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马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab')2的制备
目的 采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab')2.方法 以经MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab')2.间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率.结果 所制备的特异性IgG与特异性F(ab')2的纯度分别为90.1％和92.8％,收率分别为8.7％和3.07％;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab')2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总IgG或总F(ab')2.结论 成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab')2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab')2制备工艺奠定了基础.
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胃酶消化马血浆工艺参数的优化
目的 应用DOE试验优化破伤风抗毒素(tetanus antitoxin,TAT)生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数.方法 以破伤风类毒素免疫后的马血浆为原料,通过AKTA avant25中UNICORN 6.0软件设计4因子2水平全因子DOE试验模型,并以抗体F(ab')2含量为评价指标,对影响胃酶消化的主要因子即胃酶加量、消化反应pH值、反应温度和反应时间进行优化.结果 胃酶消化马血浆的适工艺参数为:胃酶加量为13 ～ 15 U/ml,消化反应pH值为3.0～3.1,反应温度为35～37℃,反应时间为90 ～ 120 min,在该条件下进行6次稳定性试验,制备的TAT抗体F(ab')2含量平均值达83.1％,标准偏差为2.47％.结论 DOE试验优化了TAT生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数,建立了有效的消化工艺,为降低过敏反应,提高TAT制品的质量提供了实验依据.
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抗竹叶青蛇毒抗体F(ab')2的制备
目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab')2.方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab')2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab')2片段的特异性,以小鼠中和试验测定其中和竹叶青蛇毒的能力.结果:纯化得到的F(ab')2活性片段纯度可达90%;F(ab')2冻干品与竹叶青蛇毒在8∶1时出现免疫沉淀线,在20∶1时可保护小鼠100%存活.结论:纯化得到的抗体F(ab')2活性片段对竹叶青蛇毒具有较好的中和能力.
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鉴定单克隆抗体F(ab')2段及其结合物抗体活性方法的建立
鉴定单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的抗体活性通常采用免疫组化法或免疫印迹法[1].因为失去了Fc段,mAb的F(ab')2片段的抗体活性不适合用常规免疫组化法或免疫印迹法进行鉴定.尤其是当鉴定mAb F(ab'),段与其他蛋白质结合物的抗体活性时更为困难.我们用SPDP化学胶联法制备了抗人原发性肝细胞癌(以下简称肝癌)的mAb HAb18的F(ab')2段与超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)的结合物HAb18 F(ab')2-SEA,以用于肝癌导向免疫治疗的研究[2].为了鉴定HAb18 F(ab')2-SEA的抗肝癌抗体活性,本实验建立了用于鉴定mAb F(ab')2及其结合物抗体活性的专用间接免疫组化法.
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疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20 F(ab')2之比较
目的比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI47抗CD20 F(ab')2的优缺点.方法采用亲和层析柱protein-G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD20 F(ab')2的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80%B液洗脱20min,100%B液洗脱30 min;凝胶过滤以50mmol/L PB缓冲液(pH 7.0),0.8 mL/min洗脱4 h.结果粗纯化产物主要含F(ab')2、Fab',含量分别为19.6%、59.7%.采用疏水层析法1 h即可完成分离,F(ab')2回收率为67%,纯度为89.3%;凝胶过滤4 h完成分离,F(ab')2回收率为65%,纯度为90.5%.FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%.结论疏水层析分离纯化抗CD20 F(ab')2简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产.
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天然抗角蛋白自身抗体IgG F(ab')2对培养角质形成细胞增殖的影响
1 材料和方法1.1 材料 HD-97-1核酸蛋白检测仪;Wellscan MK2酶联检测仪;GL20A低温离心机;DYY-Ⅲ-7型转移电泳仪;Bio-Rad微型转移电泳槽;DU532紫外分正常人混合血清,正常年青人包皮,角朊细胞无血清培养基.
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破伤风抗毒素渗透压的质量控制标准
目的：通过对不同厂家破伤风抗毒素产品的渗透压浓度的调查，了解国内该产品的渗透压浓度的波动范围，为生产过程中渗透压浓度质量控制提供依据。方法采用Advanced 3250型冰点渗透压仪检测破伤风抗毒素的渗透压浓度。结果不同厂家破伤风抗毒素制品的渗透压浓度均不低于240 mOsmol/L。结论破伤风抗毒素渗透压浓度波动范围均与国外同类制品基本一致，符合欧洲药典规定。
