吴茱萸碱在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白的影响

目的 研究吴茱萸碱(evodiamine)在诱导A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白表达的调控.方法 电镜观察吴茱萸碱诱导细胞凋亡过程中细胞形态的变化.Western bolt方法分析药物作用后对SIRT1蛋白和p53及其下游p21蛋白表达的影响.结果 经15 μmol·L-1吴茱萸碱处理24 h的A375-S2细胞表现出典型的凋亡特征,即细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚.在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p53和p-p53的表达有所上升,其下游p21蛋白也被激活.结论 在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞凋亡中,p53及其下游p21蛋白被活化,SIRT1蛋白表达被下调.

SIRT1免疫调节功能与免疫相关性疾病关系的研究进展

Sirt1是一种脱乙酰酶沉默调节蛋白,具有抗氧化、抗自由基、抗衰老、调节代谢、调节免疫等多种功能,其对免疫的调节涉及固有免疫应答和适应性免疫应答过程,对炎症的抑制作用主要通过NF-κB通路实现.目前Sirt1的免疫调节功能已成为研究的热点,Sirt1的激活和抑制与多种疾病相关,有望成为免疫相关性疾病治疗的新靶点.

组蛋白脱乙酰酶SIRT1与细胞自噬

Sirt1基因敲除对5/6肾切除诱导的小鼠慢性肾脏病及VEGF/Flk-1信号通路的影响

目的 探讨5/6肾切除诱导的肾脏纤维化小鼠中沉默信息调节因子2同源体1(Sirt1)基因敲除的影响及其对血管内皮生长因子(VEGF)/胎肝激酶1(Flk-1)信号通路的作用.方法 雄性8周龄Sirt1+/+野生型小鼠及Sirt1+/+杂合子小鼠按随机数字表分为4组:Sirt1+/+假手术组(WT-Sham组,n=6)、Sirt1+/-假手术组(KO-Sham组,n=6)、Sirt1+/+5/6肾切除组(WT-Nx组,n=6)、Sirt1+/-5/6肾切除组(KO-Nx组,n=6).代谢笼收集24 h尿液检测尿蛋白含量,收集血和肾组织标本检测血肌酐、尿素氮以及肾脏组织病理改变.免疫组化检测各组小鼠肾组织Sirt1、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;实时定量PCR和Western印迹分别检测肾组织Sirt1、纤连蛋白(Fibronectin)、Collagen Ⅰ、VEGF、Flk-1 mRNA和蛋白表达.结果 Sirt1+/+小鼠中Sirt1在肾小球内皮细胞、足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞均有表达,而Sirt1+/-小鼠Sirt1表达强度降低.WT-Nx组小鼠术后12周24 h尿蛋白量、血尿素氮、血肌酐、肾小球硬化指数和肾小管间质纤维化指数均高于WT-Sham组(均P＜0.01),而KO-Nx组小鼠术后12周上述指标比WT-Nx组更高(均P＜0.01).与WT-Sham组比较,WT-Nx组肾组织Fibronectin、Collagen Ⅰ和TGF-β表达均上调(均P＜0.01);而KO-Nx组比WT-Nx组更高(均P＜0.01).WT-Nx组肾组织VEGF、Flk-1 mRNA和蛋白表达均低于WT-Sham组(均P＜0.01);而KO-Nx组VEGF、Flk-1表达比WT-Nx组更低(均P＜0.05). 结论 Sirt1基因敲除可进一步增加5/6肾切除小鼠术后的尿蛋白量和血肌酐,加重肾脏病理和肾脏纤维化,其作用机制可能与抑制VEGF/Flk-1信号通路有关,提示Sirt1可能是慢性肾脏病潜在的干预靶点.

白藜芦醇对慢性肾衰竭大鼠肾脏的保护作用及相关机制

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对5/6肾切除大鼠肾脏的保护作用及对转化生长因子(TGF)-β-Smad信号通路的影响.方法 将50只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组,n=10)、5/6肾切除组(Nx组,n=20)和5/6肾切除+RSV治疗组(Nx+ RSV组,n=20),术后1周开始每天给予生理盐水或RSV(20 mg/kg)灌胃.建模后每4周收集24 h尿液检测尿蛋白含量,12周后处死大鼠,收集血和肾组织标本观察血肌酐和肾组织病理改变.免疫组化法观察各组大鼠肾组织TGF-β、结缔组织生长因子(CTGF)、纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)变化.Western印迹法检测肾组织Smad3、磷酸化和乙酰化Smad3表达,免疫共沉淀检测Sirt1与Smad3的相互结合.结果 Nx组在术后12周尿蛋白量[(152.14±30.49) mg/24 h比(25.34±7.54) mg/24 h]、血肌酐[(111.60±21.50) μmol/L比(53.90± 11.59) μmol/L]和肾小球硬化指数(1.56±0.34比0.35±0.08)均显著高于Sham组(均P＜0.01),RSV治疗可显著抑制上述改变(均P＜0.01).免疫组化结果显示Nx组大鼠FN、Col Ⅰ、TGF-β和CTGF的表达高于Sham组(均P＜ 0.01),RSV治疗能显著抑制上述改变.Western印迹显示,Nx组大鼠磷酸化Smad3和乙酰化Smad3的表达显著高于Sham组(均P＜0.05),RSV治疗可显著降低乙酰化Smad3的表达(P＜0.05),但并未显著降低磷酸化Smad3的表达.免疫共沉淀研究显示Sirt1与Smad3相互作用.结论 RSV可改善肾切除大鼠蛋白尿、肾功能和纤维化等指标,其作用机制可能与激活Sirt1,降低乙酰化Smad3的表达有关,提示Sirt1可能是慢性肾脏病潜在的治疗靶点.

Sirt1蛋白在风湿性心脏病大鼠心肌组织中的表达

目的:观察Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶1(Sirt1)在灭活链球菌诱导的风湿性心脏病(RHD)大鼠心肌组织中的表达情况.方法:随机将Lewis大鼠分为急性RHD组(ARHD组)、慢性RHD组(CRHD组)和正常对照组(Control组)3组.以灭活链球菌刺激大鼠建立ARHD(7周)和CRHD(24周)模型.通过HE和Masson染色观察大鼠心肌和心瓣膜组织的病理变化,并利用免疫组化和Western blotting检测心肌组织中Sirt1的表达情况.结果:病理结果显示ARHD组心肌及瓣膜组织炎症细胞浸润明显,CRHD组心肌散在炎症细胞浸润且瓣膜明显纤维化;与Contro1组相比,ARHD组和CRHD组心肌组织Sirt1蛋白表达均上调(P ＜0.01,P＜0.05),且ARHD组高于CRHD组(P＜0.01);此外,与Control组相比,ARHD组和CRHD组心肌细胞核内Sirt1蛋白表达均呈上调趋势(均P＜0.01).结论:Sirt1蛋白在RHD大鼠心肌组织中表达上调,提示Sirt1可能参与RHD的发生.

D-半乳糖诱导小鼠原代皮肤成纤维细胞衰老模型的建立

目的 构建D-半乳糖诱导小鼠皮肤成纤维细胞(MSF)衰老模型.方法 取5～7 d昆明乳鼠背部皮肤,采用Ⅰ型胶原酶消化法分离获得MSF,通过形态学观察及Vimentin免疫组织化学法鉴定MSF细胞.分别用不同浓度D-半乳糖诱导MSF细胞0、24、48 h,采用β-半乳糖苷酶衰老染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测衰老相关基因p53、细胞免疫荧光法分析Sirt1基因表达水平,并分析细胞衰老情况.结果 光学显微镜下细胞呈多突的梭形或星形的扁平细胞,Vimentin蛋白免疫组织化学分析呈阳性.β-半乳糖苷酶衰老染色实验结果显示,不同浓度D-半乳糖诱导后染色阳性细胞数量较对照组显著增多,差异有统计学意义(P<0.01).在D-半乳糖(20 g/L)诱导24、48 h后,与对照组比较,衰老MSF p53基因表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,D-半乳糖诱导48 h后Sirt1蛋白表达水平明显降低.结论 通过Ⅰ型胶原酶消化法及D-半乳糖诱导法成功建立了衰老模型.