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鼠疫耶尔森菌caf1M基因的克隆表达及其产物免疫学评价

王鹏;石国祥;程苏云;王海滨;俞东征;张建中

摘要: 目的 原核表达有免疫学活性的重组caf1M蛋白(rEaf1M),并以此建立检测鼠疫抗体的辅助诊断方法.方法 将去掉信号肽编码序列的caf1M基因片段与载体pGEX4t-1通过Nco Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点进行连接,构建重组质粒caf1M-pGEX4t-1;将caf1qM-pGEX4t-1转化入E.coli BL21(DE3)中诱导表达;表达产物rlCaf1M经亲和层析进行纯化;以纯化rCaf1M及天然F1抗原喷制鼠疫抗体双检测NC膜,并以浙江各6份F1抗体阳性及阴性人血清标本进行应用评价.结果 含有重组质粒caf1M-pGEX4t-1的BL21,经诱导产生了分子量约为55×103的rCaf1M融合蛋白;rCaf1M融合蛋白与鼠疫菌免疫血清有较好反应;在浙江人血清标本的检测中,rCaf1M与F1抗体阳性者有明显反应,与F1抗体阴性者无反应.结论 本研究制备的rCaf1M,与鼠疫菌免疫血清具有良好的免疫反应性,该rCaf1M可用于鼠疫辅助免疫学检测.

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