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TritonX-114残留量检测方法的建立及验证
目的 建立测定生物制品中TritonX-114残留量的方法,并进行验证及初步应用.方法 先对TritonX-114进行光谱扫描,用所得到的特异吸收峰来初步检测TritonX-114的残留量,再根据TritonX-114与苯酚发生反应并产生具有一定浊度的复合物,且浊度与TritonX-114的浓度成正比的原理,通过测定340 nm处吸光度值,建立测定TritonX-114残留量的方法,并对方法进行稳定性、准确性、精密性验证.考察核酸和蛋白对TritonX-114含量测定的影响,并分别采用紫外吸光法和建立的方法检测样品中的TritonX-114含量.结果 TritonX-114在280 nm左右有特异吸收峰,可通过测定280 nm处的吸光度值来初步测定TritonX-114的残留量;利用TritonX-114与苯酚发生反应后产物的A340值来测定TritonX-114含量的方法的线性范围为0.001％～0.007％,检测下限为0.001％;建立标准曲线后,每间隔5 min测定1次A340值,各浓度标准品A340值的变异系数(CV)均小于5％;低(0.001％)、中(0.003％)、高(0.006％)浓度TritonX-114溶液连续测定3次,每个浓度平行测定9组的CV值均＜5％,回收率均＞100％;核酸和蛋白对该方法测定TritonX-114的含量无影响;4份样品经两种方法检测的试验内CV值均＜10％.结论 可采用280 nm紫外吸收法初步测定TritonX-114的含量,但该法灵敏度低,易受干扰;而采用TritonX-114与苯酚反应后检测其产物浊度的方法来测定TritonX-114的残留量,稳定性、精密性良好,准确性高,可用于生物制品中TritonX-114残留量的检测.
关键词： Triton X-114 残留量 生物制品 -
基于Triton X-114浊点萃取法在生物分子分离中的应用
液-液萃取等传统方法无法满足不断提高的生物分子分离要求,浊点萃取(cloud point extraction,CPE)以其良好的分离效果被广泛应用.本文基于Triton X-114 CPE法在生物分子分离中的应用进行了概述,主要涉及CPE原理、过程、应用及技术改进.
关键词： 浊点萃取 Triton X-114 分离 -
Triton X-114萃取法去除脑膜炎球菌荚膜多糖中的内毒素
目的 采用Triton X-114萃取法去除A群脑膜炎球菌荚膜多糖中的内毒素.方法 1% Triton X-114与多糖溶液在0℃混合均匀,分别加热至25、37和56℃,观察分层情况.离心后收集上层水相,对其中残余萃取剂Triton X-114进行去除方法的选择.比较多糖浓度对萃取的影响及二次萃取的效果,并对终产物进行全面检定.对W135群和Y群脑膜炎球菌多糖进行萃取效果比较.结果 终选择56℃10min作为升温条件,3000r/min离心10min后,上清中多糖的内毒率含量均减少85%以上,多糖回收率不低于80%.残余的Triton X-114选择透析法去除.多糖浓度越低,越易于萃取.二次萃取多糖回收率大于85%.内毒素含量可降低至O.706EU/μg多糖.经检测,终产物多糖的相对分子质量未发生改变,免疫原性与萃取前差异无显著意义,异常毒性、多糖及内毒素含量合格.蛋白含量稍有增加,核酸含量降低.W135群和Y群脑膜炎球菌多糖的萃取结果与A群多糖相似.结论 Triton X-114萃取法可以用于去除脑膜炎球菌多糖中的内毒素.
关键词： 脑膜炎球菌 荚膜多糖 内毒素 萃取 Triton X-114 -
Triton X-114萃取法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的应用
采用Triton X-114替代高腐蚀性的苯酚,以探索b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzaetype b,Hib)荚膜多糖的纯化新方法.将Hib粗制荚膜多糖溶于不同浓度的Triton X-114溶液中,加入(NH4)2SO4,搅拌后,离心分层后,取下层溶液.重复多次,后用100 kD膜进行超滤.结果,加入Triton X-114的质量分数为15％,(NH4)2S04的质量分数为30％,抽提次数为3次时,对蛋白杂质的去除效果较好.采用Triton X-114萃取法连续纯化3批Hib荚膜精制多糖,其各项检测指标均符合《中国药典》2015版(三部)规定.研究表明Triton X-114萃取法可应用于Hib粗制荚膜多糖的纯化,且纯化效果良好.
关键词： B型流感嗜血杆菌 荚膜多糖 Triton X-114 纯化 -
萃取法去除琥珀酰明胶中内毒素研究
采用萃取法去除琥珀酰明胶中内毒素.通过调整温度条件,以Triton X-114为萃取剂对琥珀酰明胶中内毒素进行萃取,对萃取前后供试品内毒素含量、琥珀酰明胶含量以及分子质量进行测定,考察工艺过程对上述指标的影响.萃取法可显著降低琥珀酰明胶中内毒素含量,通过2次萃取后,琥珀酰明胶中内毒素含量可由2500 ～5 000 EU/mL降至0.25～2.5 EU/mL,且经过萃取前后的琥珀酰明胶含量及分子质量无明显变化.萃取法可有效去除琥珀酰明胶中内毒素含量,并可能开发为一种工业化去除琥珀酰明胶注射液中内毒素的方法.
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浊点萃取联合高效液相色谱法测定血浆中的橙皮素
目的:建立浊点萃取联合高效液相色谱法测定血浆中橙皮素的方法.方法:利用非离子型表面活性剂Triton X-114胶束水溶液萃取富集橙皮素,以甲醇-0.1％磷酸水溶液(80∶20)为流动相进行洗脱,Kromasil C18为色谱柱,柱温25℃,检测波长283 nm.结果:Triton X-114浓度5％、对照品溶液加入量10μL,调pH 5,萃取温度50℃,萃取3次,每次30 min,超声5min,所得萃取率高,为86.6％;橙皮素在0.34～10.80 μg·mL-1内进样量与峰面积线性关系良好,Y=94.715X+4.3285(r=0.999 4).结论:浊点萃取和液相色谱联用来测定血浆橙皮素,不使用有机试剂,绿色环保,简便.
关键词： 浊点萃取 Triton X-114 高效液相色谱 橙皮素
