原性均优于相应的铝佐剂疫苗.结论HBsAg免疫刺激复合物可提高乙型肝炎表面抗原的免疫原性.

免疫刺激复合物的粘膜佐剂特性

含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以不同佐剂在HBV转基因小鼠中的免疫原性

目的 研究以免疫刺激复合物(immune stimulating complex,ISCOM)或Al(OH)3为佐剂的含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗在HBV转基因小鼠中诱导的免疫应答.方法 将纯化的含PreS1、PreS2和S抗原的重组HBsAg(SS1S2)分别辅以ISCOM或Al(OH)3佐剂制成疫苗.HBV转基因小鼠每月肌内注射1针疫苗,共注射7针.免疫前及每针后1个月称量小鼠体重,观察小鼠生长情况.免疫前及每针后1个月采血,用ELISA检测HBV S、PreS1、PreS2抗原及其相应抗体.7针后1个月分离小鼠脾淋巴细胞,用酶联免疫斑点试验分别测定分泌IL-4、IL-5、IFN-γ的效应T细胞频数.结果 小鼠生长状况良好,每针后体重均有增长.首针后1个月,10只ISCOM+ SS1S2免疫鼠分别有3和1只抗S和PreS1抗体阳转,无一小鼠抗PreS2抗体阳转;10只Al(OH)3+ SS1S2免疫鼠的抗体均为阴性.7针后1个月,10只ISCOM+ SS1 S2免疫鼠的抗S和PreS1抗体均阳转,8只抗PreS2抗体阳转;10只Al(OH)3+ SS1S2免疫鼠分别有9、7和1只抗S、PreS1和PreS2抗体阳转;ISCOM+SS1S2组和Al(OH)3+ SS1S2组的抗S抗体几何平均滴度分别为1∶15 647和1∶1 039,差异有统计学意义0=5.18,P=0.000).7针后1个月,ISCOM+ SS1S2组和Al(OH)3+ SS1S2组分泌IL-4的细胞频数分别为219和78斑点形成细胞(spot-forming cell,SFC)/106细胞(t=10.50,P=0.000),分泌IL-5的细胞频数分别为286和34 SFC/106细胞(t=19.53,P=0.000),差异有统计学意义.结论 含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以ISCOM或Al(OH)3佐剂在HBV转基因小鼠中均具有免疫原性,且ISCOM+ SS1 S2的免疫原性强于Al(OH)3+ SS1S2.

人乳头瘤病毒16型E7C/CD80嵌合DNA疫苗质粒的构建

制备人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与免疫辅助因子融合的嵌合基因疫苗,以增强基因免疫的效应,是HPV疫苗研制的基本方向之一[1].由于HPVE7在大多数宫颈癌及其前体病变中持续表达而不在正常组织中表达,因而被首先选用作制备宫颈癌治疗性疫苗[2].但E7蛋白也是高危型HPV的主要转化蛋白.本实验将去除E7的转化活性而保留其免疫原性的E7C亚基因插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,并将其和共刺激分子CD80(B7-1)进行连接重组,构建HPV16 E7C/CD80嵌合DNA疫苗,使抗原蛋白和共刺激分子共同在一质粒表达,增强其作为宫颈癌治疗性疫苗的免疫效果.

免疫刺激复合物疫苗

免疫刺激复合物疫苗(ISC0M)与传统疫苗相比,不但疫苗抗原的需求量较少,而且能够增加抗体反应水平和持久性,还能产生强的细胞免疫反应,作为强的粘膜佐剂,在动物模型研究中发现同样适用于年老及新生动物.

新型PH-20疫苗不同注射方式对雌性豚鼠免疫应答和避孕效果的影响

目的 观察以等比方法配制的新型精子表面特异性透明质酸酶(PH-20)疫苗的不同注射方式对豚鼠免疫应答和避孕的影响.方法 60只雌性豚鼠随机分为两大组(直肠注射组和腹腔注射组),每组再分为3个小组(实验1组、实验2组和对照组,每小组各10只),用电镜观察该新型PH -20疫苗的形态,应用双夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测豚鼠阴道分泌物中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平、放射免疫分析法检测血液sIgA的水平、竞争ELISA技术检测血液PH-20特异性抗体的水平.结果 直肠注射组和腹腔注射组豚鼠血液和阴道分泌物中slgA、PH -20抗体含量均较对照组升高(P均＜0.05);实验1组(添加弗氏完全佐剂)豚鼠在各测量时间点血液和阴道分泌物中slgA、PH-20抗体含量均较实验2组(未添加弗氏完全佐剂)高(P均＜0.05).直肠注射组(50％)和腹腔注射组(76.7％)总阳性怀孕率相比有显著性差异(P＜0.05).结论 该新型PH-20疫苗具有较高的免疫活性,能诱导机体产生明显的体液反应,且直肠注射诱导免疫优于腹腔注射.用弗氏完全佐剂均能增强两种注射方式的避孕效果.

HBsAg免疫刺激复合物型疫苗制备

目的 制备中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫刺激复合物型(ISCOMs)疫苗.方法 采用离心法和透析法制备了HBsAg的免疫刺激复合物.结果 电镜下观察ISCOMs直径为30～40 nm左右的蜂窝状结构.十二烷基磺酸钠电泳(SDS-PAGE)分析表明,离心法和透析法制备的颗粒的HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成.Bradfords法测定离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31.50%和41.15%.结论 HBsAg免疫刺激复合物型的成功制备为ISCOMs型乙型肝炎疫苗的研制打下了基础.

免疫刺激复合物型白血病瘤苗对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 观察免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病瘤苗对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 将40只SPF级C57BL/6小鼠随机分为4组,A组不进行任何处理,B、C、D组均进行荷瘤小鼠动物模型的建立,B组采用等体积的生理盐水进行治疗,C组采用灭活的FBL-3瘤苗治疗,D组采取灭活的FBL-3细胞+ISCOM瘤苗进行治疗,治疗4周后,观察小鼠一般状况、巨噬细胞(M(Ψ))杀伤活性和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 治疗后,C组M(Ψ)杀伤活性、B组M(Ψ)杀伤活性和CTL杀伤活性均显著低于A组(P＜0.01),C组M(Ψ)杀伤活性、D组M(Ψ)杀伤活性和CTL杀伤活性均显著高于A组(P＜0.01);C组和D组小鼠未见明显脱毛,进食较正常,瘤体小于B组;C组和D组M(Ψ)杀伤活性和CTL杀伤活性均显著高于B组(P＜0.01),D组具有高的M(Ψ)杀伤活性和CTL杀伤活性.结论 ISCOM型白血病瘤苗可通过增强荷瘤小鼠的M(Ψ)活性和CTL活性达到改善荷瘤小鼠的非特异性免疫和细胞免疫功能的作用.

新方法制备的PH-20疫苗的鉴定及其避孕效果观察

目的 观察以等比方法配制的PH-20偶联体疫苗以直肠方式注射后对豚鼠的免疫避孕效果.方法 45只雌性豚鼠随机分为3组,每组15只,实验1组注射新研发的PH-20疫苗,实验2组注射纯化的PH-20蛋白,而对照组注射等体积的生理盐水.用电镜观察该偶联体疫苗形态,Bradfords法测定免疫刺激复合物(ISCOM)中PH-20蛋白结合量,用竞争ELISA技术分别于注射后第2、4、6、8周检测血液中PH-20特异性抗体的水平.结果 ISCOMmat-PH-20偶联体疫苗呈典型的蜂窝状,颗粒直径28～32 nm,ISCOMmat-PH-20偶联体中PH-20的结合量约为0.057 9 mg/mL,实验1组血液中的PH-20特异性抗体水平在第2、4、6、8周与实验2组、对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).实验1组PH-20特异性抗体含量在第2、4、6周逐渐升高(P<0.05),而PH-20特异性抗体含量第8周与第6周相比,差异无统计学意义(P＞0.05).实验2组在第2、4、6周时,PH-20特异性抗体水平与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),但组内第2、4、6周之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),而PH-20特异性抗体含量从第6周开始下降,第6周与第8周相比差异有统计学意义(P<0.05),第8周与对照组相比无明显变化(P＞0.05).直肠注射8周后,实验1组与实验2组的雌性豚鼠的受孕率差异有统计学意义(2=52.84,P<0.05).结论 该偶联体疫苗具有较高的免疫活性,能诱导机体产生明显的体液反应,且持续时间较长,获得的避孕效率明显升高.

乙肝治疗性多肽免疫刺激复合物的制备及鉴定

目的为有效提高小分子多肽在体诱导CTL应答的能力,制备了乙肝治疗性多肽免疫刺激复合物(ISCOMs),并对其形成进行了鉴定.方法乙肝治疗性多肽ISCOMs采用透析法制备获得,并经小分子多肽的SDS-PAGE电泳法确定了复合物中小分子多肽的存在,采用Bradfords法测定了复合物中多肽的结合量.结果在电镜下呈典型的蜂巢状亚微型颗粒结构,所制备的ISCOMs中多肽的结合量约为0.30 mg/ml.结论ISCOMs的成功制备,为进一步研究小分子多肽免疫刺激复合物的免疫学特性奠定了基础.