首页 > 文献资料
-
胰岛素抵抗与补体系统的相关研究进展
目前研究认为，补体系统作为调节体内免疫和炎症的平衡系统，可能与胰岛素抵抗及糖尿病的发生相关联。本文将着重研究补体C3、C4、CFH、CFB与胰岛素抵抗的相关性，为研究2型糖尿病提供新的视角，以更好的指导临床。
-
老年糖尿病患者免疫状况分析
目的探讨老年糖尿病患者自身免疫状况及其临床意义.方法采用放射免疫分析测定31例50岁以上的老年糖尿病患者(糖尿病组)和29例50岁以上的健康老年人(正常对照组)血清中免疫清蛋白(IgG,IgA,IgM)、补体(C3,C4)及B因子的含量.结果糖尿病组血清中IgG水平较正常对照组显著下降(P＜0.01),而IgA水平较正常对照组显著升高(P＜0.05),补体C4,B因子水平糖尿病组较正常对照组显著升高(P＜0.05),IgM,C3水平两组比较差异无显著性意义.结论老年糖尿病患者免疫球蛋白及补体含量变化可能与糖尿病的发生、发展有关.
-
年龄相关性黄斑变性肝肾亏虚证与CFH Y402H、CFB R32Q基因多态性的相关性研究
目的:探讨年龄相关性黄斑变性(AMD)肝肾亏虚证与补体因子H(CFH)及补体因子B(CFB)基因多态性的相关性.方法:门诊确诊AMD肝肾亏虚证患者64例为观察组,年龄、性别与之匹配的129例无AMD及眼底疾病者作为对照组.采集外周血,提取DNA,PCR扩增后测序,检测CFH Y402H与CFB R32Q单核苷酸多态性,检测血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP).结果:观察组CFH Y402H基因突变人数明显多于对照组.2组等位基因C的频率分别为:观察组23.44%,对照组12.02%,观察组明显高于对照组,危险度:OR=2.241,95%CI:1.287～6.092;2组病例CFB R32Q基因突变人数没有显著性差异.2组等位基因A的频率分别为:观察组3.91%,对照组5.04%,差异无统计学意义,危险度:OR=0.766,95%CI:0.267～2.199;观察组ESR检测结果阳性人数为13(20.31%),对照组阳性人数为9(6.98%),2组阳性率比较差异有统计学意义;观察组CRP检测结果阳性人数为8(12.50%),对照组阳性人数为6(4.65%),2组阳性率比较差异有统计学意义.结论:AMD肝肾亏虚证与CFH Y402H基因变异有关,CFH Y402H基因多态性有可能作为AMD肝肾亏虚证客观辨证指标;炎症机制可能是AMD肝肾亏虚证的病机之一.
-
年龄相关性黄斑变性中医证型与CFH基因Y402H、CFB基因R32Q多态性的相关性研究
目的 探讨补体因子H(CFH)及补体因子B(CFB)基因变异与年龄相关性黄斑变性(AMD)中医证型的相关性.方法 门诊确诊AMD患者125例,按脾虚湿困、痰瘀互结及肝肾亏虚3个证型分成3组.采集患者的外周血,提取DNA,PCR扩增后测序,检测CFH与CBF单核昔酸多态性,分析所得到的基因变异结果与AMD中医证型的相关性.结果 ①AMD3个证型组中,干性与湿性病例数分布有显著性差异(χ2=33.524,P＜0.01),脾虚湿困证以干性为主,肝肾亏虚证以湿性为主,痰瘀互结证则干性、湿性比大致相当.②3组CFH基因Y402H的基因型频率比较差异有显著性(χ2=10.036,P＜0.05)；等位基因T/C频率分布比较差异有显著性(χ2=9.501,P＜0.01),其中肝肾亏虚证等位基因C型比例高(23.44％).③3组CFB基因R32Q的基因型频率比较差异有显著性(χ2=6.171,P＜0.05),等位基因G/A频率分布比较差异有显著性(χ2=10.455,P＜0.01),其中脾虚湿困证等位基因A型比例高(16.67％).结论 AMD脾虚湿困证多数是AMD早期病例,肝肾亏虚证多数是AMD晚期病例；肝肾亏虚证与CFH基因Y402H中TC/CC基因型及等位基因C相关,脾虚湿困证与CFB基因R32Q的GA基因型及等位基因A相关.
-
重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA的构建、鉴定及其对人脐静脉内皮细胞增生的影响
背景 脉络膜新生血管(CNV)是多种眼部疾病致盲的原因之一,研究发现补体系统在CNV的发病机制中起重要作用.目的 构建针对补体因子B(CFB)的小干扰RNA(siRNA)重组质粒,体外观察其对人脐静脉内皮细胞ECV-304增生的影响.方法 根据人CFB的基因序列设计引物,经PCR扩增后与质粒pRNAT-U6.1连接,得到重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA,并进行测序鉴定和PCR鉴定.ECV-304细胞株进行常规培养,用电转染技术将重组质粒或空质粒分别转染人ECV-304细胞株,分为CFB-siRNA转染组和空质粒转染组,未转染的细胞为空白对照组.细胞转染后继续培养48 h,于倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染效率;采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)法测定各组细胞中CFB mRNA的相对表达量;用MTT法检测各组细胞转染24、48和72 h时细胞的增生值(A)并计算生长抑制率;利用流式细胞技术检测各组细胞的生长周期变化.结果 PCR扩增的目的片段序列与CFB基因序列完全相符,ECV-304细胞转染后,倒置荧光显微镜下可见CFB-siRNA转染组和空质粒转染组的细胞中GFP呈绿色荧光.半定量RT-PCR结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组的CFB mRNA相对表达量分别为0.07±0.04、0.14±0.02和0.14 ±0.03,总体比较差异有统计学意义(F=233.05,P=0.00);其中CFB-siRNA转染组CFB mRNA相对表达量明显低于空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).MTT法检测结果显示,各组不同时间细胞增生抑制率总体比较差异有统计学意义(F分组=212.99,P=0.00);CFB-siRNA转染组细胞转染24、48、72 h后细胞增生的抑制率分别为(23.45±0.01)％、(33.48±0.02)％和(45.49±0.01)％,明显高于同时间点空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组G1期的细胞数占总细胞数的(44.4±0.5)％、(25.8±0.4)％和(27.9±0.6)％,总体比较差异有统计学意义(F=58.98,P=0.00);CFB-siRNA转染组G1期和G2期细胞所占百分比显著高于空白对照组和空质粒转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA可通过将细胞阻滞在G1期而有效抑制人脐静脉内皮细胞的增生.
-
重组补体因子B-小干扰RNA抑制大鼠脉络膜新生血管形成的作用及其机制
背景 脉络膜新生血管(CNV)是眼内新生血管的重要表现形式.研究发现补体旁路途径的激活在激光诱导的CNV发展中起关键作用,旁路途径中的补体因子B(CFB)可以作为一个重要的靶点来阻断补体活化的旁路途径. 目的 探讨不同浓度重组CFB-siRNA(CFB-siRNA)抑制激光诱导大鼠CNV的效果及其作用机制.方法 取棕色挪威(BN)大鼠60只120只眼,采用随机数字表法将其分为空白对照组、实验对照组和25、50、75 μg CFB-siRNA组,每组12只鼠24只眼.实验对照组和CFB-siRNA组大鼠用激光光凝法建立CNV模型,不同剂量CFB-siRNA组于激光光凝后第1、3、5天分别经鼠尾静脉注射相应剂量的CFB-siRNA;实验对照组大鼠以同样方法注射生理盐水,空白对照组大鼠不给予任何干预措施.各组大鼠分别于光凝后第3、7、14、21、28天进行荧光素眼底血管造影( FFA),根据荧光素渗漏程度对各光凝斑评分并检测CNV的生长情况；采用免疫组织化学法检测各组大鼠脉络膜内血管内皮生长因子(VEGF)、Ⅷ因子的表达情况.分别于第7、14、21、28天用免疫组织化学法检测脉络膜中CFB、VEGF、转化生长因子p2(TGF-β2)蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察CFB与VEGFmRNA、TGF-β2mRNA表达的关系. 结果 不同剂量CFB-siRNA组的CNV发生率明显低于实验对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；75 μg CFB-siRNA治疗组CNV发生率明显低于25 μg CFB-siRNA组(P＜0 05).免疫组织化学检测结果显示,不同剂量CFB-siRNA组VEGF、Ⅷ因子在大鼠脉络膜中的表达较2个对照组均减弱,且75 μg CFB-siRNA组减弱程度高于25 μg CFB-siRNA组.光凝后14 ～ 21 d,各剂量CFB-siRNA组VEGF蛋白、Ⅷ因子和TGF-β2在脉络膜中的表达均低于空白对照组,各组总体比较差异有统计学意义(P＜0.05).光凝后7～21 d,不同剂量CFB-siRNA组的CFB在脉络膜中的表达明显低于空白对照组,各组总体比较差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,实验对照组CFB表达持续增加,VEGF、TGF-β2呈曲线变化,21 d时为表达高峰；不同剂量CFB-siRNA组中CFB、VEGF、TGF-β2表达显著减少,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 尾静脉注射CFB-siRNA能够有效抑制激光诱导的大鼠CNV生成,其抑制效果随着注射剂量的增加而增强.补体激活旁路途径在CNV生成中扮演着重要角色,抑制CFB可减少CNV生成中VEGF和TGF-β2的表达.
关键词： 脉络膜新生血管/治疗 基因疗法 补体因子B 小干扰核糖核酸 -
常染色体显性遗传多囊肾病中JAK2-STAT3通路对补体因子B表达的调控作用
目的 探讨常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)中JAK2-STAT3通路对补体因子B(CFB)表达的调控作用.方法 收集ADPKD患者肾脏切除术后的肾组织标本,以肾癌根治术患者肾脏切除标本的正常肾脏组织为对照;收集雄性Han:SPRD(Cy/+)大鼠(ADPKD模型)和野生型Han:SPRD(+/+)大鼠4周、8周、16周时的肾组织标本;原代培养16周Han:SPRD(Cy/+)大鼠肾小管上皮细胞,分别给予JAK2抑制剂WP1 066及STAT3抑制剂乙胺嘧啶作用24 h,Western印迹法分别检测Cy/+大鼠、野生型大鼠、ADPKD患者及对照肾组织及各组肾小管上皮细胞中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3、CFB蛋白的表达.结果 与对照组相比,ADPKD患者肾组织中p-JAK2、p-STAT3、STAT3、CFB蛋白表达量增加,且差异有统计学意义(均P＜0.05).与野生型大鼠相比,Cy/+大鼠肾组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3、CFB蛋白表达量增加且差异有统计学意义(均P＜0.01).细胞实验发现,WP1066抑制Cy/+大鼠肾小管上皮细胞p-JAK2、p-STAT3、CFB蛋白的表达(均P＜0.05),且抑制程度与WP1066剂量相关;乙胺嘧啶抑制Cy/+大鼠肾小管上皮细胞p-STAT3、CFB蛋白的表达(均P＜0.05).结论 ADPKD中JAK2-STAT3通路的异常激活可以促进CFB的表达,并且CFB的蛋白水平与ADPKD的病程相关,其可能参与了ADPKD囊泡的发生和发展.
