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氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响
目的 探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响.方法 用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(NaF)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-Ⅱ与自噬降解相关蛋白P62的表达水平.结果 透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少为明显;Westernblotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-Ⅱ的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平.
关键词： 氟 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞 自噬 -
2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤细胞自噬水平的影响
目的 探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞,分别以终浓度为0(溶剂对照)、1、5、10 μmol/L的PBDE-47染毒处理24h后,采用透射电子显微镜观察细胞内双层膜自噬体结构;以自噬囊泡示踪剂单丹黄酰尸胺(MDC)染色检测自噬囊泡生成情况;采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平.结果 电镜超微结构观察结果显示,对照组细胞内未见异常变化,1 μmol/L染毒组细胞内可见轻微的线粒体扩张但未见明显的双层膜自噬体结构,5μmol/L染毒组细胞内可见明显的线粒体空泡及双层膜自噬体结构,10 μmol/L染毒组细胞内观察到的双层膜自噬体结构多;与对照组相比,5、10 μmol/L PBDE--47染毒组MDC荧光强度升高,MDC阳性细胞比例增加;此外,5、10 μmol/L PBDE-47染毒组自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平与对照组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PBDE-47可诱导SH-SY5Y细胞自噬水平的增加.
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白藜芦醇对氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体生物发生障碍的影响
目的 探讨线粒体生物发生在氟神经毒性中的作用,以及白藜芦醇干预氟神经毒性的作用机制.方法 不同浓度氟化钠(NaF)处理对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24 h,并用20 μmol/L白藜芦醇对60 mg/L NaF组进行干预. NaF剂量染毒实验分组:对照组,20、40、60 mg/L NaF组;白藜芦醇干预NaF染毒实验分组:对照组,60 mg/L NaF组,20 μmol/L白藜芦醇+60 mg/L NaF组, 20 μmol/L白藜芦醇组.采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测线粒体生物发生关键调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α (PGC-1α)、核呼吸因子1 (NRF1)及线粒体转录因子A (TFAM)的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR技术检测线粒体生物发生关键调控因子及其下游呼吸链复合物亚基细胞色素C氧化酶亚基1(CO1)和ATP合成酶亚基(ATP8)的mRNA表达水平与线粒体DNA(mtDNA)相对含量;采用流式细胞术检测线粒体膜电位.结果 与对照组比较,60 mg/L NaF组SH-SY5Y细胞线粒体生物发生关键调控因子PGC-1α、NRF1、TFAM mRNA与蛋白表达水平、线粒体呼吸链复合物亚基CO1和ATP8 mRNA表达水平以及mtDNA相对含量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);60 mg/L NaF组线粒体膜电位与对照组比较也明显降低(P<0.05).经白藜芦醇干预后,与60 mg/L NaF组比较,20 μmol/L白藜芦醇+60 mg/L NaF组SH-SY5Y细胞的线粒体生物发生关键调控因子PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白与mRNA表达水平均明显增加,线粒体呼吸链复合物亚基CO1和ATP8的mRNA表达水平、mtDNA相对含量和线粒体膜电位均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论白藜芦醇干预可缓解氟导致的SH-SY5Y细胞线粒体生物发生障碍.
关键词： 氟 白藜芦醇 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞 线粒体生物发生 神经毒性 -
苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制
目的 探讨苦参碱对人神经母细胞瘤( NB) SH-SY5Y细胞的作用机制.方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0g·L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率；流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率；比色法检测Caspase-8的相对活性.采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析.结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)％、(11.01±0.85)％、(15.22±0.71)％和(22.31±1.45)％；FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)％、(10.74±1.65)％、(14.00±0.98)％和(17.81±1.06)％；比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)％、(10.69±1.10)％、(14.80±1.44)％和(19.80±0.97)％；以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强.
关键词： 苦参碱 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞 增殖 凋亡 Caspase-8 -
黄芪多糖对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖作用研究
目的：研究黄芪多糖（APS）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。方法：以0（空白对照）、25、50、100 mg/ml APS培养细胞6、12、24 h后，MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0（空白对照）、25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后，Hoechst 33258荧光染色，荧光显微镜下观察细胞核形态；流式细胞仪检测细胞周期分布与凋亡情况；Western blot法检测细胞磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（ERK）1/2蛋白表达；酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞白细胞介素2（IL-2）、IL-6、IL-12含量。结果：与空白对照比较，100 mg/ml APS培养细胞6 h，50、100 mg/ml APS培养细胞12 h与25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞抑制率升高。50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后，G0/G1期比例升高，G2/M、S期比例降低；IL-2、IL-6含量增加。25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞凋亡率升高；细胞核出现碎块状致密浓染，并有凋亡小体出现；细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平降低，IL-12含量增加。以上差异均具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。结论：APS能抑制SH-SY5Y细胞增殖，阻滞细胞周期进程，诱导细胞凋亡，其机制可能与降低ERK蛋白磷酸化水平和升高细胞因子水平有关。
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复方脑康胶囊对β-淀粉样肽诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用研究
目的:研究复方脑康胶囊对β-淀粉样肽(Aβ)25-35(Aβ25-35)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用.方法:将SH-SY5Y细胞接种后分为对照、Aβ25-35(25μmol·L-1)和复方脑康胶囊(0.725 g·mL-1) +Aβ25-35(25 μmol· L-1)组.通过测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积,观察复方脑康胶囊对Aβ导致神经毒性的保护作用.结果:与对照组比较,Aβ25-35组SY5Y细胞的轴突长度和胞体面积均较小,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,而加入复方脑康胶囊水提液后,可使上述指标恢复或接近正常.结论:复方脑康胶囊具有神经保护作用,可减轻AB导致的神经毒性.
