DXA测量用校准脊椎体模的研制及临床测试

目的研制一种性能可靠的DXA测量用校准(cross-calibeation)及质量控制脊椎体模,并进行体模临床测试.方法经过固体水、骨体模材料和整体组合3个研制阶段,制成羟磷灰石质量控制体模1个,并在LUNAR公司生产的4台不同型号DXA仪器上对该体模进行临床测试.结果4台DXA仪器中,以Expert扇束仪的骨密度(bone mineral density,BMD)、骨矿含量(bone mineral content,BMC)和面积(Area)的准确度误差较大,其他3台(窄扇束Prodigy和2台笔束仪)误差较小;所有仪器的3个指标中以BMD误差较小(-15.4%～11.5%),其中以Prodigy型的BMD误差小;BMD测量值高端误差小偏正值,低端误差大偏负值,在校准中用同时照顾两端差异的回归方程校准为好.25 d测量25次作精确度误差基线优于1 d测量25次者,精确度误差以1 d测量25次的变异系数(CV)小(0.0043),12例成人测量的CV大(0.0078).结论该体模可用于不同DXA仪器的质量控制和校准.

人乳头瘤病毒16型E6E7基因协同共激活分子B7-1基因免疫诱导的特异性免疫反应

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humsan papillomavirus type 16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗.方法将用PCR法扩增获得fmE6E7基因插入真核表达质粒pVR1012中获得pVR1012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光组织化学法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠肌肉内进行pVR1012-fmE6E7单独免疫,或与小鼠共激活分子B7-1基因真核表达质粒(pcDNA3.1-B7-1)联合免疫.51Cr释放法分析免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)活性,间接ELISA法检测小鼠血清中E7特异性抗体.用5×105个C3细胞皮下接种C57BL/6小鼠,分析小鼠体内诱发的特异性抗瘤免疫水平.结果修饰后的E6E7基因免疫可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,小鼠B7-1基因与fmE6E7联合免疫可显著提高特异性CTL活性,并可保护33%(2/6)的小鼠免受C3肿瘤细胞的攻击,而单独fmE6E7基因免疫则不能抑制C3瘤细胞的生长,联合B7-1基因免疫对诱发的抗体水平无加强作用.结论中国山东地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的构建,B7-1基因协同免疫可提高疫苗的细胞免疫水平,利用B7-1基因作为HPV16 DNA疫苗的协同因子具有重要价值.

降钙素受体基因多态性与上海地区妇女骨密度的关系

目的探讨降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)基因多态性与绝经前和绝经后妇女骨密度(bonemineral density,BMD)之间的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法,对上海地区184名绝经前和199名绝经后妇女进行CTR基因型的检测.应用双能X线骨密度仪(dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA)测定腰椎和股骨颈BMD.结果383名上海地区妇女CTR基因型频率分布依次为CC型占83.8%,TC型14.6%,TT型1.6%.在绝经后妇女组,CC型的股骨颈BMD明显高于TC和TT型(P＜0.01),而在绝经前组不同基因型的各部位BMD无差别.多元逐步回归分析提示,CTR基因型与绝经后妇女股骨颈BMD相关(P＜0.05).结论CTR基因多态性与绝经后妇女BMD存在一定的关联.

脂多糖致衰老大鼠急性肺损伤及心肌组织ATP酶等的变化

目的观察给衰老大鼠静脉或左心室内注入脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)后,是否发生急性肺损伤(acute lung injury ,ALI)以及心肌组织ATP酶等的改变情况.方法雄性Wistar大鼠40只复制成衰老模型.然后随机分成对照组(静脉注射生理盐水,n＝8),ALI组(静脉注射5 ng/kg体重LPS,n＝16),及LPS组(左心室内注入相同剂量LPS,n＝16).注射后2 h或6 h收集血并取肺、心.制备肺、心组织匀浆.测肺湿/干重量比,用比色法测定蛋白、乳酸(LA)、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性.结果ALI组大鼠在静脉注射LPS后2 h,肺泡灌洗液中蛋白含量及肺湿/干重量比显著升高(P＜0.01);血中LA、NO2-/NO3-和MDA含量也显著升高(P＜0.01);同时,肺组织中NO2-/NO3-含量显著升高(P＜0.01),而GSH-Px及Na+-K+-ATPase活性均显著下降(P＜0.01).上述变化持续至注射后6 h时.但在心肌组织中,直至注射LPS后6 h才出现MDA含量的显著升高(P＜0.01),和GSH-Px、Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性的显著下降(P＜0.01).而在LPS组,注射LPS后2 h的血和2 h、6 h时的肺组织NO2-/NO3-含量均显著升高(P＜0.05);注射后2 h时肺组织中Na+-K+-ATPase活性显著下降(P＜0.05).其它指标无显著改变.结论给衰老大鼠静脉注射5 mg/kg体重的LPS后2 h、6 h已形成明显的ALI,6 h时心肌组织ATP酶等活性显著下降.左心室内注射同样剂量的LPS未引起上述指标的显著变化,提示ALI组大鼠可能有心肌受损,其原因可能主要与ALI诱导有关.

G蛋白对阿片受体调节延迟整流钾通道的影响

目的观察G蛋白在阿片受体激动剂对钾通道的双相调节中所起的作用.方法利用膜片钳技术(patch clamp),采用全细胞记录方式,观察在电极液中分别加入G蛋白稳定抑制剂(GDPβS)、百日咳毒素(PTX)、二磷酸核苷酸激酶(NDPK)及环磷酸腺苷(cAMP)后,对阿片受体激动剂调节NG108-15细胞膜延迟整流钾通道作用的影响.结果(1)GDPβS能够阻断高浓度δ-阿片受体选择性激动剂(DPDPE)对钾电流的兴奋作用及低浓度DPDPE对钾电流的抑制作用(P＜0.05).(2)高浓度DPDPE对钾电流的兴奋性调节作用完全被PTX阻断(P＜0.05),而霍乱毒素CTX对DPDPE对钾电流的双相调节作用无影响.(3)尿苷二磷酸(UDP)能够阻断NDPK对高浓度阿片受体激动剂对细胞膜钾通道兴奋性调节作用,而UDP对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响.(4)cAMP对高浓度阿片受体激动剂具有调节作用(P＜0.05),而对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响.结论阿片受体对NG108-15细胞膜上延迟整流钾通道具有双相调节作用,其中高浓度激动剂引起的兴奋作用可能由Gi/o介导,并与cAMP有关,而其抑制作用可能是由G蛋白βγ亚单位直接作用.

RSD-7的克隆及其在睾丸组织中的定位

目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制.方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northern blot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术.结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7.全长1 238 bp,编码232个氨基酸,GenBank接收号为AF315467.序列分析显示,RSD-7基因编码蛋白质含有1个Ubiquitin-1ike结构域.(2)Northern blot结果显示,在8种成鼠组织中,RSD-7基因仅在睾丸组织中有明显表达.不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northern blot结果显示,出生后30 d的大鼠RSD-7基因开始表达,一直到120 d仍有表达.(3)RSD-7 cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了GST-RSD-7融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗RSD-7蛋白的多克隆抗体.(4)通过免疫组织化学方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli细胞胞浆和质膜上.结论初步分析了RSD-7基因的表达特征并制备了抗RSD-7多克隆抗体,为进一步研究RSD-7蛋白在精子发生过程中的功能提供了条件.

上段食管癌SIB-IMRT治疗计划比较

目的对上段食管癌实施同时整和加量调强放射治疗(simultaneous integrated boost intensity-modulatedradiation therapy,SIB-IMRT)计划,研究肿瘤及预防照射区的剂量分布情况和危及器官受量,并比较不同照射野数目对剂量分布的影响.方法对2例上段食管癌的原发灶和预防照射区进行SIB-IMRT计划设计.定义2个靶区:PTV1为需要加量照射的原发灶靶区,给予67.2 Gy;PTV2为预防照射区,给予50.4 Gy的剂量.设计4个计划,采用共面、360度范围等角度分布的照射野,野数分别为3、5、7、9,4个计划使用相同的剂量-体积约束条件进行逆向优化.比较这4个计划的剂量分布、剂量体积直方图(dose volume histogram,DVH)、适合度指数等指标.结果3个调强照射野即可使2个靶区获得满意的剂量分布.随着照射野数目的增加,靶区剂量均匀性、适合度指数提高,危及器官受量减小.当照射野数由7增加到9时,剂量分布没有改善.结论5～7个调强照射野即可使上段食管癌的同时整和加量(simultaneous integrated boost,SIB)治疗获得理想的剂量分布.原发肿瘤可以获得比常规分割高的等效剂量.共面、等角度分布的照射野设计简单、效率高.SIB-IMRT治疗的疗效还有待于临床的结果.

维生素D受体基因ApaⅠ多态性与男性骨量的关系

目的了解维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因Apa Ⅰ多态性与男性骨量的关系.方法PCR-限制性片段长度多态性技术检测上海市388例健康汉族男性VDR基因Apa Ⅰ多态性,并用双能X线吸收仪检查上述人群腰椎1-4(L1-4)和股骨近端股骨颈(Neck)、大转子区(Troch)及Ward′s三角部位骨密度(bone mineraldensity,BMD)和骨矿含量(bone mineral content,BMC).结果ApaⅠ多态性等位基因频率分布符合Hardy-weinberg定律,基因型频率分布依次为aa(48.1%)、Aa(44.2%)和AA(7.7%).协方差分析显示,在所有388例受试者中和160例60岁及以下亚组中,Apa Ⅰ基因型与L1-4和股骨近端各部位BMD、BMC值均无相关性;在228例60岁以上亚组中,Apa Ⅰ基因型与L1-4、Neck和Ward′s三角部位BMD、BMC值均相关(P＜0.05,P＜0.01),AA基因型平均BMD、BMC值高于Aa和aa基因型(P＜0.05,P＜0.01),但是Apa Ⅰ基因型与Troch部位BMD和BMC值无相关性.结论VDR基因Apa Ⅰ多态性与60岁以上男性骨量相关,AA基因型具有较高的骨量,提示Apa Ⅰ多态性可能影响老年男性的松质和皮质骨骨量的丢失.

不同剂量维生素E对慢性间断性缺氧大鼠记忆能力及脑内单胺类神经递质的影响

目的探讨不同剂量维生素E(Vitamin E,VitE)对慢性间断性缺氧(chronic episodic hypoxia,EHYP)大鼠记忆能力和脑内单胺类神经递质水平的影响.方法建立EHYP大鼠模型,并给予大(每天50IU/250 g体重)、小(每天5 IU/250 g体重)剂量VitE干预.通过被动避暗回避反应试验评价大鼠学习记忆能力,潜伏期(stepthrough latency,STL)越长,记忆能力越强;用高效液相色谱电化学检测器(high performance liquid chromatographyand electrochemical detection,HPLC-ECD)测定大鼠皮层、海马和纹状体内单胺类神经递质的含量.结果EHYP处理后,与对照组相比,EHYP组大鼠STL明显缩短(P＜0.01),各脑区单胺类神经递质水平均显著降低(P＜0.05).药物干预后,与EHYP组相比,VitE大、小剂量组大鼠STL均显著延长(VitE大剂量组:P＜0.05,VitE小剂量组:P＜0.01),但大剂量组大鼠STL明显短于小剂量组(P＜0.05);就单胺类神经递质水平而言,小剂量组大鼠皮层去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、多巴胺(dopamine,DA)含量,海马NE、DA、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量和纹状体NE、DA、5-HT含量均显著升高(P＜0.05),而大剂量组大鼠仅纹状体NE、DA、5-HT和海马5-HT水平显著升高(P＜0.05).结论VitE可改善EHYP大鼠记忆能力,并提高脑内单胺类神经递质水平,且小剂量疗效优于大剂量.

重组人甲状旁腺激素(1-34)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用

目的观察重组人甲状旁腺激素(1-34)[recombinant human parathyroid hormone(1-34),rhPTH(1-34)]对卵巢摘除(ovariectomy,OVX)大鼠骨质疏松的治疗作用.方法选用雌性6月龄SD大鼠100只,80只行双侧卵巢摘除,3个月后诱发骨质疏松模型.rhPTH(1-34)治疗分为5、10、20、40μg/kg剂量组,每组10只,每日皮下注射1次,每周6次.并设OVX+鲑鱼降钙素治疗(15 IU/kg,隔日皮下注射1次)和阿伦膦酸钠治疗(10 mg/kg,每日灌胃1次)对照组,每组10只.以OVX和手术不摘卵(Sham)组各10只为对照,治疗观察3个月.以骨干重、灰重,骨密度,股骨三点弯曲载荷,腰椎压缩载荷,骨小梁面积、矿化沉积率和血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、钙、磷,尿吡啶啉/肌酐(urinary yridinoline/creatin,Pyd/Cr)等指标观察rhPTH(1-34)的治疗作用.结果卵巢摘除3个月后血清E2、子宫湿重和骨量、骨生物力学性能较Sham组明显下降,表明OVX大鼠骨质疏松模型建立.rhPTH(1-34)5～40μg/kg剂量治疗组骨量、骨生物力学性能和骨小梁面积、矿化沉积率明显增高,骨病理形态改善,小剂量治疗组血ALP和尿Pyd/Cr值增加.结论rhPTH(1-34)5～40μg/kg每日1次皮下注射对OVX大鼠骨质疏松有明显治疗作用.

增龄对大鼠骨髓基质细胞分化的影响

目的对比研究3、6、9、12个月龄大鼠的骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)成骨与成脂肪能力的变化.方法培养液中分别加入成骨、成脂肪诱导剂,在不同时间行细胞化学染色观察3和12个月龄两组大鼠MSCs的成骨与成脂肪能力的变化;采用RT-PCR法分别检测3、6、9、12个月龄大鼠的MSCs的Ⅰ型胶原mRNA和脂蛋白脂酶mRNA水平的变化.结果成骨诱导1周后,12个月龄大鼠的MSCs对照与诱导组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达阳性率均低于3个月龄大鼠的同组细胞.成骨诱导12 d后,3个月龄大鼠组的MSCs先于12个月龄大鼠组形成钙化.成脂肪诱导第2天,12个月龄大鼠组的MSCs先于3个月龄大鼠组MSCs生成脂滴.RT-PCR检测显示Ⅰ型胶原mRNA水平随月龄增长表达降低,且随诱导时间延长降低幅度变大;脂蛋白脂酶的mRNA水平随月龄增长表达增加,随诱导时间延长增加幅度变大.结论大鼠的MSCs随月龄增长成骨能力降低,成脂肪能力增强.

影像数字化测定法观察日本正常妇女指骨骨密度的变化

目的用影像数字化测定法观察日本正常妇女指骨和掌骨骨密度(bone mineral density,BMD)之间的相互关系,及其随年龄和绝经而变化的规律.方法以345名年龄在25～81岁之间的日本正常妇女为研究对象,采用影像数字化测定法测定其非优势侧手的近侧指骨和掌骨的BMD,及指骨和掌骨的指数.结果当年龄大于50岁时,掌指骨的BMD及指骨和掌骨的指数均呈显著下降,且绝经后组与绝经前组相比差异有显著性(P＜0.01).近侧指骨和掌骨的BMD年减少率分别为0.69%和0.74%,两者相比差异无显著性(P＞0.05),且指骨与掌骨的BMD间具有较好的相关性(r＝0.77,P＜0.01).结论绝经后松质骨和皮质骨均存在骨量加速丢失的现象,近侧指骨的BMD测定和掌骨的BMD测定一样具有筛选骨质疏松患者的作用,影像数字化测定法在筛选骨质疏松症方面具有潜在的应用价值.

绝经前健康妇女的身体组成成分与骨密度的关系

目的探讨fat mass和lean mass对绝经前健康妇女骨密度的影响程度.方法在绝经前的健康妇女中,用双能X线骨密度仪测定腰椎、股骨近端和全身骨密度以fat mass和lean mass,并测量身高、体重、腰围、臀围,计算体重指数(body mass index,BMI)和腰臀比.结果fat mass是决定BMI的主要因素;BMI和lean mass与L2-4、股骨近端和全身骨密度呈正相关(P值均＝0.000);多元逐步回归分析显示,只有lean mass才是决定L2-4(标准偏回归系数β＝0.282,P＝0.000)、股骨近端(β＝0.336,P＝0.000)和全身骨密度(β＝0.361,P＝0.000)的独立影响因素;在控制年龄因素的基础上控制lean mass后,BMI与骨密度的相关性提高,而控制lean mass后,BMI与骨密度的相关性减弱,甚至消失.结论lean mass是决定绝经前健康妇女骨密度的重要因素.

1%毛果芸香碱脂质体滴眼液对兔眼的缩瞳作用

目的对比研究1%毛果芸香碱脂质体滴眼液与1%毛果芸香碱滴眼液对兔眼的缩瞳作用.方法家兔18只,随机分为实验组、阳性对照组、阴性对照组.实验组应用1%毛果芸香碱脂质体滴眼液,阳性对照组应用1%毛果芸香碱滴眼液,阴性对照组应用空白脂质体滴眼液.各组家兔左眼滴入滴眼液,右眼滴入生理盐水作为空白对照,分别在给药前,给药后0.25、0.5、1、2、3、4、5、7 h测量瞳孔直径.结果3组滴药前瞳孔直径左右眼比较,差异无显著性(P＞0.05).滴药后0.25h,阳性对照组缩瞳作用大(P＜0.01),滴药1 h瞳孔开始散大,滴药后5 h差异无显著性(P＞0.05);实验组滴眼后0.5 h瞳孔小(P＜0.01),3 h瞳孔开始散大,7 h差异无显著性(P＞0.05);阴性对照组在观察的7 h内无差异(P＞0.05).结论1%毛果芸香碱脂质体滴眼液具有缓慢释药,延长作用时间的优点.

下肢旋转角度对髋部骨密度测量的影响

目的通过对下肢不同旋转角度下的髋部骨密度(bone mineral density,BMD)的测量,了解下肢旋转角度的变化对髋部BMD测量的影响.方法选择40例女性,平均年龄60.7岁(45～85岁),平均身高161.8 cm(150～175 cm),平均体重67.4 kg(48～80 kg).进行机器质量控制后,在下肢中立位、15°内旋、30°内旋状态下分别测量髋部BMD,每一角度测量后,均要求受试者下测量床,然后再重新上测量床摆体位.分析比较不同旋转角度下的髋部BMD变化.结果随着下肢旋转角度的改变,髋部BMD测量值均有明显的变化.其中在Ward′s三角区域和股骨粗隆区域的BMD变化明显大于股骨颈BMD改变.从中立位到15°内旋及15°内旋到30°内旋时,股骨颈、Ward′s三角和股骨粗隆BMD值均有显著变化(P＜0.01).而从中立位到30°内旋时,髋部BMD值增高,但其相关系数较低(r＝0.3 6～0.4,P＞0.05).结论髋部BMD测量的精度明显受下肢旋转角度变化的影响;富含松质骨区域的BMD改变更易受下肢旋转角度变化的影响;良好的测量前定位和下肢固定,对提高髋部测量精度具有重要意义.

AP-1在血管内皮细胞PAI-1表达中的作用

目的研究核转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、弱氧化修饰低密度脂蛋白(minimal modified low density lipoprotein,mmLDL)诱导血管内皮细胞PAI-1基因表达中的转录调控机制.方法进行人脐静脉内皮细胞(human vascular endothelial cells,HUVECs)的培养和鉴定.采用基因重组技术,构建4个含人PAI-1基因不同长度5′上游序列的荧光素酶报告基因质粒,并结合瞬时转染分析实验,初步确定PAI-1基因上游具有调控作用的是位于-823到-553之间的AP-1元件.为进一步确证AP-1元件的调控作用,采用PCR法对该元件进行定点突变.结果TNF-α能明显诱导构建质粒pGL3-PAI-1-823/+90荧光素酶的表达,但对质粒pGL3-PAI-1-823/+90的3个突变体诱导作用明显降低;mmLDL也能明显诱导质粒pGL3-PAI-1-823/+90荧光素酶表达,但对质粒pGL3-PAI-1-823/+90的3个突变体的诱导作用不明显.结论在TNF-α、mmLDL作用下,内皮细胞转录表达PAI-1基因过程中,3个AP-1元件起着重要的作用.

表达戊型肝炎病毒ORF2蛋白的重组腺病毒构建及其经粘膜途径免疫小鼠

目的构建可表达戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2蛋白(112-660aa)的重组腺病毒Adasy-EORF2,探讨其经鼻腔和腹腔免疫小鼠后,诱导机体产生特异性体液免疫和粘膜免疫应答的能力,为研制戊型肝炎疫苗探索新的途径.方法经PCR扩增编码ORF2蛋白(112-660aa)的基因片段,将其连接于重组腺病毒Adasy系统的穿梭质粒pTrack-CMV上,与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化宿主菌BJ5183,经细菌内同源重组获得重组腺病毒基因组质粒,转染293细胞以产生、扩增重组腺病毒.将重组腺病毒以107pfu的剂量经鼻腔和腹腔免疫小鼠,通过ELISA检测血液IgG和粘膜IgA的应答情况.结果重组腺病毒经鼻腔免疫小鼠后可刺激机体产生特异性IgA、IgG免疫应答,IgG高滴度达1:1000.经腹腔免疫可刺激小鼠产生IgG免疫应答,高滴度可达1:10000,未检测到明显的IgA应答.结论表达HEV ORF2蛋白的重组腺病毒能刺激机体产生有效的免疫应答,具有成为新型戊型肝炎疫苗的潜力.

免疫重建SCID小鼠B淋巴母细胞瘤模型的建立

目的在免疫重建的严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficient,SCID)小鼠体内建立人的B淋巴母细胞瘤模型.方法将SCID小鼠随机分为4组,每组7只,分别为:(1)实验组:在每只SCID小鼠的腹腔内接种人外周血单个核细胞(peripheral-blood mononuclear cells,PBMC)1周后,腹腔接种EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)悬液;(2)不经任何处理的SCID小鼠对照组;(3)腹腔接种人PBMC的SCID小鼠对照组;(4)腹腔接种EBV悬液的SCID小鼠对照组.每日观察小鼠的健康情况,于免疫重建的第5周解剖各组小鼠,观察腹腔各脏器的肿瘤形成情况,并用HE染色、组织化学以及PCR方法鉴定所长肿瘤的特性.结果4周后,在接种EBV的免疫重建SCID小鼠的腹腔中可形成(35±12.5)mm3大小的肿瘤,多位于肝脏,而对照组均未见有肿瘤生长;HE染色表明,所长的肿瘤均为高分化的B淋巴母细胞瘤;组织化学实验表明,肿瘤细胞均可表达CD19、CD20、CD45RA分子和EB病毒编码的蛋白;PCR检测显示,肿瘤组织的DNA在269 bp处出现特异的EBV扩增条带.结论成功建立了免疫重建SCID小鼠的人B淋巴母细胞瘤模型,为研究人类肿瘤免疫提供了一个理想的动物模型.

人凝血酶敏感蛋白1抗血管生成活性片段重组腺病毒高效制备

目的构建人凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)抗血管生成片段重组腺病毒.方法采用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增编码TSP1抗血管生成活性片段(TSP1f)的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV上,以线性化重组穿梭载体与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组并酶切鉴定筛选正确重组子,用线性化重组质粒转染人胚肾293细胞,制备重组腺病毒ADV-TSP1 f,后以PCR及Western blot方法鉴定TSP1抗血管生成片段的表达.结果细菌内同源重组共获得43个卡那霉素抗性克隆,经酶切鉴定表明其中直径小的10个均为正确重组子,该重组质粒转染293细胞所获得的重组腺病毒可高效表达TSP1抗血管生成片段,纯化后病毒滴度为1.0×1011 pfu/mL.结论细菌内同源重组法构建重组腺病毒高效快捷,所获得的ADV-TSP1f可进一步应用于抗肿瘤血管生成的基因治疗研究.

原发性甲状旁腺功能亢进症患者术前病变甲状旁腺定位方法的评估

目的评价锝[99mTc]甲氧基异丁基异腈(99mTc-MIBI)显像及颈部超声对原发性甲状旁腺功能亢进症(primary hyperparathyroidism,pHPT)患者在手术前进行病变甲状旁腺定位的敏感性和应用价值.方法对本院1983年6月到2002年6月期间收治的160例pHPT患者进行术前99Tc-MIBI显像检查和/或颈部超声检查.其中,男性53例(33.1%),女性107例(66.9%),平均年龄为(38.9±14.8)岁;100例接受99mTc-MIBI显像检查,148例进行高分辨率颈部超声检查.检查结果与手术所见和病理学进行比较.结果99mTc-MIBI显像和颈部超声对病变甲状旁腺定位的敏感性分别为94.0%和85.1%,阳性预测值分别为100%和89.1%,联合2种检查总的敏感性可达98.9%;在单个甲状旁腺病变组(n＝145)中,99mTc-MIBI显像的敏感性为93.3%,颈部超声的敏感性为84.7%;甲状旁腺病变异位患者进行99mTc-MIBI显像的检测敏感性达100%,但是应用超声检测敏感性为56.3%.结论99mTc-MIBI显像和颈部超声对pHPT具有不同的敏感性,2种检查方法联合应用可以使敏感性增加.甲状旁腺异位对99mTc-MIBI显像的敏感性无影响,但是会使超声的敏感性下降,肿瘤大小影响超声检查敏感性,并且观察到99mTc-MIBI假阴性的各种原因,对于99mTc-MIBI检查阴性者应该排除可能的干扰因素.

维生素K与骨质疏松

维生素K与骨质疏松关系密切,可通过酶的机制影响谷氨酸γ-羧基化骨钙素的合成和分泌,促进骨形成,抑制骨吸收,提高骨量.此外,维生素K还可能通过影响肾钙素及IL-1、IL-6,调节钙平衡,间接影响骨代谢.大量流行病学研究及临床干预试验证实,维生素K不仅可以增加骨质疏松患者骨密度,而且可以降低其骨折发生率,促进骨健康.但维生素K应用于临床防治骨质疏松症尚需进一步探讨,目前美国医学会将饮食中维生素K摄入量参考值标准提高了50%,即19岁以后女性为90μg/d,男性为120μg/d.

应用激素补充治疗预防绝经后骨质疏松症的一些问题

雌激素降低是绝经后骨质疏松症的主要发病因素,外源性雌激素可以预防绝经后骨丢失,从而预防绝经后骨质疏松症及骨质疏松性骨折.雌激素控制绝经症状也是其他药物不能取代的.但长期应用雌激素的安全性问题应予重视.应用前应权衡利弊,个体化选用.

类固醇激素与骨

人体骨骼需不断进行骨重建以维持骨骼的完整性和强度.类固醇激素在骨骼的生长发育和骨重建方面起重要的作用.体内糖皮质激素过多会导致以骨质疏松为主的骨骼损害,而雌激素和雄激素则可对骨骼起保护作用.开发选择性类固醇激素受体调节剂有望成为未来防治骨质疏松药物的研究方向.

人类胚胎心脏体外培养初获成功

目前,心血管疾病的发病率和死亡率居高不下,已成为威胁人类健康的头号杀手;学者们为探索和寻找有效的防治措施,已成功地建立了人和动物的心肌细胞培养技术,从而能在细胞水平上构建心脏的生理、病理、药理和毒理等模型,研究心脏的发生、发育和分化,治疗药物的开发、筛选,心肌组织工程和心肌细胞移植治疗等.

垂体腺瘤术后低钠血症

目的探讨垂体腺瘤术后低钠血症的相关因素、发病机制和治疗.方法回顾性总结了1999年1月至2000年6月期间,在本院神经外科就诊的186例垂体腺瘤患者的临床资料.结果在186例患者中,有72例(38.7%)术后出现低钠血症.其中43例(59.7%,43/72)出现于术后4～7 d;43例(59.7%,43/72)有临床症状;低钠血症与年龄、肿瘤大小和肿瘤类型有关,与性别无关;68例(94.4%,68/72)患者被给予补钠和补充容量治疗,63例(87.5%,63/72)在7 d内缓解.结论垂体腺瘤术后低钠血症多出现于术后1周左右,多见于老年和垂体大腺瘤患者,治疗以补钠和补充容量为主.

蝶鞍区生殖细胞瘤的鉴别诊断和治疗

总结北京协和医院神经外科1991年3月至2002年1月间11例经术后病理证实为蝶鞍区生殖细胞瘤患者的临床资料.其中,男性2例,女性9例.平均年龄16.8岁,平均病程2.6年.临床表现为尿崩症11例,视功能障碍6例,生长发育迟缓5例,垂体功能低下5例.肿瘤大径≤3 cm 8例,＞3 cm 3例.MRI显示肿瘤为T1呈低或等信号8例.术中肿瘤呈紫红色或暗灰色.术后病理均证实为生殖细胞瘤,术后均进行放射治疗.随诊3个月至6年,肿瘤消失,术后尿崩症状改善9例,视功能障碍改善4例,但垂体功能低下和生长发育迟缓改善不明显.研究结果显示当年轻人出现尿崩症、垂体功能低下,影像检查发现蝶鞍区实质肿瘤边界不清时,应考虑蝶鞍区生殖细胞瘤,高度怀疑时采用试验性放射治疗可协助诊断.

RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associated coronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况.方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性.结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性.粪便SARS-CoV RT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性.结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32 d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视.

重症SARS患者的临床营养支持及血糖水平和胰岛素用量与结局的关系

目的观察重症SARS患者接受临床营养支持前后部分与营养有关指标的变化,并分析血糖水平/胰岛素用量与结局的关系.方法以我所英东重症医学监护中心收治的21例临床诊断重症SARS患者为研究对象,转入ICU后均给予呼吸支持及临床营养支持.经肠内营养接受的热量约4184KJ/d(1000 kcal/d),蛋白质约38 g/d;经肠外营养接受的热量约3347.2KJ/d(800kcal/d).监测给予患者肠内、肠外营养支持前后的血糖、血清白蛋白、血淋巴细胞总数及谷丙转氨酶等指标的变化.所有患者均接受甲基强的松龙约200 mg/d.为将血糖保持在4.44～7.78 mmol/L(80～140 mg/dl)的较低水平,应用静脉泵人胰岛素,记录血糖及胰岛素用量,再分析其与结局的关系.结果在发病(11.0±2.8)d后转入ICU的2l例患者中,16例(76.2%)伴有营养不良.经过平均12 d肠内与肠外营养支持后,患者血清白蛋白显著升高[(28.5±2.2)g/Lvs(37.0±4.1)g/L](P＝0.0001);血淋巴细胞总数升高[(0.74±0.47)×109/Lvs(1.22±0.73)×109/L](P＝0.02);血谷丙转氨酶升高的病例有所下降,但差异不显著(81.0%vs57.1%,P＝0.18);生存组血糖降至较低水平[(9.5±2.3)mmol/L vs(6.3±1.8)mmol/L](P＝0.0002);死亡组血糖也有下降[(13.0±3.3)mmol/Lvs(9.5±1.3)mmol/L](P＝0.04);生存组血糖水平低于死亡组[(6.3±1.8)mmol/Lvs(9.5±1.3)mmol/L](P＝0.002);血糖高于正常值的病例数生存组明显少于死亡组(26.7%vs100%,P＝0.008).在所有患者中,生存组患者的血糖较易维持,需要用胰岛素控制血糖的比例较低(18.8%),胰岛素用量较少(24±2)IU/d;而5例死亡患者的血糖不易维持,需要用胰岛素控制血糖的比例较高(80.0%),胰岛素用量较多(72±9)IU/d;两组比较,需要用胰岛素控制血糖的患者人数间差异有显著性(P＝0.03),胰岛素用量的差异也有显著性(P＝0.01).结论多数重症SARS患者合并营养不良.营养支持可能改善重症SARS患者部分与营养有关的指标.死亡组患者的血糖不易维持,死亡组患者的胰岛素用量明显大于生存组患者.本结果还有待更多病例的临床研究来检验.

严重急性呼吸综合征的血清免疫学分析

自2002年11月起,我国广东、香港、北京等地相继出现了严重急性呼吸综合征(severe acuterespiratory syndrome,SARS)的暴发流行,截至今年5月已累及全球约30个国家和地区.

SARS专题组稿

SARS尸检的肺部病理改变

目的通过研究严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)患者的尸检肺部标本,总结SARS的肺部病变特点及发病机制.方法详细检查SARS患者肺脏标本的大体特点,并用常规方法研究显微光镜下SARS累及各肺叶的病变特点.结果7例SARS患者的双肺均明显膨胀,镜下表现以弥漫性肺泡损伤(DAD)不同时期的病变为主.7例均有肺水肿及透明膜形成,肺水肿尤以早期明显.病程超过3周者开始有肺泡内机化及肺间质纤维化,造成肺泡的纤维性闭塞.几乎每例都可见到小血管内的微血栓和肺出血、散在的小叶性肺炎、肺泡上皮脱落、增生等病变.2例可见曲霉菌感染,1例累及左全肺及右肺部分区域,1例出现在肺门淋巴结.肺门淋巴结多表现为充血、出血及淋巴组织减少,窦组织细胞增多.结论SARS肺可能为SARS病毒造成的弥漫性肺泡损伤,表现为肺泡上皮及毛细血管的严重损伤导致肺水肿和肺泡及细支气管的纤维素性渗出性炎症,出现透明膜,继而出现肺泡内机化及肺泡间隔的成纤维细胞增生,共同使肺泡萎陷、机化,终形成纤维化实变.肺门淋巴组织的减少可能是此病影响免疫系统的又一形态学表现.

临床营养学有关专家对伴有营养不良的"传染性非典型肺炎"患者给予肠内或肠外营养支持的建议

对北京市4月下旬以来SARS疫情不同阶段的分析

北京市的SARS疫情从4月下旬以来经历了3个明显的发展阶段,即4月下旬的迅猛发展阶段,5月第1周的缓慢下降及5月中旬后的快速持续下降阶段.从5月下旬起北京市SARS疫情得到了控制,并维持在一个相当低的水平.本文用几个指标描述了不同疫情发展阶段的主要特点,说明北京市从4月下旬开始采取的干预措施发挥了积极的作用,而信息公开是重要的干预措施之一.信息公开是公众知情权的一个重要内容,它可以使大众了解目前正在发生着什么,政府在干什么以及自己应该干什么;也有助于动员大众为国分忧.大众理解、积极支持政府采取的各种干预活动,并主动参与对于疫情的迅速下降起到了举足轻重的作用.