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适合人肌母细胞的无血清培养基
背景:肌母细胞体外培养大多使用添加胎牛血清培养基,存在很多不足,开发无血清培养基,更加稳定、安全、经济,有广泛的应用前景.目的:初步探索适合人肌母细胞培养的无血清培养基.方法:配制含胎牛血清培养基(DMEM/F12 1:1添加胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子和体积分数20％胎牛血清),间充质干细胞无血清培养基组(无血清培养基、2％血清替代物、2 mmol/L L-谷氨酰胺,人脐带间充质干细胞,细胞纯度大于99％,UltraCULTURETM添加血清替代物,谷氨酰胺).自制无血清培养基组(GibcoTM添加胰岛素样生长因子1,碱性成纤维细胞生长因子,谷氨酰胺).3种培养基分别对人肌母细胞分别进行培养,观察肌母细胞的形态、免疫组织化学的鉴定,计算克隆的形成率,绘制细胞生长的曲线,MTT检测肌母细胞的活性,比较3种培养基培养肌母细胞增殖、分化的差异.结果与结论:各组细胞形态上无明显差异;各组免疫组织化学鉴定肌母细胞纯度均达99％;含胎牛血清培养基组和自制无血清培养基组克隆形成率显著高于间充质干细胞无血清培养基组(P＜ 0.01),含胎牛血清培养基组克隆形成率显著高于自制无血清培养基组(P＜0.01);含胎牛血清培养基组与自制无血清培养基组细胞数远高于间充质干细胞无血清培养基组;自制无血清培养基组细胞活性显著高于含胎牛血清培养基组和间充质干细胞无血清培养基组(P＜0.01).自制无血清培养基组可有效用于肌母细胞的培养,在促进肌母细胞早期贴壁、增殖上还需进一步优化.
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无血清和有血清培养人脐带间充质干细胞的对比
背景:研究表明有血清培养体系存在若干风险和问题,比如免疫排斥、批次差异、病毒风险等,另外随着外泌体的发现和应用,无血清培养体系变得越来越重要.目的:系统比较人脐带间充质干细胞无血清培养体系与传统有血清培养体系的异同,为人脐带间充质干细胞的临床转化奠定基础和提供实验数据.方法:无菌条件下采集健康剖腹产足月儿脐带,组织块贴壁法培养人脐带间充质干细胞,从第1代开始有血清培养组用体积分数为10%胎牛血清培养,血清替代物组用体积分数为15%血清替代物培养.倒置显微镜观察其形态变化,流式细胞仪检测其表面标记物,CCK-8检测其增殖能力,诱导分化实验检测其多向分化潜能, Western Blot检测干性标志物oct4、nanog、sox2的蛋白水平.结果与结论:①倒置显微镜下观察可见血清替代物组人脐带间充质干细胞呈现较均一的漩涡状生长,胎牛血清组人脐带间充质干细胞随着细胞代数的增加逐渐出现细胞分化或者老化现象;②两种培养法培养的人脐带间充质干细胞均表达CD73,CD90和CD105,低表达CD34和CD45,二者无明显差异;③增殖能力上胎牛血清组优于血清替代物组;④两种培养法培养的人脐带间充质干细胞均具有成脂、成骨、成软骨诱导分化能力,二者无明显差异;⑤血清替代物组与胎牛血清组oct4、nanog的表达水平无显著差异,血清替代物组sox2表达水平高于胎牛血清组(P < 0.05);⑥血清替代物培养的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞国际标准,血清替代物能够替代胎牛血清成为培养人脐带间充质干细胞的优选方法.
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大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立
建立大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系.使用化学成分确定的KnockOut血清替代物(KSR)代替现有毛囊干细胞生长培养基中的胎牛血清,比较两种培养基培养的毛囊干细胞的形态特点和生长情况;通过毛囊重建实验证明该无血清培养基能够在体外维持毛囊干细胞的“干性”;检测无血清培养基培养的毛囊干细胞中α6-整合素、角蛋白K14和P63的表达情况.毛囊干细胞在该无血清培养基中可正常生长并表达上述蛋白,将其移植到裸鼠背部,能够重建含毛囊皮肤.建立了大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系并重建有毛皮肤,为毛囊干细胞的临床研究和应用提供了理论基础和技术支持.
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动物细胞无血清培养基的发展
许多生物技术科学研究和产品的生产都离不开动物细胞的培养。相对于传统的含血清培养，动物细胞的无血清培养具有无法比拟的优势。近年来，血清替代物的开发，无血清培养基的应用，推动着动物细胞无血清培养的发展。以下对动物细胞无血清培养基的发展和应用作一综述，并探讨未来的研究方向。
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冷冻平皿并添加血清替代物改善小鼠囊胚的玻璃化冷冻效果
目的:观察在冷冻液中添加血清替代物(SSS)并使用冷冻的平皿作载体改善昆明小鼠囊胚玻璃化冷冻的效果.方法:平皿组冷冻保护液中添加高浓度SSS,处理好的囊胚滴在冷冻的平皿后投入液氮中行玻璃化冷冻;开放麦管组囊胚装入开放的麦管中玻璃化冷冻.冷冻一周,解冻后移入人输卵管液中孵育.结果:解冻后平皿组囊胚回收率1 00%,回收囊胚扩张率88%、孵化率82%;开放麦管组囊胚回收率89%,回收囊胚扩张率77%、孵化率67%,二者相比差异有显著性(P＜0.05);平皿组囊胚质量分级退化率8%,开放麦管组退化率28%,但二者相比差异无显著性(P＞0.05).结论:保护液中添加血清替代物并使用冷冻的平皿可以改善小鼠囊胚玻璃化冷冻的效果.
