附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化
摘要： 目的 构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化.方法 本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定.大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析.结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4h时高,约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白.结论 成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础.
-
不孕症妇女应对方式的影响因素研究进展
本文对不孕症妇女应对方式的性别、病程、生育压力、负性情绪、社会支持、婚姻调适、心理弹性这7个因素影响加以综合阐述,但众多影响因素之间的相互关系还需进一步探讨.
-
TGF-β信号通路在骨关节炎中的调控作用
TGF-β超家族包括TGF-β和BMPs等成员,骨形经典的TGF-β信号通路通过TGF-β信号分子激活膜受体后经R-Smads与Smad4形成复合物进入细胞核内调节靶基因,调节细胞的增殖、分化、细胞外基质的合成、移动以及机体的免疫功能等生物学作用.TGF-β能抑制软骨细胞终末分化,而BMP能促进软骨细胞的肥大化,引发骨关节炎,因此了解清楚TGF-β信号通路的各个环节及调节对于疾病的治疗有极大的帮助.
-
A20基因与NF-κB信号通路的研究进展
NF-κB信号通路在慢性炎症中发挥着重要作用,在受到炎症因子的刺激下能够活化,加重炎症反应.NF-κB信号通路受到多种细胞因子的调控,A20基因作为NF-κB信号通路的一个负向调节因子,通过影响NF-κB信号通路中的某些基因,发挥炎症抑制作用,与某些炎症相关疾病的发生发展密切相关.
-
大骨节病病因及发病机制研究进展与展望
大骨节病是一种病因与发病机制未明、致残率极高的地方性骨关节病.近年来多项研究成果对其原有的低硒学说、水中有机物中毒学说、毒素中毒学说等假说做出了补充与更新,尤其是在分子生物学领域有了更多突破性进展.本文就现有的大骨节病的病因与发病机制研究成果做一综述.
-
Runx2在骨形成中的作用及调控
正常情况下,骨形成和骨吸收处于动态平衡.Runx2(runt-related transcription factor 2)是骨发育过程中重要的转录因子,对成骨细胞的分化、软骨细胞成熟、破骨细胞的分化及细胞外基质的分泌都有重要的调控作用.因此,研究Runx2基因的表达调控、传导通路十分必要,对治疗骨代谢疾病具有重要意义.本文将从Runx2的结构功能和表达调控对成骨细胞的影响进行阐述.
-
遗传与表观遗传及其相互作用在大骨节病中的研究进展
大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)是一种地方性、慢性骨关节病,致残率很高,严重危害人民健康,至今病因未明.目前研究表明,该病发病与环境因素相关,近年来有关大骨节病遗传、表观遗传学及其相互作用成为研究热点.本文从遗传,表观遗传及其相互作用方面对大骨节病近年来的研究进展进行综述,旨在为进一步探索大骨节病的发病机制提供参考依据.
-
高原红细胞增多症的研究进展
高原红细胞增多症是常见的一种慢性高原病,多在海拔3 000 m以上地区发病,严重危害着高原人群的身体健康.近年来,国内外对高原红细胞增多症发病率、发病机制、治疗、预防等方面做了较多的研究,现就其相关研究进展阐述如下.
-
高原性痛风的研究进展
高原痛风是由高尿酸血症引发的一种慢性的关节炎性疾病,受遗传因素和环境因素共同作用.在遗传因素中ABCG2、PDK2、SLC2A9、ZNF518B、WDR1和CLNK基因与高原痛风密切相关.本文总结了高原痛风的流行病学特点、发病机制、临床特征以及西药和藏药的治疗方法,以促进人们对高原性痛风的认识与理解.
-
硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展
硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)是维持机体稳态重要屏障的抗氧化系统成员.近年来,TrxR1相关信号通路的研究逐步受到关注.因此,本文将从硫氧还蛋白系统着手,对TrxR1及其相关信号通路的研究进展进行阐述,以期为TrxR1在疾病中的作用机制阐明提供新思路.
-
黄芪活性成分抗肿瘤研究进展
黄芪是一种传统的中草药,具有抗肿瘤作用,其活性成分主要包括多糖、皂苷和黄酮等.近年来关于黄芪抗肿瘤的研究日益增多,本文主要对黄芪活性成分影响的VEGF/MMP信号通路与抗血管生成、PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的抗肿瘤作用进行阐述,进而对黄芪及其活性成分抑制癌细胞增殖、侵袭和转移,诱导癌细胞凋亡等方面的影响及相关分子研究进行简要综述,以期对进一步探究黄芪活性成分抗肿瘤机制提供科学依据.
