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Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响
目的:探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用.方法:MCF-7/ADM 细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率.转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素(0、0.1、0.5和1.0 mg·L-1),0 mg·L-1 阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性.结果:与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01).与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低(P<0.01),阿霉素浓度为1.0 mg·L-1时,2组细胞存活率分别为(48.15±6.28)%和(41.73±6.17)%,对阿霉素的敏感性明显增强.结论:Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性.
关键词： 乳腺肿瘤 Hiwi基因 靶向沉默 MCF-7/ADM细胞 敏感性 -
Survivin和RhoA双基因沉默对卵巢癌细胞的增殖与侵袭影响
目的:探讨RNA干扰(RNAi)双向沉默Survivin和RhoA基因表达对人卵巢癌HO8910PM细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:构建Survivin和RhoA基因的串联rnicroRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA),通过脂质体介导转染人卵巢癌HO8910PM细胞作为实验组,对照组为空载体转染组.转染48小时后,RT-PCR检测Survivin和RhoA的mRNA表达,Western-Blot检测Survivin和RhoA的蛋白质表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞术检测转染后卵巢癌细胞的增殖、侵袭及凋亡情况.结果:Survivin-RhoA-microRNA明显抑制了HO8910PM细胞中Survivin和RhoA基因mRNA和蛋白的表达:转染48小时后,实验组Survivin mRNA和RhoA mRNA表达抑制率分别为68.82％、90.23％,Survivin和RhoA蛋白表达抑制率分别为63.91％、88.47％;MTT分析显示实验组细胞OD490的值为0.706±0.177,较对照组(1.172±0.241)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞术检测实验组细胞凋亡率为36.41±3.34％,较对照组(2.92± 0.78％)明显升高(P＜0.01);实验组细胞侵袭百分比为12.56±6.17％,较对照组(32.96± 5.14％)明显降低(P＜0.05).结论:成功构建Survivin和RhoA串联microRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA).Survivin和RhoA双基因沉默显著抑制了卵巢癌HO8910PM细胞的增殖和侵袭能力,并增加其凋亡率,两者具有协同作用,为双靶点治疗卵巢癌提供了新的思路和策略.
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双靶点沉默Survivin和RhoA对肺腺癌A549细胞的作用
目的 双靶点靶向沉默肺腺癌A549细胞Survivin和RhoA基因表达,研究其治疗作用.方法 构建共表达靶向Survivin和RhoA基因的串联microRNA干扰载体,脂质体介导该干扰载体转染A549细胞作为实验组,空白干扰载体作为对照组.于转染48 h后,RT-PCR检测Survivin、RhoA mRNA表达,Western blot检测Survivin、RhoA蛋白质表达,MTT法检测细胞的增殖并计算抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 实验组Survivin mRNA表达抑制率为62.7%,RhoA mRNA表达抑制率为69.0%;实验组Survivin蛋白表达抑制率为66.7%,RhoA蛋白表达抑制率为71.9%.与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率为(47.63±6.34)%.实验组细胞凋亡率为(36.32±6.42)%,明显高于对照组[(0.62±0.2)%](P<0.05).结论 成功构建Survivin-RhoA串联microRNA干扰载体,表达的人工双靶点microRNA能通过促进细胞凋亡来抑制A549细胞增长.
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Huwe1-shRNA靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达
目的 探讨Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,是否可以靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1基因.方法 将体外培养的L2.3神经干细胞分成3组:huwe1-shRNA未转染组(control组)、阴性序列转染组(control shRNA组)、huwe1-shRNA转染组(Huwe1 shRNA组).Control组:仅常规体外培养L2.3神经干细胞.不将阴性序列和Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞.Control shRNA组:阴性序列通过慢病毒转染体外培养的L2.3神经干细胞.Huwe1 shRNA组:Huwe1-shRNA通过慢病毒载体成功感染体外培养L2.3神经干细胞.分别收集三组体外培养的L2.3神经干细胞,应用western blot方法分别检测三组L2.3神经干细胞Huwe1蛋白的表达.结果 与control组、control shRNA组比,Huwe1shRNA组体外培养的L2.3神经干细胞huwe1蛋白表达条带显著减弱、变细(P＜0.05).与control组Huwe1蛋白的相对表达量比,Huwe1shRNA组Huwe1蛋白的相对表达量是control组的25％(P＜0.05).与control组比,control shRNA组和Huwe1shRNA组在慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,L2.3神经干细胞存活率无明显下降(P＞0.05) 结论 Huwe1 shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,可以靶向沉默L2.3神经干细胞Huwe1基因,却不影响L2.3神经干细胞的存活率.
