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HOX转录反义RNA在乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨乳腺癌组织中HOX转录反义RNA(HOTAIR)和其调控基因HOXD10的表达情况及HOTAIR基因的甲基化情况.方法 对45对乳腺癌组织、癌旁组织、前哨淋巴结组织、腋窝淋巴结组织进行研究,采用实时荧光定量PCR法测定HO-TAIR和HOXD10的表达情况,甲基化特异性聚合酶链反应测定HOTAIR非甲基化情况.结果 乳腺癌组织中HOTAIR相对表达量(10.22±3.65)显著高于癌旁组织(5.43±2.19,P<0.05),但两组HOXD10相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).乳腺癌组织中HOTAIR基因非甲基化率(88.9％)显著高于癌旁组织(44.4％,P<0.05).乳腺癌组织中HOTAIR基因与Ki-67和孕激素受体呈正相关(r=0.810、0.623,P均<0.05).前哨淋巴结组织中HOTAIR相对表达量(9.27±1.19)显著高于腋窝淋巴结组织(6.86±1.24,t=3.397,P<0.05).前哨淋巴结组织中HOTAIR与Ki-67和淋巴结转移率呈正相关(r=0.803、0.687,P均<0.05).结论 乳腺癌组织和前哨淋巴结组织中HOTAIR基因表达水平升高,乳腺癌组织中HOTAIR与Ki-67和孕激素受体呈正相关,其调控基因HOXD10表达量无明显变化,HOTAIR基因非甲基化水平升高.
关键词： HOX转录反义RNA HOXD10 甲基化 乳腺癌 -
HOXD10在胆管癌细胞放疗增敏中的作用
目的:探讨同源异型盒D10 (homeobox D10,HOXD10)基因在人胆管癌细胞放疗增敏中的作用及其可能的作用机制.方法:用不同剂量的放射线照射胆管癌RBE和HCCC9810细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测细胞中HOXD10 mRNA的表达.应用克隆形成实验、“多靶单击模型”和FCM法检测HOXD10稳定过表达的胆管癌Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞的放射增敏效应及细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测放射治疗对HOXD10过表达的胆管癌Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞中凋亡相关蛋白表达的影响.结果:2、4和8 Gy放射治疗后48和72 h,胆管癌RBE和HCCC9810细胞中HOXD10 mRNA的表达水平均显著高于放疗后24 h组(P值均＜ 0.05).在2、4和8 Gy放射治疗后,Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞的克隆形成率均分别显著低于对应的仅表达绿色荧光蛋白的阴性对照Lv-CTRL-RBE和Lv-CTRL-HCCC9810细胞(P值均＜ 0.05);Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞的平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasithreshold dose,Dq)和2 Gy单次照射后细胞的存活分数(survival fraction with 2 Gy,SF2)值均分别低于Lv-CTRL-RBE和Lv-CTRL-HCCC9810细胞(P值均＜ 0.05).4 Gy放射治疗后24 h,Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞凋亡率高于Lv-CTRL-RBE和Lv-CTRL-HCCC9810细胞(P值均＜ 0.05);Lv-HOXD10-RBE和Lv-HOXD10-HCCC9810细胞中p53、p21和Bax蛋白的表达水平均高于Lv-CTRL-RBE和Lv-CTRL-HCCC9810细胞,而双微体2(murine double minute 2,Mdm2)蛋自的表达水平均低于Lv-CTRL-RBE和Lv-CTRL-HCCC9810细胞(P值均＜0.05).结论:HOXD10可增加人胆管癌RBE和HCCC9810细胞对放射的敏感性,这一作用可能与凋亡相关蛋白的表达上调有关.
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HOXD10基因转染对人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响
目的 研究HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响.方法 将HOXD10基因表达质粒(pcDNA3.1-EGFP-HOXD10)转染至SGC7901/VCR中,利用Real-time PCR和Western blotting检测HOXD10基因转染后表达效果;MTT方法、平板单克隆实验、流式细胞术、Transwell方法分别检测HOXD10基因转染对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、凋亡、侵袭能力的影响;并用Western blotting检测HOXD10基因转染对肿瘤侵袭性相关因子MMP-2蛋白表达的影响.结果 HOXD10基因转染至人胃癌SGC7901/VCR细胞后其基因和蛋白表达水平均显著上升(P＜0.05),能够抑制SGC7901/VCR细胞增殖、单克隆形成、细胞周期,并提高顺铂作用下细胞凋亡率(P＜0.05),同时显著抑制细胞侵袭能力和MMP-2蛋白的表达(P＜0.05).结论 HOXD10基因转染人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后能够高表达,进而抑制细胞增殖、单克隆形成、细胞周期和侵袭能力并提高顺铂下细胞凋亡率,而其抑制细胞侵袭能力可能与MMP-2表达减少有关.
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miR-1269a调控HOXD10基因抑制胆管癌细胞侵袭的作用及其机制
目的 探讨miR-1269a对HOXD 10基因的调控作用及对胆管癌细胞侵袭能力的影响.方法 预测并筛选出调控HOXD10基因的miR-1269a作为研究对象;转染miR-1269a模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor)至胆管癌细胞系后检测HOXD 10mRNA及蛋白的表达变化,并观察miR-1269a对胆管癌细胞侵袭能力的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a与HOXD10之间的靶向作用关系.结果 miR-1269a在胆管癌组织中表达显著高于癌旁组织(P=0.0023);miR-1269a模拟物可显著降低胆管癌细胞中HOXD10 mRNA (Mz-CHA-1:P=0.0025;RBE:P=0.0038)及蛋白表达水平,且细胞的侵袭能力较对照组显著增强(Mz-CHA-1:P=0.004;RBE:P=0.004).miR-1269a抑制剂转染则出现相反的结果(QBC939:P=0.16;HCCC9810:P=0.13).miR-1269a明显抑制野生型HOXD10-3'UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无影响.结论 miR-1269a靶向负性调控HOXD10基因,在胆管癌细胞侵袭过程中发挥重要作用.
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microRNA-10b及靶基因HOXD10在肝癌细胞中的表达及侵袭能力的影响
目的：探讨microRNA-10b（miR-10b）及其靶基因同源异性盒基因HOXD10在肝癌细胞中的表达及转染miR-10b对肝癌细胞侵袭性能力的影响。方法分析HOXD10基因在3种肝癌细胞株Huh7、HepG2、SMMC-7721中的基础表达量，筛选出HOXD10基础表达量高的HepG2作为后续研究对象。设计合成外源性miR-10b序列，用脂质体瞬时转染肝癌细胞株，设置miR-10b转染组、无关序列转染组（阴性对照组）和未处理组（对照组）。用RT- PCR及Western blot检测肝癌细胞转染miR-10b后HOXD10基因及蛋白表达量的变化，细胞侵袭实验研究转染miR-10b对肝癌细胞侵袭能力。结果在基因水平和Western blot分析蛋白水平HOXD10基因表达量2-ΔΔCT分别是（1.24±0.23）、（1.00±0.02），>0.05差异无统计学意义。在蛋白分析HepG2细胞灰度计算值是值分别是653.492和1968.742，蛋白水平表达降低。HOXD10基因在肝癌细胞株HepG2的表达量显著高于Huh7和SMMC-7721；miR-10b成功转染HepG2后，HOXD10基因表达水平与对照组比较无明显变化，但HOXD10蛋白表达量与对照组比较下降及侵袭性也增强。结论 miR-10b可能通过抑制靶基因HOXD10表达发挥作用，促进肝癌细胞的侵袭。
关键词： 肝癌细胞 microRNA- 10b HOXD10 侵袭 -
砷对HOXD10基因表达的影响
目的 探讨砷对周围血淋巴细胞中及人肺腺癌细胞系A549细胞中同源异型盒D10(HOXD10)基因表达的影响.方法 ①采用判断抽样方法,抽取某砒霜厂职业性接触砷的59名工人为接触组,以无职业性接触砷的17名当地居民为对照组.采用氢化物发生-冷肼捕集-原子吸收法检测2组人群尿中形态砷水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测周围血淋巴细胞中HOXD10的表达.②以浓度为0.0、0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L的三氧化二砷(As2 O3)处理A549细胞,采用比色法检测细胞存活率,采用qRT-PCR法检测HOXD10的表达.结果 ①接触组人群尿中无机砷、一甲基砷酸、二甲基砷酸、总砷水平和周围血淋巴细胞中HOXD10 mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.05).②As2 O3可导致A549细胞存活率呈现剂量依赖性下降(P<0.01),HOXD10 mRNA相对表达水平呈现剂量依赖性上调(P<0.01).A549细胞存活率和HOXD10 mRNA相对表达水平呈负相关,相关系数为-0.777(P<0.01).结论 砷可导致职业接触人群周围血中HOXD10表达上调.As2O3可抑制A549细胞增殖,可能与上调HOXD10表达有关.
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同源异型盒基因10蛋白在大肠腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨大肠癌和正常大肠黏膜组织中同源异型盒基因10(HOXD10)的表达情况并探讨其临床意义.方法 应用SP免疫组化法检测53例经4%中性甲醛固定和石蜡包埋的大肠癌及53例正常大肠黏膜组织标本中HOXD10蛋白的表达情况,并分析其与大肠癌患者临床病理参数间的关系.结果 HOXD10蛋白在正常大肠黏膜组织中的阳性染色率(5.7%)明显低于大肠癌组织(64.2%),两者间差异有统计学意义(P<0.05).在大肠癌组织中,HOXD10蛋白染色阳性率在高分化(53.8%)、T1+T2(38.5%)、Ⅰ+Ⅱ期(54.3%)、无淋巴结转移(55.3%)均低于在低分化(73.0%)、T3+T4(72.5%)、Ⅲ+Ⅳ期(83.3%)、有淋巴结转移(86.7%),差异均有统计学意义(均P<0.05),但HOXD10蛋白的染色阳性率与大肠癌患者的性别、年龄、癌灶原发部位及癌灶大小无相关性(均P>0.05).结论 HOXD10蛋白的表达与人大肠癌浸润和转移存在密切相关.
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HOXD10在肝外胆管癌中的表达及其临床意义
目的 探讨肝外胆管癌(ECC)中同源异型盒10(HOXD10)的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学(IHC)方法检测174例ECC手术切除组织的HOXD10表达.分析HOXD10表达与临床病理特征的相关性,包括生存分析.结果 HOXD10在ECC组织的表达较正常的胆道上皮细胞明显下调(P=0.001).HOXD10的高表达与低组织学分级(P<0.001)和低T分期(P=0.002)相关.Kaplan-Meier曲线表明HOXD10高表达与更好的总生存期显著相关(P<0.001).多因素分析显示,HOXD10表达是总生存期的独立危险因素(P=0.002,HR=1.830).结论 HOXD10高表达与ECC良性临床病理特征密切相关,是ECC总生存期的独立预后因素.
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miRNA-224通过HOXD10影响Hep3B细胞迁移
目的 探讨miR-224影响肝癌细胞迁移的可能机制.方法 采用双荧光素酶实验、载体构建和Western blot 实验等对预测的miR-224靶基因进行验证.qRT-PCR检测正常肝细胞株L02和肝癌细胞株Hep3B中miR-224的表达;划痕实验观察miR-224对肝癌细胞迁移的影响.结果 qRT-PCR结果显示,与正常肝细胞株L02比较,miR-224在肝癌细胞株Hep3B中明显高表达(相对表达倍数1.679 2,P＜0.05);划痕实验显示,与miR-224 mimics阴性对照组(迁移率:56.43％ ～58.33％)以及空白组(迁移率:60.48％ ～ 66.94％)比较,miR-224 mimics组(迁移率:80.12％ ～ 82.02％)的Hep3B细胞迁移能力明显增强(P＜0.05),反之亦然,提示miR-224表达水平和肝癌细胞的迁移能力成正相关;双荧光素酶实验结果显示:与对照组比较,miR-224 mimics组细胞的荧光信号明显下降(P＜0.05);Western blot实验结果显示:与对照组比较,上调miR-224的表达水平后HOXD10表达下降,下调其表达水平HOXD10表达上升(P＜0.05).结论 miR-224通过调控靶基因HOXD10的表达,参与调节肝癌细胞的迁移.
