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槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用
目的:研究类黄酮化合物槲皮素(quercetin,QUE)对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用.方法:按QUE浓度分成10、25、50、75及100μmol·L-15个处理组和空白对照组(生理盐水)及溶剂对照组(二甲亚砜),大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×106·mL-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)对50及100μmol·L-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L-1的QUE作用48 h的p53和bcl-2基因产物.结果:与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P＜0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G0/G1期的细胞增加(P＜0.01),而S和G2/M期细胞减少(P＜0.05).P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少.结论:QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现.
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鳢肠水溶性部位的化学和药理研究
目的研究鳢肠属植物鳢肠水溶性部位的化学成分及其药理活性.方法通过溶剂提取法和色谱技术分离化学成分,运用光谱手段进行结构鉴定,利用C6细胞和PC12细胞观察鳢肠水溶性成分对细胞增殖活性的抑制作用.结果从该部位分离得到3个三萜皂苷,分别为3-O-β-D-吡喃葡糖刺囊酸(Ⅰ)、3-O-β-D-吡喃葡糖刺囊酸-28-O-β-D-吡喃葡糖苷(Ⅱ)和3-O-(2-O-硫酰基-β-D-吡喃葡糖)刺囊酸(Ⅲ),还分离得到了豆甾醇(Ⅳ)和蟛蜞菊内酯(Ⅴ);化合物Ⅰ具有抑制C6细胞和PC12细胞增殖的活性.结论化合物Ⅰ是鳢肠水溶性部位抑制细胞增殖的活性成分.
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大蒜素对脑胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的实验研究
[目的]探讨大蒜素对体外培养的脑胶质瘤C6细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。[方法]培养脑胶质瘤C6细胞至对数生长期，不同浓度大蒜素作用下，于倒置显微镜及Hoechst33258荧光染色显微镜下观察C6细胞形态学变化；四甲基偶氮噻唑蓝法（tetrazolium salt colorimetry, MTT）检测不同浓度大蒜素对C6细胞增殖的影响并计算抑制率；钙依赖性磷脂结合蛋白-荧光素/碘化丙啶双染法（Annexin V-fluorescein/propidium iodide，AnnexinV-FITC/PI）检测凋亡率；流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测细胞周期；蛋白质印迹法（western blotting，WB）检测Bax、Bcl-2基因的表达。[结果]大蒜素作用C6细胞24h后，于倒置显微镜观察可见C6细胞生长明显抑制,部分细胞皱缩变形，出现成泡现象；Hoechst33258荧光染色显微镜下观察发现凋亡的细胞，细胞的体积变大，核固缩、凝集，核染色质边集，出现浓染致密的颗粒块荧光信号，并随着大蒜素浓度增加表现越加明显。不同浓度(5、10、20、40、80μg·mL-1）大蒜素作用C6细胞（24h、48h、72h）后，细胞增殖受到抑制，与0μg·mL-1大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01)；同一浓度大蒜素作用C6细胞48h、72h后，与24h比,差异有统计学意义（P<0.01）。随着大蒜素浓度的增加，C6细胞凋亡率上升，与0μg·mL-1大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01)；其中80μg·mL-1大蒜素显著抑制C6细胞增殖、诱导其凋亡，与各浓度大蒜素比，差异有统计学意义（P<0.01）。20μg·mL-1大蒜素作用C6细胞24h后，与0μg·mL-1大蒜素比G0/G1期细胞比例增加，S、G2/M期细胞比例降低，差异有统计学意义（P<0.05)。随着大蒜素浓度的增加Bax表达水平上升、Bcl-2表达水平下降，Bcl-2/Bax比值逐渐上升，与0μg·mL-1大蒜素比较差异有统计学意义（P<0.01)；其中80μg·mL-1大蒜素与5、20μg·mL-1大蒜素比，差异有统计学意义（P<0.01）。[结论]大蒜素能体外抑制C6细胞的增殖，并诱导其凋亡，其中80μg·mL-1大蒜素作用强，分子机制涉及调控Bax、Bcl-2基因的表达。
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苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响
目的 探讨缺氧条件下苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响.方法 胶质瘤C6细胞培养至对数生长期,分别加入0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 g/L苦参碱溶液,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;对数生长期胶质瘤C6细胞随机分为CoCl2正常组、常氧正常组、CoCl2苦参碱组、常氧苦参碱组,其中CoCl2正常组和CoCl2苦参碱组采用CoCl2培养液培养,常氧正常组和常氧苦参碱组采用正常DMEM培养液培养,采用倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,采用Western blot方法检测各组细胞血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、金属蛋白酶组织抑制因子-3(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-3,TIMP-3)表达情况.结果 CoCl2处理后苦参碱对胶质瘤C6细胞有明显抑制作用,且随苦参碱浓度增加细胞抑制率明显升高(24 h:R2 =0.9897,IC50=1.468 g/L);常氧正常组细胞狭长,梭形,贴壁生长;CoCl2正常组细胞呈三维空间分布;常氧苦参碱组细胞变小、变圆,出现碎裂;CoCl2苦参碱组细胞较轻程度变小、变圆,出现碎裂;CoCl2正常组和CoCl2苦参碱组HIF-1α(1.660±0.171、1.331±0.112)、VEGF(1.161±0.020、0.932±0.016)、TIMP-3(1.464±0.047、1.785±0.043)蛋白表达量明显高于常氧正常组(1.092±0.082、0.784±0.042、0.603±0.052)和常氧苦参碱组(0.734±0.080、0.637±0.022、1.203±0.069)(P＜0.05),CoCl2苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于CoCl2正常组,TIMP 3蛋白表达量高于CoCl2正常组(P＜0.05);常氧苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于常氧正常组,TIMP-3蛋白表达量高于常氧正常组(P＜0.05).结论 缺氧条件下苦参碱能抑制胶质瘤C6细胞增殖,使VEGF蛋白表达下调、TIMP-3蛋白表达上调,其抗肿瘤机制可能与抑制血管生成相关.
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黄连解毒汤在体外对大鼠胶质瘤C6细胞增殖的影响
目的:研究黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法:分别采用MTT法、流式细胞术、划痕法和Transwell法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,分别采用RT-PCR和Western blot法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞中BCL-2、BAX、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响.结果:黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6胶质瘤细胞24 h或48 h时可显著抑制细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度依赖性(P＜0.01);黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6细胞24h时的凋亡率均较空白对照组显著升高(P＜0.01),划痕刻度均较空白对照组显著变宽(P＜0.01),穿膜细胞数量均较空白对照组显著减少(P＜0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达显著降低,而BAX和Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01),并呈浓度依赖性(P＜0.01).结论:黄连解毒汤可抑制大鼠胶质瘤C6细胞的增殖、迁移和侵袭,促进C6细胞凋亡,其机制可能与抑制C6细胞BCL-2表达以及促进BAX和Caspase-3表达有关.
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漆黄素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及细胞周期的影响
目的 研究漆黄素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及细胞周期的影响.方法 以不同浓度的漆黄素(12.5、25、50μmol/L)处理C6细胞,以DMSO作为对照组.分别采用Transwell体外侵袭实验、Transwell体外迁移实验检测漆黄素对C6细胞侵袭、迁移能力的影响,采用流式细胞术检测漆黄素对C6细胞增殖及细胞周期的影响.结果 Transwell侵袭实验显示:漆黄素处理24 h后与对照组相比,漆黄素处理组的C6细胞侵袭率明显降低.Transwell侵袭实验显示:漆黄素处理C6细胞12h后与对照组相比,漆黄素处理组的C6细胞迁移率显著降低.流式细胞术检测细胞增殖结果显示:与对照组相比,漆黄素处理组的C6细胞增殖率明显降低.流式细胞术检测细胞周期结果显示:与对照组相比,漆黄素处理组的G1期细胞比例逐渐增高,而G2期和S期的细胞比例相应降低,将细胞周期阻滞在G1期.结论 漆黄素能够明显抑制胶质瘤C6细胞的侵袭、迁移能力;并可通过阻滞C6细胞的细胞周期进程来抑制其增殖.
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姜黄素、槲皮素、尼莫地平对C6胶质瘤细胞替尼泊苷敏感性的影响
目的:观察姜黄素(Curcumin,Cur)、槲皮素(Quercetin,Que)和尼莫地平(Nimodipine,Nim)对胶质瘤细胞化疗药物替尼泊苷(Teniposide,Ten)敏感性的影响.方法:体外培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,采用MTT比色法确定Ten的IC 50及Cur、Que、Nim的安全浓度,检测Ten与Cur、Que、Nim联合使用对肿瘤细胞增殖率的影响.结果: Ten的IC50为0.5 μg/ml,Cur、Que和Nim的安全浓度分别为5.16 μg/ml、0.03 μg/ml和10 μg/ml.Ten分别与Cur、Nim联合使用对胶质瘤细胞的抑制率明显高于单独使用Ten的抑瘤效果,Ten与Que联用的协同作用明显. 结论:Cur 、Que和Nim能增强大鼠脑胶质瘤C6细胞对化疗药物Ten的敏感性,合用呈现协同效应.
