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小鼠淋巴瘤细胞试验用于突变检测的研究进展
自从1972年小鼠淋巴瘤细胞试验(mouselymphoma assay MLA)建立以来,该试验已经广泛地用于各种理化因素的遗传毒性评价.其使用的细胞株小鼠淋巴瘤L5178Ytk+/-,-3.2.7c细胞在11号染色体上存在tk等位基因.由于只含有1个有活性的tk基因,因此可以检测出以耐药性为指标的基因突变(tk+/-→tk-/-),该方法的优点是不仅可以检测点突变等小的基因突变,还可以检测大的缺失以及染色体水平的变化.在化合物检测和评价方面,美国环境保护署回顾了1976至1993年间MLA检测602个化合物的结果,其中343个为阳性,44个阴性,18个疑似.通过其中260个化合物与美国"国家遗传-毒理学计划"的数据进行全面的比较,证实MLA试验完全适用于遗传毒性的评价以及预测潜在的致癌作用[1].
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脱细胞异体真皮基质的遗传毒性研究
目的:检测医疗器械注册产品脱细胞异体真皮基质的遗传毒性.材料与方法:以产品浸提液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames 试验) 和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9) 和代谢活化(+S9) 条件下检测.Ames 试验采用平板掺入法,检测了50 、100 、200 μl/ 皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98 、TA100 、TA1535 、TA1537 及大肠杆菌WP2 uvrA 的回变菌落数;MLA 检测了终浓度2.5% 、5% 、10% (V/V) 3 个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h 、-S9/24 h 三种处理条件下诱发的L5178Y 细胞TK 基因突变频率(MF) 和小集落突变百分率(SC%).结果:未经复水处理所得样品浸提液诱发五株菌的回变菌落数,对比氯化钠注射液溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/3 h 处理条件下诱发的MF 明显增加(P<0.01),且具有浓度相关性;复水处理后所得样品浸提液,在-S9/3 h 、24 h 条件下诱发的MF 均无明显增加.结论:脱细胞异体真皮基质对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,未经复水处理时在-S9 条件下对测试细胞tk-+/-及染色体具明显损伤作用,经复水处理后无明显损伤作用.产品在非代谢活化条件下表现出的阳性结果可能与其附加的冷冻保护剂有关.
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秦皮水煎剂的遗传毒性研究
目的:研究秦皮水煎剂的遗传毒性.方法:采用小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)和小鼠骨髓微核试验(MNT).MLA试验中,秦皮水煎剂(含生药)1.71,3.42,6.83,13.65 g·L~(-1) 4个质量浓度组,超纯水阴性对照组及甲基甲烷磺酸酯、环磷酰胺阳性对照组,分别在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下与L5178Y细胞作用3 h,表达2 d,制备基因突变频率平板并培养12～13 d,计数含大、小突变细胞集落的孔数,计算每组总突变率和小集落突变百分率;MNT试验中,3个剂量组(含生药)7.14,14.28,28.55 g·kg~(-1),氯化钠注射液阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组,每组10只ICR小鼠,雌雄各半,间隔24 h实施2次灌胃给药,制作骨髓涂片,镜检每只小鼠2 000个嗜多染红细胞中含微核的嗜多染红细胞数,计算每组动物嗜多染红细胞微核率.结果:MLA试验,-S9条件下各浓度组诱发的总突变率呈现浓度依赖性增加,13.65,6.83 g·L~(-1)组与阴性对照组比较有统计学意义(P<0.01),小集落突变百分率随浓度增加而升高,+S9条件下的各浓度组总突变率和小集落突变百分率均与阴性对照组相近;MNT试验,各剂量组无明显骨髓抑制作用,诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较末见明显增加.结论:秦皮水煎剂在体外非代谢活化条件下可诱发L5178Y细胞tk~(+/-)位点突变并导致染色体损伤,提示其可能存在直接诱变物;秦皮水煎剂对小鼠骨髓细胞染色体无明显损伤作用,经体内、外代谢活化后均未显示遗传毒作用.
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骨水泥的遗传毒性研究
目的 检测医疗器械进口产品骨水泥的遗传毒性.材料与方法以骨水泥粉体浸提液与其液体混合液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测.Ames试验采用平板掺入法,检测了25、50、100 μl/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌(E.coli)WP2 uvrA的回变菌落数；MLAT采用微孔法检测了终浓度0.125％、 0.25％、 0.5％ (VN)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发L5178Y细胞tk+/-基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC％).结果 Ames 试验,50、100 μl/皿剂量组在加入磷酸缓冲液或S9混合液后略有沉淀产生,并对TA100、TA1535、WP2 uvrA产生不同程度的抑菌作用,无抑菌剂量诱发五株菌的回变菌落数对比DMSO溶媒(阴性)对照组,均无明显增加；MLA,各浓度组在三种处理条件下诱发的MF、SC％与其溶媒(阴性)对照组比较,无明显增加(P＞0.05).结论本实验条件下,骨水泥对测试菌株h/s/trp无明显诱变作用,对测试细胞tk+/-及染色体无明显损伤作用.
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Ames试验与MLA试验检测两味含马兜铃酸中药的致突变性
背景与目的:检测单味马兜铃及复方龙胆泻肝丸的遗传毒性.材料与方法:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames test)检测含马兜铃酸的两味单、复方中药的细菌回复突变率;采用96孔微孔板接种法进行小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验(mouse lymphoma assay,MLA),经单、复方含马兜铃酸浓度5 μg/ml对L5178Y/tk(+/-)-3.7.2c细胞进行染毒,分别测定其接种效率(PE),相对总增长率(RTG)和突变频率(MF).结果:Ames试验结果为阴性,而小鼠淋巴瘤试验显示单味马兜铃具有一定细胞毒性并诱导tk基因突变,产生突变集落;而复方龙胆泻肝丸未诱发tk基因突变.结论:受试的单味马兜铃具有一定的遗传毒而复方龙胆泻肝丸具有对马兜铃的减毒效应.
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蔡司多功能护理液的遗传毒性研究
目的:检测医疗器械境外注册产品蔡司多功能护理液的遗传毒性.方法:以蔡司多功能护理液产品原液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在代谢活化和非代谢活化(±S9)条件下检测其遗传毒性.Ames试验采用平板掺入法,检测每皿50、100、200μl 3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌WP2uvrA的回变菌落数；MLA采用微孔法检测终浓度2.5％、5％、10％(Ⅴ/Ⅴ)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h 3种处理条件下诱发的L5178Y细胞tk+/-突变频率(MF)和小集落突变百分率,在-S9/24 h处理条件下追加检测0.5％、1％、2％(Ⅴ/Ⅴ)3个浓度.结果:与氯化钠注射液阴性对照组相比,每皿50、100、200μl 3个剂量组诱发上述5株菌的回变菌落数,均无明显增加(P＞0.05)；在-S9/24 h处理条件下,2.5％浓度组诱发的MF值远超出阳性判定数值,相对总生长率(RTG)仅为3％,2％浓度组的RTG升至16％,诱发的MF与阴性对照组比较虽有增加(P＜0.01),但未达到阳性判定标准.结论:蔡司多功能护理液对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,但在-S9/24 h处理条件下可导致tk+/-基因突变频率增加,是否与其细胞毒性有关尚待进一步阐明.
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五味子水煎剂的遗传毒性研究
背景与目的:采用小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)和小鼠骨髓微核试验(MNT)研究五味子水煎剂的遗传毒性.材料与方法:在MLA中,设五味子0.97、1.94、3.88、7.77 mg/ml(生药)等4个浓度组,在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下处理L5178Y细胞3 h, 表达2 d,制备基因突变频率平板并培养12 d,计数含大、小突变细胞集落的孔数,计算基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%);在MNT中,设3.13、6.25、12.50 g/kg(生药)3个剂量组,每组10只ICR小鼠,雌雄各半,间隔24 h实施2次小鼠灌胃给予五味子水煎剂,制作骨髓涂片,计数每只小鼠2 000个嗜多染红细胞中含微核的嗜多染红细胞数(MNPCE),计算每组动物嗜多染红细胞微核率. 结果:在-S9条件下,7.77 mg/ml(生药)浓度组诱发的MF是阴性对照组的2倍以上(P<0.01),SC%随五味子浓度增加而升高. +S9条件下的各浓度组诱发的MF存在剂量.反应关系,7.77 mg/ml(生药)浓度组的MF明显增加(P<0.01),其MF、SC%与阳性对照组相近;五味子水煎剂各剂量组未显示骨髓抑制作用,所诱发的微核率与阴性对照组比较未见明显增加(P>0.05).结论:五昧子水煎剂在+/-S9条件下均可诱发L5178Y细胞tk位点突变并导致染色体损伤,提示对人体具有潜在的遗传毒性;但对小鼠骨髓细胞染色体无损伤,经体内代谢活化后未显示遗传毒作用.
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育发剂致突变性2种试验方法的比较
背景与目的:探讨检测育发剂致突变性的适宜的方法.材料与方法:运用Ames试验、小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)对3种育发剂的致突变性进行研究.结果:28种育发剂中有85.72%的样品对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌均有程度不同的抑菌或杀菌作用,选取的3种育发剂对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌均有较强的抑菌杀菌作用,在试验浓度下均未呈现致突变性;MLA试验结果显示,1号样品和3号样品育发剂在测试浓度下未呈现致突变性;2号样品育发剂随浓度增大,L5178Y细胞TK位点的突变频率有升高的趋势,其中8 μl/ml、40 μl/ml和200 μl/ml剂量组的突变率,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)可做为毒性较大育发剂的遗传毒性筛检的补充试验.
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小鼠淋巴瘤细胞突变试验方法
小鼠淋巴瘤细胞突变试验(简称小鼠淋巴瘤试验或MLA)是国际上较常应用的遗传毒性试验常规方法,有关该试验方面的报道在国内不常见,本文对该试验方法作了较为具体介绍,仅围绕该试验的96孔板法(microwell or microtitre)展开论述,具有较好的可操作性.
