外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性测定模型初探

目的建立外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性的实验模型.方法采用美国1995年药典提供的模拟胃液和模拟肠液配方,测定不同蛋白在胃肠环境中的稳定性.蛋白质在模拟胃/肠液中的浓度为0.5mg/ml.在蛋白与模拟胃/肠液反应后的0s、15s、30s、60s、2min、4min、8min、15min、30min和60min准时取样,根据SDS-PAGE凝胶电泳结果,判断蛋白质在模拟胃/肠液中的稳定性.结果大豆胰蛋白酶抑制剂、牛β-乳球蛋白A、牛β-乳球蛋白B在模拟胃液中稳定存在,60min完全不降解;大豆血凝素8min内绝大部分降解,但降解带60min内仍有残留;花生血凝素8min内降解;鸡卵粘蛋白、牛血清白蛋白、大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶均在15s内降解.蛋白质在模拟肠液中的稳定性与模拟胃液不同.大豆胰蛋白酶抑制剂、牛β-乳球蛋白A、牛β-乳球蛋白B、牛血清白蛋白、鸡卵粘蛋白、鸡卵清蛋白、大豆血凝素、花生血凝素在模拟肠液中,60min均不能完全降解;大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶及其降解带60min内依然存在.结论不同的外源蛋白在模拟胃/肠液中的稳定性不同,根据蛋白质稳定性差异,初步建立了评价外源蛋白在模拟胃/肠液中稳定性测定的模型.

鳖甲水提物W-A-80在模拟胃肠液中消化情况分析

目的:研究鳖甲水提物W-A-80在模拟胃、肠环境中消化情况,探讨其体内转化形式.方法:采用水提醇沉法制备鳖甲水提物W-A-80,模拟胃肠液环境,于37℃消化.以寡肽产率为指标,通过双缩脲反应-酶联免疫检测仪法考察胃蛋白酶和胰蛋白酶于不同酶底比、酶解时间的寡肽(截留相对分子质量＜3 500)产率变化；平衡透析法测定模拟胃肠液消化后所得寡肽与体外小鼠肝组织的蛋白结合率.结果:确定酶解条件为人工胃液酶底比1∶10,于37℃酶解3h,不同质量浓度寡肽与肝组织的蛋白结合率分别为31.63％,19.93％,9.65％；人工肠液酶底比1∶100,于37℃酶解11h,不同质量浓度寡肽与肝组织的蛋白结合率分别为48.75％,47.43％,22.72％;均明显高于空白对照的7.00％,5.31％,4.60％.结论:鳖甲水提物W-A-80经模拟胃肠液消化有大量寡肽产生,且活性显著强于原液,推测寡肽可能是鳖甲抗肝纤维化的物质基础.

061 反相HPLC法测定模拟胃液中的二亚硝基哌嗪

索法酮海藻酸盐微胶囊的制备及释放性的研究

目的 研究了以索法酮药物为囊芯海藻酸钠盐微胶囊的制备方法及其体外释药性能.方法 采用乳化法制备了索法酮微胶囊,通过正交实验确定了佳的制备条件.利用光学显微镜现测了微胶囊的形态;双目倒置显微镜测定微胶囊尺寸;用紫外分光光度法测定索法酮的含量,包封率和回收率;利用傅里叶红外光谱和X射线衍射光谱验证了微胶囊的包覆效果.并进行了体外释放实验.结果 在搅拌速度为1 000r·min-1,海藻酸钠浓度为3%,Span80与Tween80质量比为2.5,水油体积比为4,芯壁的质量比为1的条件下制备的微胶囊表面光滑,粒度分布均匀.得到微胶囊的平均包封率78.3%,平均载药量为5.54%,平均粒径为400μm.微胶囊在模拟肠液,模拟胃液中释放曲线显示微胶囊在模拟肠液中9 h达到高释放度64%,并且能持续保持平稳,而在模拟胃液中达到平稳释放度为8.5%.结论 以海藻酸钠为壁材,乳化法可以制备出结构良好,释放规律符合药物在体内作用效果的微胶囊.

枸橼酸莫沙必利片体外溶出度的研究

目的 通过测定进口药的枸橼酸莫沙必利片(商品名:加斯清)及国产样品的体外溶出度,为药品的质量和指导临床合理用药提供科学依据.方法 依据国家标准[WS1-(X-287)-2003Z]和进口药品注册标准(JX20080288)的体外溶出度的规定,采用紫外分光光度法分别测定加斯清及国产样品在模拟胃液(0.1 mol/L盐酸)和人工肠液(pH=6.8磷酸缓冲液)中的溶出度.结果 加斯清及国产样品在模拟胃液中的溶出度均较好,10 min后溶出度均大于90%;加斯清在人工肠液中的溶出度优于国产样品:45 min时的溶出度大于80%,符合进口药品注册标准(JX20080288),而国产样品A、B、C在人工肠液中60 min时的溶出度均低于50%,不符合进口药品注册标准(JX20080288).结论 加斯清及国产样品在模拟胃液的溶出度均较好,而在人工肠液中的溶出度加斯清优于国产样品.

转G10evo和Cry1Ab/Cry2Ab基因玉米GAB-3外源基因表达蛋白的消化稳定性

目的 评价转G10evo、Cry1Ab/Cry2Ab基因抗虫耐草甘膦玉米(GAB-3)中的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中的消化稳定性.方法 根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,对照或样品均以5g/L进行模拟胃液消化,以2 g/L进行模拟肠液消化.于反应0s、15s、2 min、30 min和60 min时取出 200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应.然后将消化后的对照及样品进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、染色并使用凝胶成像系统观察结果.结果 作为稳定对照的大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃肠液中60 min未被消化,作为不稳定对照的酪蛋白(α-casein)在模拟胃肠液中15s内全部消化.外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃液中2 min内完全消化,在模拟肠液中30 min内完全消化.结论 转基因玉米(GAB-3)的外源基因表达蛋白1Ab、2Ab和G10(EPSPS)在模拟胃肠液中不具有消化稳定性,容易被降解.

转HJC-1和G6-EPSPS基因抗虫耐草甘膦水稻表达蛋白在模拟胃肠环境中的稳定性研究

目的 研究HJC-1和G6-EPSPS基因表达的蛋白分别在模拟胃液和模拟肠液中的消化稳定性.方法 采用美国1995年药典提供的模拟胃液和模拟肠液配方,在体外建立模拟胃肠环境消化体系,测定HJC-1和G6-EPSPS基因表达的蛋白质在胃肠环境中的稳定性.蛋白质在模拟胃、肠液中的浓度分别为5.0和2.0 mg/ml.在蛋白质与模拟胃、肠液反应后的0、15、30 s,1、2、5、10、20、30和60 min准确取样,根据SDS-PAGE凝胶电泳结果,判断蛋白质在模拟胃、肠液环境中的稳定性.结果 HJC-1基因表达的蛋白质在模拟胃液和模拟肠液中均在15s内全部降解；G6-EPSPS基因表达的蛋白质在模拟胃液中30 s内全部降解,在模拟肠液中60 min内不能完全降解.结论 HJC-1基因表达的蛋白质在模拟人体胃肠环境中不稳定,易被降解.G6-EPSPS基因表达的蛋白质在模拟人体胃环境中不稳定,易被降解；在模拟人体肠环境中稳定,不易被降解.

重组人乳铁蛋白在体外模拟胃肠环境中稳定性研究

目的 研究重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rHLF)分别在体外模拟胃液和模拟肠液中的消化稳定性.方法 采用模拟胃液和模拟肠液在体外建立模拟胃肠环境消化体系,测定重组人乳铁蛋白在胃肠环境中的稳定性.重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液中的浓度分别为5.0和2.0 mg/ml.在重组人乳铁蛋白与模拟胃/肠液反应后的0、15、30 s和1、2、5、10、20、30、60 min取样,根据SDS-PAGE凝胶电泳结果,判断重组人乳铁蛋白在模拟胃、肠液环境中的稳定性.结果 重组人乳铁蛋白在体外模拟胃液中2 min内降解,在模拟肠液中60 min内不能完全降解.结论 重组人乳铁蛋白在体外模拟人体胃肠环境中易被降解消化.

藏药佐太在模拟胃液、肠液中的汞溶出差异

目的 比较佐太在模拟胃液、肠液中的汞溶出差异.方法 收集16批佐太,测定其总汞含有量,以及在模拟胃液、肠液中溶出的汞质量浓度,并计算其溶出量.结果 16批样品中总汞含有量为44.46％～50.7％,在模拟胃液中的汞溶出量为432.64 ～ 51 817.64 ng,差异120倍;在模拟肠液中的汞溶出量为19.81～313.29 ng,差异16倍.结论 佐太在模拟胃液中的汞溶出量和差异均显著高于在模拟肠液中,本研究可为其质量研究提供参考.

转Cry1Ab/Cry2Aj和G10evo(EPSPS)基因“双抗12-5”玉米外源基因重组蛋白的消化稳定性研究

目的 评价转Cry1Ab/ Cry2Aj、G10evo(EPSPS)基因抗虫耐草甘膦玉米“双抗12-5”中的外源基因重组蛋白在模拟胃肠液中的消化稳定性.方法 根据国家标准建立体外模拟胃肠环境消化体系,样品或对照都以5 mg/ml的浓度模拟胃液消化,2 mg/ml的浓度模拟肠液消化.分别于反应0s、15s、2 min、30 min和60 min时取出200μl模拟消化液,加入上样缓冲液并沸水浴5 min终止反应,再进行十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、染色并观察结果.结果 大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,STI)在模拟胃、肠液中60 min仍不能被全部消化,酪蛋白(α-casein)在模拟胃、肠液中0～15 s内全部消化,Cry1Ab/Cry2Aj重组蛋白在模拟胃、肠液中0-15 s内完全消化,G10evo(EPSPS)重组蛋白在模拟胃液中0-15 s内全部消化,在模拟肠液中2～30 min内全部消化.结论 转Cry1Ab/Cry2Aj、G10evo(EPSSP)基因玉米的外源基因重组蛋白在模拟胃、肠液中不具有消化稳定性,容易被降解.